Pulmonolojide PCR teşhisi neden yapılır? Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) - belirli bulaşıcı ajanların tespitinde yüksek doğrulukta bir yöntem

PCR teşhisi - nedir bu? Polimeraz Zincir Reaksiyonunun özü, enfeksiyöz ajanların DNA'sını hızlı bir şekilde analiz eden biyolojik materyali incelemek için özel tipte markörlerin kullanılması gerçeğinde yatmaktadır. Jinekolojide, çalışılan materyale (kan, idrar, smear vb.) bağlı olarak kadınlarda farklı PCR analiz yöntemleri vardır. Verileri işledikten sonra, patojen türü tespit edilir (bu, "PCR nitel analizi" olarak adlandırılır) ve / veya konsantrasyonları - bu tür çalışmaya denir " PCR nicel analiz".

Analizlerin PCR ile teslimi, diğer analizlerle (immünolojik, bakteriyolojik, mikroskopi) yapmak mümkün olmadığında bulaşıcı patoloji patojenlerini hızlı bir şekilde kontrol etmenizi sağlar. Modern laboratuvar tanısında, PCR en etkili ve En iyi yol mikropların ve virüslerin DNA'sını tespit etmek. Test, jinekolog ve kliniğin diğer doktorlarının sadece kadınlarda ve erkeklerde rahatsızlığın nedenini belirlemesine değil, aynı zamanda sürecin seyrini kontrol etmesine, tedavinin sonucunu doğru bir şekilde değerlendirmesine izin verir.

PCR teşhisi fiyatları

PCR NE GÖSTERİYOR

Kalitatif PCR analizi insan veya hayvan vücudunda bulaşıcı ajanın doğrudan varlığını gösterir. Hem hemen hemen her lokalizasyonun (genital, üretra, orofarenks, vb.) yaymasını hem de PCR kan testlerini geçebilirsiniz. Jinekolojide yayma veya kazıma yoluyla klamidya, üre ve mikoplazmalar, herpes virüsü, HPV ve diğer mikropları kontrol ederler. DNA analizinin sonucu, laboratuvarın "tespit edildi" veya "bulunamadı" sonucu ile hastaya verilir. Kan testi yapılması durumunda, HIV, hepatit, herpes, sitomegalovirüs ve diğer mikroorganizmaları erken bir aşamada tanımlamanıza ve bazı durumlarda genotiplerini belirlemenize ve sayılarını göstermenize olanak tanır.

Kantitatif PCR testleri.
Çalışma, yalnızca istenen genetik materyali hızlı bir şekilde tanımlamayı değil, aynı zamanda DNA'larının konsantrasyonunu da göstermeyi sağlar (kantitatif PCR yöntemi). Patojenlerin tipi ve sayısının belirlenmesi, özellikle örneğin mikoplazma (DNA kantitasyon), üreaplazma tipleme (DNA kantitasyon) veya en önemlisi, genotipleme ve viral yükün kantifikasyonu için analizlerde, tedavinin reçete edilip edilmeyeceğine karar vermede önemlidir. HPV enfeksiyonu.

PCR SONUÇLARI

Tüm söylenenlerden, PCR analizinin ne olduğu ve jinekolojide bu testin avantajlarının ne olduğu açıktır. Bir diğer önemli nüans Bu teşhisin - sonucun kodunun çözülmesi, profesyonel olmayanlar için mevcut ve uygundur. Klinikte ne kadar PCR analizi yapıldığı ve sonucun zamanlaması (laboratuvar genellikle 1-2 gün içinde bilgi verir) göz önüne alındığında, bu tanı yöntemi tüm majör jinekolojik ve diğer enfeksiyonları belirlemek için en iyi seçim olur.

Kadın ve erkek smearleri üzerinde DNA araştırması yapmak için kalitatif bir yöntemle laboratuvar, iki tip sonuca varır:

1. "PCR negatif" - test materyalinde patojen bulunamadı ve
2. "PCR pozitif" - Testte bir mikrop veya virüsün RNA veya DNA'sı bulundu.

Jinekolojide PCR

Kadınlarda bu testleri geçme endikasyonları aşağıdaki gibidir:

• CYBE ile enfeksiyon olasılığı şüphesi;
• Anonim anket;
• Genital sistemden salgıların varlığı, kaşıntı;
• Alt karın bölgesinde ağrı;
• idrar yaparken rahatsızlık;
• Cinsel ilişki sırasında ağrı;
• Flora için smear analizinde yüksek lökositler;
• Rahim ağzında erozyon varlığı;
• Hamilelik planlaması;
• Bir çocuğu gebe bırakma ve taşıma ile ilgili sorunlar;
• Jinekolojik operasyonlara hazırlık, IVF;
• Önleyici amaçlar için.

Moskova'da PCR testleri yapmak için en iyi yer neresidir?
Jinekolojide bu tür teşhisler, modern ve yüksek teknoloji yöntemlerini ifade eder. Enfeksiyonlar için PCR testleri, tam sonuç almak için gerekli her şeye sahip bir klinikte yapılmalıdır. Tıp merkezimizde nitelikli, deneyimli jinekologlar (tedavi odasında ortalama personel değil) tarafından malzeme alınmakta, tek kullanımlık aletler ve özel laboratuvar malzemeleri kullanılmakta ve hastalardan alınan numuneler günlük olarak işe gönderilmektedir. Bu, yalnızca hızlı bir şekilde PCR sonuçları elde etmeyi değil, aynı zamanda güvenilirliklerini de sağlamayı sağlar. İsteğe bağlı olarak - anketin anonimliğini tamamlayın.

PCR'nin maliyeti nedir?
Bu hizmet, başkentin birçok sağlık kurumu tarafından sağlanmaktadır. Maliyet, lokasyondan dahili fiyatlandırma politikasına kadar birçok faktörden etkilenir. Ancak, ortalama minimum rakamı belirleyen objektif faktörler vardır, bunun altında belirtilen faktörler nedeniyle kaliteli ve güvenilir bir hizmet verilememektedir. Moskova kliniklerinde bazı enfeksiyonlar için PCR teşhisinin fiyatı ortalama olarak aşağıdaki gibidir:

• bir PCR yaymasının kalitatif analizi - 400 - 500 ruble;
• PCR yaymasının kantitatif analizi - 600 rubleden (1 birim);
• RNA kazıma teşhisi - 1.000 rubleden (1 birim);
• PCR kan testi kalitatif (örneğin, herpes, HPV, Epstein-Barr virüsü, sitomegalovirüs için) - 450 - 550 ruble, kantitatif - 2.000 rubleden;
• HIV DNA kalitatif (klinik öncesi dönemde HIV varlığının inkarı/doğrulanması) - 2.000 ruble'den, kantitatif RNA - 7.000 ruble'den, direnç - 14.000 ruble'den.

PCR için hazırlık

Doğru, güvenilir araştırma sonuçları elde etmek için kız çocukları ve kadınlar, enfeksiyon testi yaptırmadan önce belirli kurallara uymalıdır:

Test için kliniğe gitmeden 1-2 gün önce cinsel ilişkiyi reddedin;
- smear'den 1.5 - 2 saat önce idrar yapmaktan kaçının;
- dış genital organların hijyenini sade su ile yapmak, deterjanlar, duş almayı hariç tutun;
- vajinal tabletlerin, fitillerin kullanımını hariç tutun;
- adet sırasında PCR testi yapmayın;
- Bakire olmak, muayeneden önce jinekoloğu bu konuda önceden uyarın.

PCR testleri nasıl yapılır

Anonim dahil olmak üzere kliniğimizde PCR'yi geçmek oldukça basittir. Daha sonra, bu çalışmanın en bilgilendirici olduğu kadın ve erkeklerden PCR'nin nasıl ve nereden, hangi yerlerden alındığı hakkında konuşacağız.

Bir kadın durumunda, analiz bir jinekolog tarafından yapılır. Bu genellikle doktorla ilk randevunuzda veya önceden danışmadan enfeksiyon testi yaptırmak için geldiğinizde olur. Her şey arzunuza göre. İsteklerinizi, hangi enfeksiyonlar için test yaptırmak istediğinizi söylüyorsunuz ve bundan sonra materyali alma prosedürü doğrudan başlıyor. Hasta belin altında soyunur, sandalyede bulunur. Doktor, labia minorayı ayırdıktan sonra vajinaya uygun büyüklükte bir spekulum sokar. Jinekologlar, kadınlardan, genellikle serviksten ve üretradan PCR alırlar. İkinci durumda, probun yerleştirilmesinden önce, vajinaya sokulan bir parmakla üretranın kısa süreli bir masajı yapılır. PCR analizinin genç kızlar veya bakire kızlar tarafından alınması durumunda ayna kullanılmaz ve kızlık zarı veya vajina girişindeki bir delikten salgı örnekleri alınır. Ortaya çıkan materyal, özel bir ortam ile sızdırmaz bir test tüpüne yerleştirilir ve laboratuvara gönderilir.

Erkeklerde bu analizi yapmak özellikle zor değildir. Prob üretraya 3-4 cm derinlikte yerleştirilir, saat yönünde ve saat yönünün tersine birkaç kez döndürülür. Malzeme ayrıca daha fazla teşhis için bir test tüpüne yerleştirilir.

Federal Eğitim Ajansı

Durum Eğitim kurumu

Yüce mesleki Eğitim

"Karelya Devlet Pedagoji Akademisi"

Konuyla ilgili kurs:

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve uygulaması

Tamamlayan: öğrenci Koryagina Valeria Alexandrovna

Kontrol eden: Karpikova Natalya Mihaylovna

Petrozavodsk 2013

giriiş

Bölüm 1 Literatür İncelemesi

1.5.4 Plato etkisi

1.5.6 Amplifikasyon

Çözüm

giriiş

Son yirmi yıl, moleküler genetik yöntemlerin biyolojik, tıp ve ziraat bilimlerine yaygın olarak girmesiyle işaretlenmiştir.

1970'lerin başında, moleküler biyolojinin belirli bir mükemmellik derecesine ulaştığı görülüyordu. Bu dönemde mikroorganizmalar moleküler genetik araştırmaların ana konusuydu. Ökaryotlara geçiş, araştırmacılara o zamanlar var olan genetik analiz yöntemleri kullanılarak çözülemeyecek tamamen yeni problemler sundu. Yeni bir deneysel araç olan kısıtlama endonükleazlarının ortaya çıkması nedeniyle moleküler genetiğin gelişiminde bir atılım mümkün oldu. Sonraki yıllarda niteliksel olarak farklı yaklaşımlara dayanan doğrudan DNA analiz yöntemlerinin sayısı hızla artmaya başlamıştır.

Modern teknolojiler birçok durumda daha fazlasına izin verilir derin seviyeçeşitli organizmaların nükleer ve ekstranükleer genomlarının ince yapısal ve işlevsel organizasyonunu incelemeye başlayın. Bu, çeşitli hastalıkların teşhis ve tedavisi için yeni yöntemlerin geliştirilmesi için özellikle önemliydi. Popülasyonların, çeşitlerin ve suşların genetik değişkenliğini belirlemek ve analiz etmek, ekonomik olarak değerli bireyleri belirlemek ve belgelemek, genetiği değiştirilmiş organizmalar yaratmak ve diğer sorunları çözmek için popülasyon biyolojisi ve ıslahında moleküler genetiğin başarılarını kullanma olasılığı daha az önemli değildi.

Her yöntemin kendine göre avantajları ve dezavantajları vardır. Ortaya çıkan tüm sorunları çözebilecek evrensel bir yöntem yoktur. Bu nedenle, çalışma için belirli bir yöntemin seçimi, herhangi bir çalışmanın en önemli aşamalarından biridir. bilimsel çalışma.

Bölüm 1 Literatür İncelemesi

1.1 Polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) keşfinin tarihçesi

1983 yılında K.B. Mullis ve diğerleri, nükleik asitlerin tüm araştırma ve uygulama alanlarında derin bir etkiye sahip olması hedeflenen polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemini yayınladı ve patentini aldı. Bu yöntemin moleküler biyoloji ve genetik için önemi o kadar büyük ve açıktı ki, yedi yıl sonra yazara Nobel Kimya Ödülü verildi.

Yöntemi kullanmaya başlarken, her ısıtma-soğutma döngüsünden sonra, DNA sarmal zincirlerini ayırmak için gerekli olan yüksek sıcaklıkta inaktive edildiğinden, reaksiyon karışımına DNA polimeraz eklenmesi gerekiyordu. Reaksiyon prosedürü nispeten verimsizdi, çok fazla zaman ve enzim gerektiriyordu. 1986'da polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi önemli ölçüde geliştirildi. Termofilik bakterilerden elde edilen DNA polimerazlarının kullanılması önerilmiştir. Bu enzimlerin termostabil olduğu kanıtlandı ve birçok reaksiyon döngüsüne dayanabildi. Kullanımları, PCR'yi basitleştirmeyi ve otomatikleştirmeyi mümkün kıldı. İlk termostabil DNA polimerazlardan biri bakterilerden izole edildi. termos aquaticusve adlandırılmış tak-polimeraz.

Nükleotid dizisi bilinen herhangi bir DNA segmentinin çoğaltılması ve PCR sonrası homojen formda ve hazırlayıcı miktarda elde edilmesi imkanı, PCR'yi kısa DNA fragmanlarının moleküler klonlanması için alternatif bir yöntem haline getirmektedir. Bu durumda, geleneksel klonlamada genetik mühendisliğinde kullanılan karmaşık metodolojik tekniklerin uygulanmasına gerek yoktur. PCR yönteminin geliştirilmesi, moleküler genetiğin ve özellikle genetik mühendisliğinin metodolojik olanaklarını büyük ölçüde genişletti, öyle ki, birçok alanının bilimsel potansiyelini kökten değiştirdi ve güçlendirdi.

1.2 Polimeraz zincir reaksiyonu çeşitleri (PCR)

· iç içe PCR- reaksiyonun yan ürünlerinin sayısını azaltmak için kullanılır. İki çift primer kullanın ve iki ardışık reaksiyon gerçekleştirin. İkinci primer çifti, birinci reaksiyonun ürünü içindeki DNA bölgesini büyütür.

· ters PCR- istenen dizilimdeki sadece küçük bir alan bilindiğinde kullanılır. Bu yöntem, DNA genoma eklendikten sonra komşu dizilerin belirlenmesi gerektiğinde özellikle yararlıdır. Ters PCR'nin uygulanması için, kısıtlama enzimleri ile bir dizi DNA kesimi gerçekleştirilir.<#"justify">polimeraz zincir reaksiyonu astarı

· Gruba özel PCR- akrabalar için PCR<#"center">1.3 Polimeraz zincir reaksiyonu

1980'lerin ortalarında keşfedilen polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), orijinal bir numunenin kopya sayısını birkaç saat içinde milyonlarca kez artırabilir. Reaksiyonun her döngüsü sırasında, orijinal molekülden iki kopya oluşturulur. Sentezlenen DNA kopyalarının her biri, bir sonraki döngüde yeni DNA kopyalarının sentezi için bir şablon görevi görebilir. Böylece döngülerin tekrar tekrar tekrarlanması, kopya sayısının katlanarak artmasına neden olur. Hesaplamalardan, 30 döngü olsa bile, orijinal molekülün kopya sayısının 1 milyardan fazla olacağı sonucu çıkar. Her döngüde tüm amplikonların kopyalanmadığını hesaba katsak bile, buna rağmen toplam kopya sayısı oldukça büyük bir rakamdır.

Polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) her döngüsü aşağıdaki adımlardan oluşur:

· Denatürasyon - Sıcaklıktaki bir artış, çift sarmallı bir DNA molekülünün gevşemesine ve iki tek sarmallı olana ayrılmasına neden olur;

· Tavlama - Sıcaklığın düşürülmesi, primerlerin DNA molekülünün tamamlayıcı bölgelerine bağlanmasına izin verir;

· Uzama - DNA polimeraz enzimi tamamlayıcı zinciri tamamlar.

Seçilen parçanın amplifikasyonu için belirli bir DNA bölgesini çevreleyen iki oligonükleotid primeri (tohum) kullanılır. Primer odaklı 3 - birbirine doğru ve amplifiye edilmesi gereken dizi yönünde biter. DNA polimeraz, primerlerden başlayarak birbirini tamamlayan DNA zincirlerinin sentezini (tamamlanmasını) gerçekleştirir. DNA sentezi sırasında, primerler fiziksel olarak yeni sentezlenen DNA moleküllerinin zincirine eklenir. Primerlerden biri kullanılarak oluşturulan DNA molekülünün her bir zinciri, diğer primer kullanılarak tamamlayıcı bir DNA zincirinin sentezi için bir şablon görevi görebilir.

1.4 Bir polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) yürütülmesi

Polimeraz zincir reaksiyonu, kullanılan termal döngüleyici (amplifikatör) ile boyut olarak uyumlu özel ince duvarlı polipropilen test tüplerinde gerçekleştirilir - polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) aşamalarının sıcaklık ve zaman özelliklerini kontrol eden bir cihaz .

1.5 Polimeraz zincir reaksiyonu yönteminin prensibi

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), belirli bir DNA dizisini birkaç saat içinde milyarlarca kez izole edip çoğaltabilen bir in vitro DNA amplifikasyon yöntemidir. Genomun kesin olarak tanımlanmış bir bölgesinin çok sayıda kopyasını elde etme yeteneği, mevcut bir DNA örneğinin çalışılmasını büyük ölçüde basitleştirir.

Bir polimeraz zincir reaksiyonu gerçekleştirmek için bir dizi koşulun karşılanması gerekir:

1.5.1 Reaksiyon karışımında birkaç bileşenin bulunması

Reaksiyon (PCR) karışımının ana bileşenleri şunlardır: Tris-HCl, KCl, MgCl 2, bir nükleotid trifosfat (ATP, GTP, CTP, TTP), primerler (oligonükleotitler), analiz edilen DNA hazırlığı, termostabil DNA polimeraz karışımı. Reaksiyon karışımının bileşenlerinin her biri doğrudan polimeraz zincir reaksiyonunda (PCR) yer alır ve reaktiflerin konsantrasyonu doğrudan amplifikasyonun gidişatını etkiler.

· Tris-HCl - reaksiyon karışımının pH'ını belirler, bir tampon kapasitesi oluşturur. DNA polimerazın aktivitesi ortamın pH'ına bağlıdır, dolayısıyla pH değeri polimeraz zincir reaksiyonunun seyrini doğrudan etkiler. Genellikle pH değeri 8 - 9.5 aralığındadır. Yüksek pH, sıcaklık arttıkça Tril-HCl tamponunun pH'ının düşmesi gerçeğinden kaynaklanmaktadır.

· KCl - 50 mm'ye kadar potasyum klorür konsantrasyonu, denatürasyon ve tavlama işlemlerinin seyrini etkiler, 50 mm'nin üzerindeki konsantrasyon DNA polimerazı inhibe eder.

· MgCl 2- DNA polimeraz Mg olduğu için 2+ - bağımlı enzim, daha sonra magnezyum iyonlarının konsantrasyonu enzimin aktivitesini etkiler (Mg 2+NTP ile kompleksler oluşturur - polimeraz için substrat olan bu komplekslerdir). Yüksek konsantrasyon, spesifik olmayan amplifikasyonda bir artışa yol açar ve düşük bir konsantrasyon, reaksiyonun inhibisyonuna yol açar, optimum (çeşitli polimerazlar için) 0,5 - 5 mM bölgesindedir. Ek olarak, magnezyum tuzlarının konsantrasyonu, denatürasyon ve tavlama işlemlerinin seyrini etkiler - Mg konsantrasyonunda bir artış 2+DNA'nın erime sıcaklığında bir artışa neden olur (yani, çift sarmallı DNA sarmallarının %50'sinin tek sarmallı sarmallara ayrıldığı sıcaklık).

· NTP - nükleotid trifosfatlar, nükleik asitlerin doğrudan monomerleridir. Zincir sonlanmasını önlemek için dört nükleotid trifosfatın hepsinin eşit oranda olması önerilir. Bu bileşenlerin reaksiyon karışımındaki düşük konsantrasyonu, tamamlayıcı DNA zincirinin yapımında hata olasılığını artırır.

· Primerler - En uygun olanı, erime noktası farkı 2 - 4'ten fazla olmayan primerlerin kullanılmasıdır. Ö C. Bazen 4°C sıcaklıkta uzun süreli depolama sırasında Ö Çok sayıda donma - çözülme ile veya sonrasında, primerler ikincil yapılar - dimerler oluşturarak PCR'nin etkinliğini azaltır. Bu sorunun ortadan kaldırılması su banyosunda inkübasyona indirgenmiştir (T=95 Ö C) 3 dakika ve ardından 0°'ye hızlı soğutma İTİBAREN.

· DNA preparasyonları - DNA preparasyonunun (matris) miktarı ve kalitesi, polimeraz zincir reaksiyonunun seyrini ve parametrelerini doğrudan etkiler. Fazla DNA örneği, polimeraz zincir reaksiyonunu (PCR) inhibe eder. kirlilikler çeşitli maddeler DNA preparasyonunda bulunan , polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) etkinliğini de azaltabilir: sodyum asetat, sodyum klorür, izopropanol, etanol, heparin, fenol, üre, hemoglobin, vb.

· DNA polimeraz - az miktarda DNA polimeraz kullanıldığında, parçaların boyutuyla doğru orantılı olarak nihai ürünün sentezinde bir azalma gözlenir. 2-4 kat fazla polimeraz, dağınık spektrumların ve 4-16 kat düşük moleküler ağırlıklı spesifik olmayan spektrumların ortaya çıkmasına neden olur. Kullanılan konsantrasyon aralığı, 25 µl PCR karışımı cinsinden 0.5 - 1.5 birim aktivitedir.

PCR karışımının ana bileşenlerine ek olarak, PCR'nin kalitatif ve kantitatif göstergelerini iyileştiren bir dizi ek madde kullanılır: asetamid (% 5) - ana bileşenlerin çözünürlüğünde bir artış; betain (sodyum tuzu) - DNA polimerazın stabilizasyonu, DNA'nın erime noktasının düşürülmesi, erime noktasının eşitlenmesi; sığır albümini (10-100 μg / ml) - DNA polimerazın stabilizasyonu; dimetil sülfoksit (%1-10) - ana bileşenlerin çözünürlüğünün arttırılması; formamid (%2-10) - tavlamanın özgüllüğünde bir artış; gliserol (% 15-20) - enzimin termal stabilitesinde bir artış, bir DNA örneğinin denatürasyon sıcaklığında bir azalma; amonyum sülfat - denatürasyon ve tavlama sıcaklığını düşürmek.

1.5.2 Döngü ve sıcaklık

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) programının genel görünümü aşağıdaki gibidir:

sahne. DNA preparasyonunun uzun süreli birincil denatürasyonu.1 döngü

sahne. DNA preparasyonunun hızlı denatürasyonu. Astar tavlama. Uzama.30 - 45 döngü.

sahne. Uzun süreli uzama. Reaksiyon karışımının soğutulması 1 döngü.

Aşamanın her elemanı - denatürasyon, tavlama, uzama - bireysel sıcaklık ve zaman özelliklerine sahiptir. Her bir elemanın sıcaklık ve akış süresi parametreleri, amplifikasyon ürünlerinin niteliksel ve niceliksel göstergelerine göre ampirik olarak seçilir.

Denatürasyon. Sırasında verilen eleman Polimeraz zincir reaksiyonu, çift sarmallı bir DNA molekülünü iki tek sarmallı olana böler. Denatürasyonun sıcaklık parametreleri 90 - 95 aralığındadır. Ö C, ancak yüksek guanin ve sitozin içeriğine sahip bir DNA örneği durumunda, sıcaklık 98'e yükseltilmelidir. Ö C. Denatürasyon sıcaklığı, DNA ipliklerini tamamen denatüre etmek - bölmek ve "ani soğuma" veya hızlı tavlamadan kaçınmak için yeterli olmalıdır, ancak termostabil DNA polimeraz yüksek sıcaklıklarda daha az kararlıdır. Bu nedenle, primer/numune oranı (DNA hazırlama) için optimal denatürasyon sıcaklığı parametrelerinin seçimi, amplifikasyon için önemli bir koşuldur. İlk adımda denatürasyon sıcaklığı 95'in üzerindeyse Ö C, birincil denatürasyondan sonra reaksiyon karışımına DNA polimeraz eklenmesi önerilir. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) sırasında aşamanın bu elemanının süresi, tam DNA denatürasyonu için yeterli olmalıdır, ancak aynı zamanda belirli bir sıcaklıkta DNA polimerazın aktivitesini önemli ölçüde etkilememelidir.

Tavlama. Tavlama sıcaklığı (T a ) polimeraz zincir reaksiyonunun en önemli parametrelerinden biridir. Her özel primer için tavlama sıcaklığı ayrı ayrı seçilir. Primerin uzunluğuna ve nükleotid bileşimine bağlıdır. Genellikle 2 - 4 daha düşüktür Ö Erime noktası değerinden (T m ) astar. Sistemin tavlama sıcaklığı optimumun altındaysa, spesifik olmayan amplifiye fragmanların sayısı artar ve tersine, daha yüksek bir sıcaklık amplifiye edilen ürünlerin sayısını azaltır. Bu durumda, spesifik amplikonların konsantrasyonu, polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) inhibisyonuna kadar keskin bir şekilde düşebilir. Tavlama süresinin arttırılması, spesifik olmayan amplikonların sayısında da bir artışa yol açar.

Uzama. Tipik olarak, her bir termostabil DNA polimeraz türü, ayrı bir sıcaklık optimum aktiviteye sahiptir. Bir enzim tarafından tamamlayıcı bir DNA zincirinin sentez hızı da her polimeraza özgü bir değerdir (ortalama olarak, saniyede 30-60 nükleotid veya dakikada 1-2 bin bazdır), bu nedenle uzama süresi bağlı olarak seçilir. DNA polimerazın tipine ve amplifiye edilen bölgenin uzunluğuna bağlıdır.

1.5.3 Primer seçiminin temel prensipleri

Bir PCR test sistemi oluştururken, ana görevlerden biri, bir dizi kriteri karşılaması gereken doğru primer seçimidir:

Primerler spesifik olmalıdır. 3'e özellikle dikkat edilir. - primerlerin uçları, çünkü onlardan Taq polimeraz tamamlayıcı DNA zincirini tamamlamaya başlar. Spesifiklikleri yetersizse, reaksiyon karışımı ile test tüpünde, yani spesifik olmayan DNA sentezi (kısa veya uzun parçalar) ile istenmeyen süreçlerin meydana gelmesi muhtemeldir. Elektroforezde ağır veya hafif ek bantlar şeklinde görülebilir. Spesifik bir amplifikasyon ürününü sentezlenmiş yabancı DNA ile karıştırmak kolay olduğundan, bu, reaksiyonun sonuçlarını değerlendirmeyi zorlaştırır. Primerlerin ve dNTP'lerin bir kısmı, spesifik olmayan DNA'nın sentezi için tüketilir ve bu da önemli bir duyarlılık kaybına yol açar.

Primerler dimerler ve döngüler oluşturmamalıdır, yani. Primerlerin kendilerine veya birbirlerine tavlanmasıyla stabil çift şerit oluşturulmamalıdır.

1.5.4 Plato etkisi

Spesifik amplifikasyon ürünlerinin üssel olarak biriktirme sürecinin sadece sınırlı bir zaman aldığı ve ardından etkinliğinin kritik bir şekilde düştüğü belirtilmelidir. Bu sözde "plato" etkisinden kaynaklanmaktadır.

dönem etkisi plato amplifikasyonun son döngülerinde PCR ürünlerinin birikme sürecini tanımlamak için kullanılır.

Amplifikasyon reaksiyonunun koşullarına ve döngü sayısına bağlı olarak, etkinin elde edildiği anda plato substrat kullanımı (dNTP'ler ve primerler), reaktan stabilitesi (dNTP'ler ve enzim), pirofosfatlar ve DNA dupleksleri dahil olmak üzere inhibitörlerin miktarı, spesifik olmayan ürünler veya primer dimerler tarafından reaktanlar için rekabet, spesifik ürün konsantrasyonu ve yüksek konsantrasyon amplifikasyon ürünleri.

Hedef DNA'nın başlangıç ​​konsantrasyonu ne kadar düşükse, reaksiyon riski o kadar yüksek olur. plato". Bu nokta, spesifik amplifikasyon ürünlerinin sayısı analiz edilmeye yeterli olmadan önce ortaya çıkabilir. Yalnızca iyi optimize edilmiş test sistemleri bunu önleyebilir.

1.5.5 Biyolojik materyalden numune hazırlama

Görevlere bağlı olarak DNA ekstraksiyonu için farklı teknikler kullanılır. Özleri, biyolojik bir üründen DNA'nın ekstraksiyonunda (özütlenmesinde) ve PCR için uygun bir saflıkta bir DNA preparasyonu elde etmek için yabancı safsızlıkların uzaklaştırılmasında veya nötralizasyonunda yatmaktadır.

Marmur tarafından açıklanan saf bir DNA hazırlığı elde etme yöntemi standart olarak kabul edilir ve şimdiden klasik hale gelmiştir. Enzimatik proteolizi, ardından deproteinizasyonu ve alkolle DNA yeniden çökelmesini içerir. Bu yöntem, saf bir DNA hazırlığı elde etmeyi mümkün kılar. Ancak oldukça zahmetlidir ve fenol ve kloroform gibi agresif ve keskin kokulu maddelerle çalışmayı içerir.

Şu anda popüler olan yöntemlerden biri Boom ve arkadaşları tarafından önerilen DNA ekstraksiyon yöntemidir. Bu yöntem, hücre lizizi için güçlü bir kaotropik ajan olan guanidin tiyosiyanatın (GuSCN) kullanımına ve ardından bir taşıyıcı (cam boncuklar, diyatomlu toprak, cam süt, vb.) üzerinde DNA sorpsiyonuna dayanır. Yıkamadan sonra, DNA, bir elüsyon tamponu kullanılarak kolayca çıkarılabileceği taşıyıcı üzerinde adsorbe edilen numunede kalır. Yöntem uygun, teknolojik olarak gelişmiş ve amplifikasyon için numune hazırlamaya uygundur. Bununla birlikte, taşıyıcı üzerindeki geri dönüşü olmayan sorpsiyon nedeniyle ve ayrıca çok sayıda yıkama sırasında DNA kayıpları mümkündür. Bu, numunede az miktarda DNA ile çalışırken özellikle önemlidir. Ayrıca, eser miktarda GuSCN bile PCR'yi inhibe edebilir. Bu nedenle, bu yöntemi kullanırken, sorbentin doğru seçimi ve teknolojik nüansların dikkatli bir şekilde gözlenmesi çok önemlidir.

Başka bir numune hazırlama yöntemi grubu, camdan farklı olarak DNA'yı adsorbe etmeyen, bunun tersi de reaksiyona müdahale eden safsızlıkları olan Chilex tipi iyon değiştiricilerin kullanımına dayanmaktadır. Kural olarak, bu teknoloji iki aşama içerir: bir iyon değiştirici üzerinde numune kaynatma ve safsızlıkların adsorpsiyonu. Yöntem, yürütme kolaylığı nedeniyle son derece çekici. Çoğu durumda, klinik malzeme ile çalışmak için uygundur. Ne yazık ki, bazen iyon değiştiriciler kullanılarak giderilemeyen safsızlıklara sahip örnekler vardır. Ayrıca bazı mikroorganizmalar basit kaynatma ile yok edilemez. Bu durumlarda, numune işlemenin ek aşamalarını tanıtmak gerekir.

Bu nedenle, numune hazırlama yönteminin seçimi, amaçlanan analizlerin amaçlarının anlaşılmasıyla ele alınmalıdır.

1.5.6 Amplifikasyon

Amplifikasyon reaksiyonunu gerçekleştirmek için reaksiyon karışımını hazırlamak ve analiz edilen DNA örneğini buna eklemek gerekir. Bu durumda, primer tavlamanın bazı özelliklerini dikkate almak önemlidir. Gerçek şu ki, bir kural olarak, analiz edilen biyolojik numunede, reaksiyonda kullanılan primerlerin kısmi ve bazı durumlarda önemli homolojiye sahip olduğu çeşitli DNA molekülleri vardır. Ek olarak, primerler, primer-dimerler oluşturmak üzere birbirlerine tavlanabilir. Her ikisi de yan (spesifik olmayan) reaksiyon ürünlerinin sentezi için önemli miktarda primer tüketimine yol açar ve sonuç olarak sistemin hassasiyetini önemli ölçüde azaltır. Bu, elektroforez sırasında reaksiyon sonuçlarını okumayı zorlaştırır veya imkansız hale getirir.

1.6 Standart PCR reaksiyon karışımının bileşimi

x PCR tamponu (100 mM Tris-HCl solüsyonu, pH 9.0, 500 mM KCl solüsyonu, 25 mM MgCl2 solüsyonu) ) …….2.5 µl

Su (MilliQ) …………………………………………………….18.8 µl

Nükleotid trifosfatların (dNTP'ler) bir karışımı

her birinin mM çözeltisi……………………………………….……….0.5 µl

Primer 1 (10 mM solüsyon) ……………………………………….….1 µl

Primer 2 (10 mM solüsyon) ………………………………………….….1 µl

DNA polimeraz (5 ünite / µl) ………………………………………… 0,2 µl

DNA örneği (20 ng/µl) ………………………………………..1 µl

1.7 Reaksiyon sonuçlarının değerlendirilmesi

PCR sonuçlarını doğru bir şekilde değerlendirmek için bu yöntemin nicel olmadığını anlamak önemlidir. Teorik olarak, tek hedef DNA moleküllerinin amplifikasyon ürünleri 30-35 döngüden sonra elektroforez ile tespit edilebilir. Ancak pratikte bu, yalnızca reaksiyonun yaşamda pek sık rastlanmayan ideale yakın koşullar altında gerçekleştiği durumlarda yapılır. DNA preparasyonunun saflık derecesi, amplifikasyonun verimliliği üzerinde özellikle büyük bir etkiye sahiptir; reaksiyon karışımında, bazı durumlarda kurtulmak son derece zor olabilen belirli inhibitörlerin varlığı. Bazen onların varlığından dolayı onbinlerce hedef DNA molekülünü çoğaltmak bile mümkün olmamaktadır. Bu nedenle, başlangıçtaki hedef DNA miktarı ile nihai amplifikasyon ürünleri miktarı arasında genellikle doğrudan bir ilişki yoktur.

Bölüm 2: Polimeraz Zincir Reaksiyonunun Uygulamaları

PCR birçok alanda analiz ve bilimsel deneylerde kullanılmaktadır.

kriminalistik

PCR, sözde "genetik parmak izlerini" karşılaştırmak için kullanılır. Suç mahallinden bir genetik materyal örneğine ihtiyacımız var - kan, tükürük, meni, saç, vs. Şüphelinin genetik materyali ile karşılaştırılır. Teorik olarak çok az miktarda DNA yeterlidir - bir kopya. DNA parçalar halinde kesilir, ardından PCR ile amplifiye edilir. Parçalar, DNA elektroforezi ile ayrılır. DNA bantlarının konumunun ortaya çıkan resmine genetik parmak izi denir.

babalık kurmak

PCR ile amplifiye edilen DNA fragmanlarının elektroforez sonuçları. Baba. Çocuk. Anne. Çocuk, her iki ebeveynin genetik damgasının bazı özelliklerini miras aldı ve bu da yeni, benzersiz bir damga verdi.

"Genetik parmak izleri" benzersiz olsa da, aile bağları yine de bu tür birkaç baskı yaparak kurulabilir. Aynı yöntem, organizmalar arasında evrimsel ilişkiler kurmak için küçük değişikliklerle uygulanabilir.

Tıbbi teşhis

PCR, kalıtsal ve viral hastalıkların teşhisini önemli ölçüde hızlandırmayı ve kolaylaştırmayı mümkün kılar. İlgilenilen gen, uygun primerler kullanılarak PCR ile amplifiye edilir ve daha sonra mutasyonları belirlemek için sekanslanır. Viral enfeksiyonlar, enfeksiyondan hemen sonra, hastalığın semptomları ortaya çıkmadan haftalar veya aylar önce tespit edilebilir.

Kişiselleştirilmiş tıp

Bazen ilaçlar bazı hastalar için toksik veya alerjiktir. Bunun nedenleri kısmen, ilaçların ve türevlerinin duyarlılığı ve metabolizmasındaki bireysel farklılıklardır. Bu farklılıklar genetik düzeyde belirlenir. Örneğin, bir hastada belirli bir sitokrom diğerinde daha aktif olabilir - daha az. Belirli bir hastanın ne tür bir sitokroma sahip olduğunu belirlemek için ilacı kullanmadan önce bir PCR analizi yapılması önerilir. Bu analize ön genotipleme denir.

gen klonlama

Gen klonlama, genleri izole etme ve genetik mühendisliği manipülasyonlarının bir sonucu olarak, belirli bir genin ürününün büyük bir miktarını elde etme işlemidir. PCR, daha sonra bir vektöre, yabancı geni aynı organizmaya veya büyümesi kolay başka bir organizmaya taşıyan bir DNA parçasına yerleştirilen bir geni amplifiye etmek için kullanılır. Vektörler olarak örneğin plazmitler veya viral DNA kullanılır. Genlerin yabancı bir organizmaya yerleştirilmesi genellikle bu genin bir ürününü - RNA'yı veya çoğu zaman bir proteini elde etmek için kullanılır. Bu şekilde endüstriyel miktarlarda kullanılmak üzere birçok protein elde edilir. tarım, ilaç vb.

DNA dizilimi

Floresan veya radyoaktif olarak etiketlenmiş dideoksinükleotidlerin kullanıldığı dizileme yönteminde, PCR ayrılmaz bir parçadır, çünkü polimerizasyon sırasında bir floresan veya radyoaktif etiketle etiketlenmiş nükleotit türevleri DNA zincirine eklenir. Bu, reaksiyonu durdurur ve jelde sentezlenen ipliklerin ayrılmasından sonra spesifik nükleotitlerin konumlarının belirlenmesine izin verir.

mutajenez

Şu anda, PCR ana mutajenez yöntemi haline geldi. PCR kullanımı, mutajenez prosedürünü basitleştirmeyi ve hızlandırmayı ve aynı zamanda daha güvenilir ve tekrarlanabilir hale getirmeyi mümkün kıldı.

PCR yöntemi, bu çalışmadan 40 yıl önce parafine gömülmüş insan servikal neoplazma biyopsilerinin kesitlerinde insan papilloma virüsü sekanslarının varlığını analiz etmeyi mümkün kılmıştır. Üstelik, PCR yardımıyla, 7 bin yıllık insan beyninin fosil kalıntılarından mitokondriyal DNA parçalarını çoğaltmak ve klonlamak mümkün oldu!

Bireysel insan spermatozoalarının lizatlarında, farklı homolog olmayan kromozomlar üzerinde bulunan iki lokusun aynı anda analiz edilmesi olasılığı gösterildi. Bu yaklaşım, ince genetik analiz ve kromozomal rekombinasyon, DNA polimorfizmi, vb. çalışmaları için benzersiz bir fırsat sağlar. Bireysel spermleri analiz etme yöntemi, haploid hücrelerin HLA tiplendirilmesi babalık belirlemeyi veya tanımlamayı mümkün kıldığı için adli tıpta hemen pratik uygulama buldu. bir suçlu (HLA kompleksi, insan majör histo-uyumluluk kompleksinin bir dizi gendir; HLA kompleksinin lokusları, yüksek omurgalılarda bilinenlerin en polimorfikleridir: bir tür içinde, her lokusta, alışılmadık derecede fazla sayıda farklı aleller - aynı genin alternatif formları).

PCR kullanarak, çalışılan hücrelerin genomunun önceden belirlenmiş bir bölgesinde yabancı genetik yapıların entegrasyonunun doğruluğunu belirlemek mümkündür. Toplam hücresel DNA, biri yerleştirme noktasının yakınındaki konakçı DNA'nın yerine tamamlayıcı olan ve diğeri antiparalel DNA zincirindeki entegre fragmanın dizisine tamamlayıcı olan iki oligonükleotit primeri ile tavlanır. Önerilen yerleştirme yerinde değişmemiş bir kromozomal DNA yapısı durumunda polimeraz zincir reaksiyonu, belirsiz bir boyutta tek iplikli DNA parçalarının oluşumuna yol açar ve planlı bir yerleştirme durumunda, bilinen bir çift iplikli DNA parçalarının oluşumuna yol açar. boyut, iki primerin tavlama bölgeleri arasındaki mesafe ile belirlenir. Ayrıca, ilk durumda genomun analiz edilen bölgesinin amplifikasyon derecesi, döngü sayısına doğrusal olarak ve ikincisinde - üstel olarak bağlı olacaktır. Önceden belirlenmiş bir boyuttaki amplifiye edilmiş bir fragmanın PCR sırasında üstel birikimi, bir DNA preparasyonunun elektroforetik fraksiyonlanmasından sonra görsel olarak gözlemlenmesini ve belirli bir kromozomal DNA bölgesine yabancı bir dizinin eklenmesi hakkında kesin bir sonuca varılmasını mümkün kılar.

Çözüm

PCR yöntemi şu anda çeşitli bulaşıcı hastalıkların teşhisi için bir yöntem olarak en yaygın olarak kullanılan yöntemdir. PCR, analiz için alınan örnek patojenin sadece birkaç DNA molekülünü içeriyor olsa bile, enfeksiyonun etiyolojisini belirlemenize olanak tanır. PCR yaygın olarak kullanılmaktadır. erken teşhis HIV enfeksiyonları viral hepatit vb. Bugüne kadar, PCR kullanılarak tespit edilemeyen hemen hemen hiçbir enfeksiyöz ajan yoktur.

kullanılmış literatür listesi

1.Padutov V.E., Baranov O.Yu., Voropaev E.V. Moleküler - genetik analiz yöntemleri. - Minsk: Unipol, 2007. - 176 s.

2.PCR "gerçek zamanlı" / Rebrikov D.V., Samatov G.A., Trofimov D.Yu. ve benzeri.; ed. b. n. D.V. Rebrikov; önsöz Los Angeles Österman ve acad. RAS ve RAAS E.D. Sverdlov; 2. baskı, rev. ve ek - M.: BİNOM. Bilgi Laboratuvarı, 2009. - 223 s.

.Patruşev L.I. Yapay genetik sistemler. - E.: Nauka, 2005. - 2 ton olarak

.B. Glick, J. Pasternak Moleküler biyoteknoloji. İlkeler ve uygulama 589 sayfa, 2002

5.Shchelkunov S.N. genetik mühendisliği. - Novosibirsk: Kardeş. univ. yayınevi, 2004. - 496 s.

Düzenleyen A.A. Vorbyeva "Polimeraz zincir reaksiyonu ve dermatovenereolojide teşhis için uygulanması"; Tıbbi Haber Ajansı - 72 sayfa

http://ru. wikipedia.org

http://bilgin. google.ru

.

.

http://www.med2000.ru/n1/n12. htm

12.http://prizvanie. su/ - Medikal dergi

özel ders

Bir konuyu öğrenmek için yardıma mı ihtiyacınız var?

Uzmanlarımız, ilginizi çeken konularda tavsiyelerde bulunacak veya özel ders hizmetleri sunacaktır.
Başvuru yapmak bir danışma alma olasılığı hakkında bilgi edinmek için şu anda konuyu belirterek.

PCR teşhisi(polimeraz zincir reaksiyonu), immünolojik ve mikrobiyolojik tanı yöntemleri ile reaksiyon olmadığında, zaten geleneksel çalışmalarla kombinasyon halinde hastalığın aktif evresini tespit etmek için kullanılır.

Belirli bir süre PCR teşhisi sadece bilimsel amaçlarla kullanılmış ve ancak 20. yüzyılın sonu ve 21. yüzyılın başlarından itibaren bu analiz, çeşitli alanlarda büyük fayda sağlayan bir tür “altın standart” haline gelmiştir. tıp.

PCR teşhisinin özü nedir?

PCR teşhisi, antikor izlerini (AT) tespit edebilenin aksine, sadece patolojik durumun temel nedenlerini belirlemekle kalmaz, aynı zamanda laboratuvardaki enzimleri kullanarak belirli bir spesifik bölgede DNA veya RNA'nın varlığını da tespit eder.

PCR analizi son derece doğrudur, yanlış reaksiyon olasılığını ortadan kaldırır ve inceleme için bir damardan kan alınması gerekmez, az miktarda doku örneği, biyolojik sıvı yeterlidir.

İddia edilen bulaşıcı ajanı içeren test için materyalin biyolojik ortamının yukarıdaki varyantına, doktorun kararı ile aynı anda birkaç seçenek atanabilir, bunlar arasında şunlar olabilir:

• lekeleme(cinsel organlardan deşarj);
• mukozadan kazıma(ağız, burun, cinsel organlar);
• tükürük balgam veya plevral sıvı;
• prostat suyu, bir haşerenin varlığı için prostat salgısının incelenmesi;
• plasenta dokusu veya amniyotik sıvı;
• genel idrar analizi tortuyu incelemek (santrifüjden sonra), gerekirse Mycobacterium tuberculosis'i saptamak için;
• Beyin omurilik sıvısı merkezi sinir sisteminin bulaşıcı lezyonlarının tespiti için;
• hücre veya doku topluluğu(biyopsi) karaciğer, on iki parmak bağırsağı, mide vb.

Bu numuneler özel bir reaktöre yerleştirilir ve çalışılan DNA fragmanlarının tekrarlanan iki katına çıkarılması (amplifikasyonu), tekrarlanan replikasyon döngüleri ve sentez için spesifik enzimlerin eklenmesiyle denatürasyon yoluyla analiz edilir. Zincirleme reaksiyon tipine göre bu yöntem, DNA veya RNA'nın tipini ve bireysel özelliklerini tanımlar. Sonuçta PCR işlemi Karşılaştırmalı analiz klonlanmış genetik materyal, canlı bir virüsün tek hücrelerini bile tanımlamanıza, üreaplazmayı mikoplazmadan veya kolayca ayırt etmenize olanak tanır.

PCR teşhisinin avantajları ve dezavantajları

Bu PCR teşhisinin hem avantajları hem de çeşitli dezavantajları vardır.

Teşhisin faydaları:

• patojenin tanımı, DNA veya RNA'nın atipik bir bölümünün genetik materyalindeki varlığının doğrudan bir göstergesini verir;
• PCR teşhisi, test materyalinde yalnızca belirli bir virüs veya bakterinin özelliği olan nükleik asit parçacıklarının (DNA veya RNA fragmanları) varlığı nedeniyle %100 doğruluk sağlar;
• diğer tanı yöntemlerine kıyasla PCR sisteminin yüksek duyarlılığı. Bir patojenin varlığını belirlemek için PCR analizi, canlı bir virüsün bir hücresi (bir numunede 10-100 hücre) için yeterlidir, bu da ciddi semptomların yokluğunda hastalığın erken bir aşamasında patojenik bir mikroorganizmanın tespit edilmesini mümkün kılar. , ve gelişmiş formlarda;
• yüksek teknolojili otomatik PCR amplifikasyonu, numune alma gününde test yaparak analiz hızını artırır (tanı için 4-6 saatten fazla ayırmaz). Bu üretkenliği artırır ve kültür araştırma yöntemlerine göre üstünlük sağlar;
• analizin çok yönlülüğü, çeşitli yollarla alınan DNA veya RNA'nın genetik materyalini kullanarak, bir biyolojik numuneden birkaç patojeni tespit etmeyi mümkün kılar.

Dezavantajlardan bahsetmişken, o zaman, PCR sisteminin hassasiyeti göz önüne alındığında, hoş olmayan anlardan biri:

• mikroorganizmaların değişkenliği. Dezavantajı, bir mutasyonun mikroorganizmaların doğasında olması ve patojenin incelenen genotipinde bir değişikliğe yol açmasıdır. Ve genomun amplifiye bölgesindeki PCR test sistemi, insan bağışıklık sisteminin onu tanımaması gibi, halihazırda gelişen bir patojenin hibridini yakalayamaz, dolayısıyla bulaşıcı bir hastalığın varlığını belirlemeye yönelik herhangi bir tepki olmayacaktır. Ancak bunun için PCR yöntemini geliştirmek için çeşitli geliştirmeler yapılıyor;
• yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuç alma olasılığı. PCR teşhisinin aşamalarından birinde yanlış sonuçlarla karşılaşmamak için, materyali alma kurallarına uyularak, süreci ihlal etmeden dikkatli bir şekilde gerçekleştirilmelidir. Numuneler yapılarını değiştirebilir ve hatta bozulabilir, bu da yanlış negatif veya yanlış pozitif sonuca yol açabilir. Böyle bir sonucun, enfeksiyon zaten öldürüldüğünde olabileceği, ancak ölü hücrelerin kendilerini yenilemek için zamanları olmadığı ve klonlama sırasında dikkate alındığı anlaşılmalıdır. Bu nedenle, üzerinde erken tarihler tedaviden sonra diğer yöntemler kullanılır (örneğin) ve aktif olmayan patojenlerin vücuttan tamamen ortadan kaldırılmasından sonra, PCR ile bir analiz-kontrol gerçekleştirilir. Ve zaten katılan doktor, "lehte" ve "aleyhte" tüm argümanları dikkate alarak tedavinin uygunluğu konusunda nihai kararı verir.

PCR teşhisi için hazırlık ve test koşulları

PCR için basit hazırlığa dikkat etmek önemlidir, bunun için ilgili doktorun tüm tavsiyelerine kesinlikle uymak ve daha doğru bir sonuç için en az birkaç inkar edilemez koşulu gözlemlemek gerekir.

İnceleme için materyal örnekleme yöntemine bağlı olarak, şu unutulmamalıdır:

• venöz kan ile teşhis için hasta, sıvı kullanımı bile hariç, aç karnına test edilmelidir;
• leke vermek En az birkaç gün cinsel temastan kaçınmak gerekir, genital organların hijyenini akşamları yapmasına izin verilir, ancak test günü değil. Aşağıdakileri dikkate alarak çalışma için en uygun zamanı seçmeye değer: adet döngüsünden iki gün önce veya sonra;
• herhangi bir örnekleme yöntemi için antibakteriyel kullanımının tesliminden birkaç hafta önce durmalıdır ilaçlar, sonucun güvenilirliğini etkileyebileceğinden, daha önce doktorunuza danışarak;
• idrar tahlili için patojenlerin varlığını belirlemek için sadece sterilite ve hijyeni değil, aynı zamanda daha doğru bilgi taşıyan araştırma için toplanan materyalin kalitesini de gözlemlemek gerekir. Bu nedenle, son idrara çıkmadan idrarın toplanmasına kadar 2-3 saat beklemek veya bir enflamatuar sürecin varlığını gösterme olasılığı daha yüksek olan bir sabah numunesi kullanmak kabul edilebilir.

PCR kullanımı ve tespit edilen hastalıklar

Birçok hastalığa neden olan ajanları aramak için yukarıdaki öneriler göz ardı edilmemelidir ve bir doktor tarafından PCR tanı yöntemini kullanan bir doktor tarafından reçete edilen muayene, sadece bir yetişkini değil, aynı zamanda rahimdeki küçük, doğmamış bir çocuğu da ciddi komplikasyonlardan koruyabilir. .

Gerçekten de, belirli virüs türlerinden (HPV) en sık muzdarip olan, serviks kanseri veya kısırlık olasılığını önemli ölçüde artıran nüfusun kadın yarısıdır. Ve olasılık göz önüne alındığında olumsuz etki hamilelik seyri ve fetüsün gelişimi hakkında, cinsel yolla veya immün yetmezlik ile bulaşan çeşitli mikroorganizma gruplarının, birbirleriyle çok bağlantılı oldukları için (örneğin, , TORCH enfeksiyonları ve CYBE). Ancak polimeraz zincir reaksiyonu, kadın vücudundaki spesifik viral DNA tipini belirleyerek yabancı bir yapı bulabilmektedir.

Analiz sonuçlarının deşifre edilmesi, hastalıkların varlığını doğrulamanıza veya çürütmenize izin verir. Çok çeşitli patojenleri kapsayan böyle bir analiz, aşağıdakiler gibi birçok enfeksiyonun zamanında tespiti için çok önemlidir:

• HIV enfeksiyonu tespiti. Öncelikli olarak bağışıklık sisteminin yüzeyinde bulunan ve CD4 reseptörleri üzerinde bulunan bağışıklığı yeterli hücreleri etkileyen, ardından kendilerini enfeksiyonlara karşı savunma yeteneklerini kaybeden ve kan plazmasındaki virüs RNA'sının varlığına yanıt vermeyi kesen bir enfeksiyon nedeniyle bağışıklığın ciddi şekilde bozulması. İsimsiz muayene sırasında olumlu sonuç alınması durumunda, ek çalışmaların eklenmesiyle tekrarlanır;
• viral hepatit, çoğunlukla hepatit C(RNA patojeni içeren), kolay toleransı nedeniyle diğer yöntemlerle teşhis edilmesi zordur, çünkü PCR yöntemi patojeni kan veya karaciğer biyopsisinde tanımak için daha uygundur. geç bir aşamada kendini gösterir ve malign bir inflamatuar süreç oluşturur. Bununla birlikte, kanda (AT) antikor varlığı testi sırasında sonuç pozitifse ve PCR testi negatif bir sonuç veriyorsa, bunun vücutta bir virüsün varlığına çok işaret edebileceğini düşünmekte fayda var. düşük miktarda veya etkilenen hücreler, kan dolaşımına erişimi olmayan karaciğer hücrelerinin genomunda bekleyen bir aşamadadır. Bu gibi durumlarda kesin tanı ve tedavi yöntemleri için bir takım tekrarlanan çalışmalar yapılacak;
• HPV gibi onkojenik virüsler(insan papilloma virüsü) 100'den fazla çeşitli tipler cinsel yolla veya tıbbi prosedürler sırasında bulaşan bir virüs, papilloma virüsü taşıyıcısı ise yenidoğan anneden doğum kanalı yoluyla enfekte olur;
• cinsel yolla bulaşan hastalık(cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlar);
• tüm STD'leri tespit etmek için uygun(, gardnerellosis,) ve TORCH enfeksiyonları;
• yüksek derecede doğrulukla gösterir mononükleoz enfeksiyonu olan Lenfatik ve retiküloendotelyal sistemlerde (genişlemiş lenf düğümleri, dalak, karaciğer) hasar ile karakterize edilen, test materyali olarak kan serumu alınarak PCR teşhisi kullanılarak tespit edilebilir. Filatov hastalığı, dış parametrelere göre kendini döküntü, safralılık olarak gösterebilir. deri, dilde beyaz kaplama.
• AIDS hastalarının ve organ nakli alıcılarının kanlarına bağışıklık sistemini baskılayacak ilaçların kullanımıyla nüfuz ederek;
• herpetik enfeksiyon cinsel organları, gözlerin mukoza zarını veya cildi etkileyebilecek bir veya daha fazla uçuk tipini temsil eden;
• tüberküloz. Hastalığın ana semptomlarının varlığında, bronkoskopi sonuçlarından sonra bir PCR analizi reçete edilir ve tüberkülozun aktif aşamasını bakteriyolojik veya bakteriyoskopik bir yöntem kullanmaktan çok daha hızlı teşhis etmenize olanak tanır;
• gibi viral enfeksiyon hastalıkları kene kaynaklı ensefalit(borreliosis). Hücre hasarı ile karakterize gergin sistem, zehirlenme, beyin iltihabı ve ardından felç gelişimi. PCR teşhisi kullanılarak antijeni tespit etmek için, RNA virüsünü izole etmek için kan ve beyin omurilik sıvısı alınır.
• Helicobacter pylori enfeksiyonunun tespiti(kronik gastrit, peptik ülser, mide tümörlerine yol açan) PCR teşhisi ile biyopsi, dışkı, tükürükte Helicobacter pylori DNA'sının (genetik materyal) saptanmasına, malignite derecesine göre suşların ayırt edilmesine olanak sağlar.

Enfeksiyonların PCR teşhisi hızlandırılmış bir hızla gelişiyor ve onkoloji, jinekoloji, üroloji, gastroenteroloji, virolojide başarıyla kullanılıyor ve liste sürekli güncelleniyor, ancak bulaşıcı hastalıkların patojenlerinin araştırılmasıyla sınırlı değil. PCR yönteminin diğer pratik uygulamaları arasında, babalık belirlemek ve bir kişiyi tanımlamak için araştırma kullanımı da seçilebilir.

PCR teşhisi, bir kişiyi bulaşıcı ve kalıtsal hastalıklar açısından incelemek için kullanılabilen polimeraz zincir reaksiyonunun kullanımına dayanan bir tekniktir. 12 enfeksiyon için PCR analizleri, hastalığın akut veya kronik olmasına bakılmaksızın bir sonuç gösterir. Bazı uzmanlar PCR 12'yi zorunlu bir analiz olarak kabul eder ve onsuz kesin tanı koymazlar. Sonuçlar, hastalığın semptomlarının başlamasından çok önce bile pozitif olabilir.

20. yüzyılda ABD'den Cary Mullis, polimeraz zincir reaksiyonu fenomenini keşfetti. Şu anda, PCR yöntemi, tıbbın bazı alanlarında altın standarttır. Yöntem, aktif aşamada bir hastalığı tespit etmek için en etkilidir, çünkü geleneksel yöntemlerin aktif aşamada bu kadar doğru bir sonuç vermediği durumlar vardır.

PCR kullanarak enfeksiyöz süreçlerin teşhisi şu durumlarda oldukça önemlidir: modern dünya. Bu tür muayenenin avantajları şunlardır:

1. Analizlerde bulaşıcı bir ajanın tespiti. Analiz, bulaşıcı bir ajanın DNA veya RNA'sının tanımlanmasını içerir.
2. Yanlış ve hatalı reaksiyonlar pratik olarak hariç tutulur.
3. PCR yöntemi 12 en hassas olanıdır. Bu yöntem sayesinde enfeksiyöz ajanların tek hücreleri bile tespit edilebilir.
4. Gizli patojenler için PCR sonucu işlemden 4 saat sonra hazırdır.
5. Hastalık için karakteristik semptomların yokluğu olmadan enfeksiyöz ajanları tespit etme yeteneği. Yöntem, belirli bir hastalık durumunda oldukça etkilidir.

Modern dünyada, enfeksiyonların PCR teşhisi hızlı bir şekilde gelişiyor. Teknik aktif olarak geliştirilmektedir. Yeni çeşitler ortaya çıkıyor PCR incelemeleri. geliştirme sayesinde Bu method muayene, maliyet giderek değişirken, geniş bir insan yelpazesi için mümkün olduğunca erişilebilir hale gelir.

Polimeraz zincir reaksiyonunun temeli

PCR yöntemi yalnızca laboratuvarda gerçekleştirilir. Uygulanması için hastanın DNA ve RNA'sının yapısını birkaç kat artıran özel enzimler kullanılır. Görsel analizin yapılabilmesi için böyle bir miktarda DNA ve RNA oluşturulmalıdır. Muayene sırasında, ideal olarak gerekli koşullara uyan RNA veya DNA bölümünün bir kopyası kopyalanır.

Laboratuvar, çeşitli bulaşıcı ajanların tam yapısını listeleyen bir veri tabanına sahiptir. PCR yöntemi sayesinde sadece patojeni görmekle kalmaz, aynı zamanda nicel oranını da hesaplayabilirsiniz.

PCR teşhisi ayrıca aşağıdakilerin ayırt edilebileceği bazı yenilikleri içerir:

• mutasyonların tanıtılması;
• bireysel DNA parçalarının bağlanması;
• babalık tespiti vb.

PCR analizi ile tespit edilen enfeksiyonlar

PCR teşhisi, aşağıdaki bulaşıcı süreçleri ortaya çıkarabilir:

• aşağıdaki çeşitlerin hepatiti: A, B, C, G;
• Enfeksiyöz mononükleozun etken maddesi Epstein-Barr virüsü;
• sitomegalovirüs;
• Tüberküloz;
• herpes 1 ve 2 tipleri;
• cinsel yolla bulaşan birçok enfeksiyon: ureaplasmosis, gardnerellosis, klamidya, mikoplazmoz, trichomoniasis.
• HPV ve onkojenik alt türleri;
• kene kaynaklı ensefalit ve borreliosis;
• kandida enfeksiyonu;
• listeriosis;
• Helikobakter pilori enfeksiyonu.

Bunlar, PCR kullanılarak tespit edilebilen en yaygın enfeksiyonlardan sadece birkaçıdır. PCR kan testi, tıbbi uygulamanın jinekolojik alanında ve ayrıca aşağıdaki alanlarda aktif olarak kullanılmaktadır:

• pulmonolojik;
• ftiziyatrik;
• gastroenterolojik;
• onkolojik;
• diğer birçok tıp dalı.

Analiz için materyal toplama kuralları

Yabancı DNA ve RNA, belirli bir kişinin çeşitli vücut sıvıları incelenerek tespit edilebilir. Bir kişiyi cinsel yolla bulaşan bazı enfeksiyonların varlığı açısından incelemek için hastanın genital organlarından (smear veya sıyrık) akıntı örneği ve idrarı alınması gerekir.

Bir kişiyi çeşitli enfeksiyonlar (HIV, herpes, hepatit ve diğerleri) açısından incelemek gerekirse, hastanın kanının kullanıldığı bir PCR analizi yapılır.

Herpetik bir lezyonu, mononükleozu teşhis etmek için hastanın ağız boşluğundan bir leke almanız gerekir. CMVI'yı doğrulamak için hastanın idrarı analiz için alınır. Ortaya çıkan nörolojik anormalliklerin nedenlerini belirlemek için beyin omurilik sıvısının incelendiği durumlar vardır.

Aynı zamanda, bir göğüs hastalıkları uzmanı, PCR yöntemini kullanarak belirli bir hastanın plevrasındaki balgam ve sıvıyı inceler.

Yeni doğmuş bir bebeğin rahim içi enfeksiyon şüphesi varsa, doktorlar hamile bir kadından amniyotik sıvı ve bir parça plasenta dokusu analizi alır.

Analizin teslimi: prosedürün özellikleri ve sonuçların yorumlanması

PCR yöntemiyle incelenen tüm hastalar en güvenilir sonucu alır. Bu durumda, hataların oluşumu pratik olarak hariç tutulur. Bu analizin sonuçları yeterince hızlı hazırlanır, bu da tanıyı kolaylaştırır ve terapötik önlemlerin zamanında atanmasını sağlar.

PCR sonucunun güvenilirliği, doğrudan inceleme için materyalin tesliminin doğruluğuna bağlıdır. Materyal kontamine olmamalıdır, aksi takdirde çalışmanın sonucu objektif olmayacaktır. PCR testi yapmadan önce en önemli öneriler aşağıdaki gereksinimleri içerir:

1. Analizden bir gün önce cinsel aktivitede bulunmak yasaktır.
2. Sabahları aç karnına enfeksiyonlar için kan testi yapılmalıdır.
3. Sabahları steril bir kapta idrar verilir.

Analiz sonucu, söz konusu işlemden 1.5-2 gün sonra hazır olacaktır. Sonucun aynı gün hazırlanabileceği durumlar vardır.

Sonuçların deşifre edilmesi

Bu tür bir muayenenin sonucu olumlu veya olumsuz olabilir. Kan testinin olumsuz sonucu, gönderilen materyalde bulaşıcı unsur olmadığını gösterir. Gerçekleştirilen çok sayıda PCR testi negatif bir analiz gösteriyor.

Pozitif bir PCR analizi, sunulan materyalde enfeksiyöz ajanların bulunduğunu ve hastanın yüksek kaliteli, en etkili tedavisinin gerekli olduğunu doğrular.

Sonuç olumlu olabilir, ancak hastalığın belirtileri yoktur. Bu, hastalığın başlangıcını veya taşıyıcılığını gösterir. Hastalığın taşıyıcısı tespit edilirse, terapötik önlem alınması gerekmez. Bir uzmana görünmeniz yeterlidir. Bu tür hastalıklara örnekler:

• papilloma virüsü enfeksiyonu;
• uçuk vb.

Genellikle tükürükte, servikal kanaldan kazımalarda, üretrada bulunurlar. Bununla birlikte, bu hastalığın onu hiçbir şekilde rahatsız etmemesine rağmen, hasta bir kişinin kesinlikle sağlıklı insanlara bulaşabileceği unutulmamalıdır. Hastalık kronik hale gelebilir. PCR kan testinin gösterdiği durumlarda olumlu sonuç, terapötik önlemlerin atanması basitçe gereklidir.

PCR analizi de nicel bir özelliğe sahiptir. Kantitatif sonuç sadece bir uzman tarafından değerlendirilir, farklı enfeksiyonlar için bireyseldir. Kantitatif özelliklere dayanarak, doktor, belirli bir hastalığın gelişiminin kesin aşamasını ortaya koymak için bu patolojik sürecin ne kadar aktif olduğunu anlayabilir. Elde edilen sonuçları analiz ederek, uzman gerekli ilacı seçebilir ve muhtemelen ilacın dozajını yeniden gözden geçirebilir.

PCR teşhisinin doğruluğu

Uzmanlara, aralarında aşağıdakiler bulunan en önemli PCR 3 özelliği verilir:

1. Kesinlik.
2. özgüllük.
3. Duyarlılık.

PCR ile enfeksiyonların teşhisi, bulaşıcı ajanları tespit etme olasılığı yüksektir. Kan ve diğer sıvıların PCR analizi oldukça spesifiktir. Yardımı ile belirli bir bulaşıcı süreci kolayca tanımlayabilirsiniz. PCR teşhisi son derece hassastır. Test materyali minimum miktarda bulaşıcı ajan içeriyorsa, PCR yöntemi her zaman pozitif olacaktır.

En nadir olanı yanlış bir pozitif sonuçtur. Enfeksiyon yoksa sonuç negatiftir.

Gizli bulaşıcı süreç için PCR

Bir kişide bir CYBE şüphesi varsa, gizli enfeksiyonlar için bir kan testi reçete edilir. Cinsel hastalıklar ancak hasta muayene edilerek tespit edilebilir. Hastalıklar:

• klamidya;
• üreaplazmoz;
• bel soğukluğu;
• uçuk;
• gardnerelloz;
• mikoplazma.

Yukarıdaki cinsel enfeksiyonlar oldukça yaygındır ve aynı zamanda sinsidir. Hastalığın gelişiminin ilk aşamasında, parlak semptomlar vermezler ve hastalar yardım istemez. Bu enfeksiyonlardan şüpheleniliyorsa, PCR kan testi, üretranın mukoza zarından ve servikal kanaldan kazıma yapılması gerekir.

CYBE'ler üzerinde çok olumsuz bir etkiye sahiptir. üreme sistemi. Fetusta kısırlığa veya malformasyonlara neden olabilirler. Bu bağlamda, hamilelik planlamadan önce bir PCR testi yaptırmanız gerekir.

12 enfeksiyon için PCR popülerdir. PCR 12 ile teşhis, cinsel organlardan swabların verilmesi yoluyla gerçekleştirilir. Malzeme idrara çıkma eyleminden 2 saat sonra alınır. Çalışmadan 2 gün önce vajinaya fitil sokulmamalı ve duş yapılmamalıdır. Analiz sonucu 2 gün içinde hazır olacaktır.

PCR'nin maliyeti, çalışılan enfeksiyona bağlı olarak değişir. Her enfeksiyon için fiyat 200 ila 500 ruble arasında değişmektedir. Doktor tavsiyesi olmadan kendi başınıza özel bir laboratuvara girebilir ve muayene olabilirsiniz.

Polimeraz zincir reaksiyonu 30 yıldır bilinmektedir. Arkeolojiden genetiğe kadar birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Babalık kurmaya yardımcı olan PCR yöntemidir, ancak en sık insan vücudundaki çeşitli bulaşıcı hastalıkları tespit etmek için kullanılır.

PCR analizi nasıl yapılır ve nedir? Bu soruları ayrıntılı olarak cevaplamaya çalışacağız.

PCR analizi - nedir bu?

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), insanlarda çeşitli bulaşıcı ve kalıtsal hastalıkları hem akut hem de kronik evrelerde ve hastalık kendini göstermeden çok önce tespit etmeyi mümkün kılan oldukça hassas bir moleküler genetik teşhis yöntemidir.

PCR yöntemi kesinlikle spesifiktir ve doğru yapıldığında yanlış pozitif sonuç veremez. Yani, enfeksiyon yoksa, analiz asla olduğunu göstermeyecektir. Bu nedenle, şimdi çok sık olarak, tanıyı doğrulamak için patojeni ve doğasını belirlemek için ek bir PCR analizi yapılır.

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) 1983 yılında Cary Mullis (ABD) tarafından geliştirildi ve 1993 yılında ödüllendirildi. Nobel Ödülü kimya alanında.

Bu yöntemin avantajı nedir?

Bu yöntemle teşhis, patojeni doğrudan incelenen materyallerde bulunan gende bulmanızı sağlar. Bu, cinsel enfeksiyonlar, gizli enfeksiyonlar, cinsel yolla bulaşan çeşitli hastalıklar için en doğru analizdir.

PCR teşhisi ve diğer laboratuvar araştırma yöntemleri arasındaki farklar aşağıdaki gibidir:

• yöntem, patojenin kendisini tanımlamayı amaçlar;
• PCR ile teşhis çok yönlüdür: birkaç patojeni tespit etmek;
• hastalıklar, hastanın sadece bir biyolojik örneği yeterlidir;
• yöntem oldukça hassastır ve diğer çapraz reaksiyonlar eşlik etmez.

Ek olarak, PCR teşhisinin avantajı, hastanın herhangi bir biyolojik materyalinin analiz için uygun olmasıdır: kan, genital organlardan salgılar, idrar, meni.

PCR smear ile hangi enfeksiyonlar tespit edilebilir?

vücut olabilir çok sayıda enfeksiyonlara neden olan ajanlar, buna kendilerini uzun süre göstermeyen “gizli” de dahildir.

PCR yayma analizi bu tür enfeksiyonları tespit etmeyi mümkün kılar:

• genital organların ureplazmozu;
• kandidiyaz ();
• uçuk;
• kanser hücrelerinin varlığı;
• hormonal durumu değerlendirmek;

PCR için çalışılan materyal genellikle balgam, tükürük, idrar, kandır. Analizi gerçekleştirmeden önce, bir doktorla ön konsültasyon alarak buna dikkatlice hazırlanmak gerekir.

PCR için kan genellikle aç karnına bağışlanır. Araştırma için materyal servikal kanaldan veya üretradan alındığında iyi sonuçlar analizle gösterilir. Bu durumda, PCR teşhisini cinsel ilişkiden en geç bir gün sonra yapmak en iyisidir.

PCR çeşitleri

PCR birçok alanda analiz ve bilimsel deneylerde kullanılmaktadır. Farklı analiz yöntemleri vardır:

1. ters transkripsiyon PCR(Ters Transkripsiyon PCR, RT-PCR (İngilizce)) - bir RNA kitaplığından bilinen bir diziyi amplifiye etmek, izole etmek veya tanımlamak için kullanılır.
2. ters PCR(Ters PCR (İngilizce)) - istenen dizilimdeki yalnızca küçük bir alan biliniyorsa kullanılır. Bu yöntem, DNA genoma eklendikten sonra komşu dizilerin belirlenmesi gerektiğinde özellikle yararlıdır.
3. Nested PCR, bir reaksiyonun yan ürünlerinin sayısını azaltmak için kullanılır. İki çift primer kullanın ve iki ardışık reaksiyon gerçekleştirin.
4. asimetrik PCR(İngilizce Asimetrik PCR) - esas olarak orijinal DNA zincirlerinden birinin amplifiye edilmesi gerektiğinde gerçekleştirilir. Bazı dizileme ve hibridizasyon analiz tekniklerinde kullanılır.
5. kantitatif PCR(Kantitatif PCR, Q-PCR (İngilizce)) veya gerçek zamanlı PCR - her reaksiyon döngüsünde belirli bir PCR ürününün miktarının ölçümünü doğrudan gözlemlemek için kullanılır.
6. Kademeli PCR (Touchdown PCR (İngilizce)) - bu yaklaşımı kullanarak, primerlerin spesifik olmayan bağlanmasının etkisi azaltılır.
7. Gruba özel PCR(İngilizce gruba özgü PCR) - Bir veya iki arasındaki ilgili sekanslar için PCR farklı şekiller bu diziler için koruyucu primerler kullanarak.

Şablonun nükleotid dizisi kısmen biliniyorsa veya hiç bilinmiyorsa, dizisi herhangi bir bazın yerleştirilebileceği dejenere pozisyonları içeren dejenere primerler kullanılabilir. Örneğin, primer dizisi şöyle olabilir: …ATH… burada H, A, T veya C'dir.

Hangi biyolojik materyaller inceleniyor?

Çeşitli biyolojik ortamlar ve insan sıvıları, bir bakterinin yabancı DNA'sının veya bir virüsün DNA'sının veya RNA'sının tespit edilebildiği PCR araştırması için bir materyal olarak hizmet edebilir:

1. İdrar. Erkeklerde genitoüriner sistemin enfeksiyöz lezyonları ve kadınlarda idrar organları için kullanılabilir (erkeklerde, idrarın materyal olarak kullanılması epitel kazıma yerine geçer).
2. Balgam. Tüberküloz teşhisi için ve daha az sıklıkla klamidya ve mikoplazmozun solunum formlarının teşhisi için kullanılır. 15-20 ml miktarındaki balgam, steril (tek kullanımlık) bir şişede toplanır.
3. biyolojik sıvılar. Prostat suyu, plevral, beyin omurilik, amniyotik sıvı, eklem sıvısı, bronkoalveolar lavaj, tükürük endikasyonlara göre alınır.
4. Mukoza zarlarından epitel kazımaları. Genellikle gonore, klamidya, mikoplazmoz, üreaplazmoz, trikomoniyaz, gardnerelloz, herpetik ve mukoza zarlarını etkileyen diğer enfeksiyonlar gibi cinsel yolla bulaşan hastalıkları (STD'ler) teşhis etmek için kullanılır.
5. Biyopsiler. Çoğu zaman, mide ve duodenumun biyopsi örnekleri Helicobacter pylori enfeksiyonunu saptamak için kullanılır.
6. Kan, plazma, serum. Hepatit B, C, D, G virüsleri, herpes, CMV, HIV, insan genlerinin PCR analizi için kullanılır.

Analize nasıl hazırlanılır?

PCR sonucunun güvenilirliği, doğrudan inceleme için materyalin tesliminin doğruluğuna bağlıdır. Materyal kontamine olmamalıdır, aksi takdirde çalışmanın sonucu objektif olmayacaktır. PCR testi yapmadan önce en önemli öneriler aşağıdaki gereksinimleri içerir:

1. Sabahları steril bir kapta idrar verilir.
2. Sabahları aç karnına enfeksiyonlar için kan testi yapılmalıdır.
3. Testten bir gün önce cinsel olarak aktif olmamalısınız.

Analiz sonucu, söz konusu işlemden 1.5-2 gün sonra hazır olacaktır. Sonucun aynı gün hazırlanabileceği durumlar vardır.

PRP analizinin deşifre edilmesi

Sunulan çalışmayı yorumlama süreci basitliği ile dikkat çekmektedir. Sonuçlar pcr analizi malzeme tesliminden sonra 1.5-2 gün içinde teslim alınabilir. Bazı durumlarda, sonuç ilk gün hazırdır ve şu anlama gelebilirler:

• olumsuz sonuç teşhis edilen materyalin istenen enfeksiyöz ajanı içermediğini gösterir.
• PCR pozitif patojenin DNA veya RNA'sının insan vücudunda bulunduğunu gösterir.

Bazı durumlarda, mikroorganizmaların kantitatif tayini yapılır. Bu özellikle fırsatçı patojenlerin neden olduğu hastalıklar için geçerlidir. Çünkü bu bakteriler olumsuz etkilerini ancak fazla olduklarında gösterirler.

Ayrıca, kantitatif PCR analizi, terapötik taktiklerin seçimi ve HIV ve hepatit virüsleri gibi viral enfeksiyonların tedavisinin izlenmesi amacıyla önemlidir.

Enfeksiyonları teşhis etmede PCR ne kadar doğrudur?

PCR yöntemi, yüksek doğruluk, özgüllük ve hassasiyet ile karakterizedir. Bu, bu analizin şunları yapabileceği anlamına gelir:

• enfeksiyonun varlığını veya yokluğunu doğru bir şekilde belirlemek;
• tam olarak ne tür bir enfeksiyon olduğunu belirtin (özgüllük);
• biyolojik materyalde çok düşük bir mikrobiyal DNA içeriğinde bile enfeksiyonu tespit eder,
• hangi test edilmiştir (hassasiyet).

PCR analizi: fiyat ve şartlar

Belirli bir analizin fiyatı, hangi enfeksiyon için test edileceğinize bağlı olacaktır. Yaklaşık fiyatlar ve şartlar:

1. STI: 300-500 ruble, terimler - 1 gün;
2. Epstein-Barr virüsü, insan papilloma virüsü, herpes, sitomegalovirüs: 300-500 ruble, terimler - 1 gün;
3. Hepatit A, B, C, D, G: kalitatif analiz 650 ruble, kantitatif analiz 2000 ruble. Şartlar - 5 güne kadar;
4. Hepatit C virüsüne karşı antikorlar, toplam (Anti-HCV) - 420 ruble;
5. Hepatit C virüsüne karşı antikorlar, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 ruble;
6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 ruble, terimler - 1 gün;
7. HIV (antikorlar ve antijenler) - 380 ruble;
8. HIV RNA, niteliksel olarak - 3.500 ruble;
9. HIV RNA, niceliksel olarak - 11.000 ruble.

Paradan tasarruf etmek için sabit bir analiz paketi seçebilirsiniz. Bu hizmet, PRC yöntemini kullanarak (in vitro, onklinik vb.) analiz yapabileceğiniz çoğu klinik tarafından verilmektedir.