PCR kantitatif hiv. PCR HIV teşhisi nedir? Yakın zamanda güncellendi! PCR analizi ne kadar sürer ve nerede yapılabilir?

Çoğu kadın ve erkek için cinsel yolla bulaşan bu hastalık en çok korkulan şeydir. Bu nedenle, engelleyici kontrasepsiyon olmaksızın gündelik ilişkiden sonra, ayrıca cinsel partnerlerin sık değişmesiyle ve sonrasında cerrahi operasyonlar, makul bir kişi belirli bir ihtiyat yaşar. Netleştirmenin en güvenilir yolu kliniğe gidip HIV için PCR testi yaptırmaktır.

Kan testi aşağıdaki göstergeleri belirlemek için kullanılabilir:

• Gizli dönemde HIV varlığının inkar / teyidi (enfeksiyondan sonraki ilk haftalarda, yokluğu veya çok düşük konsantrasyonları nedeniyle ELISA testlerinde antikorlar tespit edilmez).
• HIV-1, HIV-2 genotipinin belirlenmesi.
• Anne-taşıyıcılardan doğan çocuklarda durumun tespiti (HIV ile enfekte kadınlardan doğan tüm çocuklarda HIV antikorları uzun süre tespit edilir. 48 yaşın altındaki çocuklarda virüsün DNA'sının belirlenmesi arzu edilir. yaşam saatleri, 1-2 ay, 3-6 ay).
• ELISA testlerinin yanlış-negatif, yanlış-pozitif ve şüpheli sonuçları.
• HIV miktarının teşhisi ve dinamiklerdeki viral yükteki değişikliklerin izlenmesi (zaten kurulmuş bir AIDS teşhisi durumunda, prognoz, dinamik izleme ve devam eden tedavinin izlenmesi için PCR analizi kullanılır).

HIV için PCR testinin fiyatı

HIV İÇİN PCR ANALİZİ - NE ZAMAN, NEDEN VE NE ZAMAN YAPILIR?

1. HIV DNA'sı.İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü (HIV) DNA teşhisi, yüksek riskli bir olaydan sonra olası enfeksiyonu erken tespit etmek için kullanılabilir (potansiyel enfeksiyondan 10 gün sonra kan testleri yapılır). Bununla birlikte, enfeksiyonu tamamen dışlamak için, daha sonra 4. ve 12. haftalarda ikinci bir çalışma ve ELISA teşhisi yapılması gerekir.
   Analiz sonuçları: HIV DNA (niteliksel analiz)- "bulunamadı" veya "bulundu". İkinci durumda, HIV enfeksiyonunu doğrulamak için tekrarlanan ek çalışmalar gereklidir. Sonuç negatifse, ancak enfeksiyon riski yüksekse, ikinci bir muayene gerekir - bir süre sonra PCR veya ELISA ile kan bağışı.
2. HIV RNA'sı. HIV RNA'sının PCR ("viral yük" olarak adlandırılan) tarafından nicel olarak belirlenmesi, HIV enfeksiyonunun seyrinin prognozunu değerlendirmek için göstergelerden biri ve antiviral tedavinin etkinliğinin en erken göstergesidir. Test, hastalığın seyrini izlemek, tedaviye başlayıp başlamamaya karar vermek ve etkinliğini değerlendirmek için endikedir.
   PCR ile HIV RNA çalışması, yüksek riskli bir olaydan sonra (olası enfeksiyondan yaklaşık 7-10 gün sonra) olası enfeksiyonun erken güvenilir teşhisi ile yetişkinlerde kullanılabilir. Antikorların yokluğunda yüksek bir HIV RNA titresinin varlığı, akut HIV enfeksiyonunun teşhisine izin verir. Ancak tanıyı netleştirmek için 1 ve 3 ay içinde tekrarlayan bir çalışma ve ELISA teşhisi yapmak gerekir.
   PCR HIV RNA'nın bu enfeksiyonu olan hamile kadınlarda beklenen doğum tarihinden 3-4 hafta önce verilmesi, doğum yöntemi sorununu çözmek için endikedir (doğal doğum kanalı yoluyla veya sezaryen ile).
   Analiz sonuçları: HIV tip 1 HIV RNA (kantitatif analiz)- "algılanmadı" (bu normaldir).
3. HIV direnci. HIV'in proteaz ve revers transkriptaz inhibitörlerine karşı direncini belirlemek için bir analiz, HIV ile enfekte hastalarda etkisiz tedavi ile ve ayrıca akut enfeksiyon sırasında antiviral tedaviye başlamadan önce endikedir. Çalışma, HIV'in ilaçlara direncini belirlemenizi sağlar. Analiz sonuçlarına dayanarak, bulaşıcı hastalık uzmanı, proteaz inhibitörlerine, nükleozid ve nükleozid olmayan ters transkriptaz inhibitörlerine karşı direnç mutasyonlarının varlığının yanı sıra bir ilaç direnci mutasyonu ile ilişkili her bir amino asit pozisyonu hakkında bilgi edinir.
4. Multiprime kapsamlı teşhis: hepatit C virüsü RNA / hepatit B virüsü DNA / insan immün yetmezlik virüsü (HIV) tip 1 ve 2 RNA'nın kalitatif tespiti (ultrasensitif yöntem). Analiz, HIV enfeksiyonunun teşhis edilmesini sağlar, viral hepatit C ve B erken. Çalışma, risk altındaki bireylerde viral hepatit B ve C, HIV tip 1/2'nin erken tespiti için endikedir. DNA veya RNA virüslerinin tespiti enfeksiyonu gösterir.

Bu kan testlerinin hazır olma şartları - 3 ila 7 takvim günü. Moskova'da HIV enfeksiyonunun teşhisi için kalitatif ve kantitatif PCR analizini tıp merkezimizde yapabilirsiniz. Dahil olmak üzere 10-00 arası günlük kan örneklemesi

DSÖ istatistiklerine göre, 40 son yıllar AIDS'ten 25 milyon insan öldü. Bu enfeksiyonun zararı çok büyük. Enfekte olanların çoğunun, bu enfeksiyonun geldiği Afrika'da olduğu ortaya çıktı. HIV ile hastalığın teşhisi özellikle alakalı hale gelir. Doğru, HIV tedavisi için henüz bir ilaç yok, ancak erken tedavi hastanın ömrünü uzatabilir ve kalitesini iyileştirebilir.

HIV enfeksiyonu teşhisi

HIV enfeksiyonu, aşağıdaki yöntemlerle farklı aşamalarda belirlenir:

• ELISA - enzim immünolojik testi.
• Batı lekesi.
• PCR - polimeraz zincir reaksiyonu.
• Ekspres testler.

PCR yöntemi, 1983 yılında bunun için ödül alan Amerikalı biyokimyacı Kary Mullis tarafından geliştirildi. Nobel Ödülü. Günümüzde tıpta bu yöntem, doğruluğu ve bilgi içeriği nedeniyle tüm enfeksiyonların teşhisinde önde gelen yöntem olarak kabul edilmektedir. HIV bu konuda bir istisna değildir.

Analizin özü

Hiç yaşayan hücre RNA ve DNA içerir. Bu nükleik asitler kendi kendini kopyalama ve kendini kopyalama yeteneğine sahiptir. Her enfeksiyon için DNA parçaları benzersizdir. Bu nükleik asit parçaları biyolojik sıvılarda dolaşır. Reaktör - özel ekipman tarafından yakalanır ve tanınırlar. Bu yöntemin temelidir. Laboratuvar asistanı bu parçaları sayar. Retrovirüs HIV, RNA için izlenir. Viral parçacıkların tek kopyalarıyla bile, PCR bunları algılayabilir ve sayabilir.

Test sıvısı olarak en yaygın olarak venöz kan kullanılır. Yöntemin özel bileşenleri virüs partikülleri ile temas eder ve tespit edilebilir hale getirir, çünkü bulunan fragmanlarda çoklu artış vardır.

HIV durumunda, virüsün varlığının sonucu, klinik ortaya çıkmadan çok önce elde edilebilir. Bu nedenle, yüksek duyarlılığı nedeniyle PCR, bu kadar yüksek bir tanı değerine sahiptir. Büyük bir PCR artısı, yöntemin çok yönlülüğüdür. PCR için enfeksiyonun kuluçka süresi bir engel değildir.

Araştırma maliyeti

PCR yöntemi oldukça pahalıdır. Bu onun büyük dezavantajlarından biridir. Son teknoloji ekipman gerektirir ve yüksek nitelik laboratuvar doktoru. Yukarıdakilerin ışığında, küçük yerleşim yerlerinde PCR teşhisi yapılmaz. Analizi yalnızca uzmanlaşmış büyük kliniklerde yapabilirsiniz.

Moskova kliniklerinde HIV DNA testinin maliyeti 2.800 ruble, açıklama ile PCR kullanarak viral yük (plazmadaki viral RNA) - 8.800 rubleden ve proteaz inhibitörlerine HIV direnci - 16.500 rubleden. Gördüğünüz gibi fiyatlar oldukça yüksek. PCR, MHI politikası kapsamında kamu kliniklerinde ücretsiz olarak yapılabilir. İşlemin isimsiz olarak yapılabilmesi önemlidir. Kayıt defterinde hasta, sonucu öğrenebileceği bir numara alır. Modern tıp merkezlerinde, bu verilerin girileceği müşterilerin kişisel hesapları vardır.

Araştırma hedefleri

HIV için PCR teşhisi bu gibi durumlarda reçete edilir:

• Rahim içi enfeksiyonu belirlemek için hasta bir anne veya taşıyıcıdan doğan bir çocukta enfeksiyon tespiti.
• ELISA şüpheli sonuçlar verdiyse (HIV için PCR bu durumda kesin tanı koymaya yardımcı olur).
• Vücuttaki virüsün kantitatif içeriğini belirlemek.
• Pozitif immünoblotlama ile birbirlerini PCR ile tamamlarlar.
• Donör testi.
• HIV'in erken teşhisi için.
• ART'ye karşı etkinliğini ve direncini belirlemek.

Bu analizin avantajı, HIV için PCR'nin bir yaşın altındaki çocuklar için bile uygulanabilmesidir.

Çalışma genellikle birincil tanı için değil, zaten tedavi sürecinde yapılır. Birincil tanı serolojik çalışmalardır (HIV'e karşı antikorların seviyesini belirlerler). Yanlış pozitif bir sonuç tekrarlanırsa - bu düşük viral yük ile olabilir.

PCR, HIV'e henüz antikor olmadığında teşhis eder. Bu durumda ELISA yöntemi bir cevap vermeyecektir.

Ve HIV üzerindeki PTSR zaten pozitif olacaktır. Ama belirtiler verilen periyot HIV spesifik değildir. Hasta ilk olarak bir pratisyen hekim tarafından uzun süreli ve başarısız ARVI tedavisi görür. HIV tanısının sadece PCR temelinde yapılmadığı, diğer kapsamlı testlerden geçilmesi gerektiği unutulmamalıdır. PCR yöntemi, karmaşık durumlar için daha çok yardımcıdır.

Analiz için hazırlık

HIV için PCR almadan önce, analizden 2 gün önce yağlı yiyecekler, alkol yememelisiniz. Ayrıca zihinsel ve fiziksel olarak zorlamamak daha iyidir. Hastaya bir immünostimülasyon kürü reçete edilirse, analizden 2 hafta önce durdurulur.

Sabahları kan bağışı yapmak en iyisidir. Vücudun diğer biyolojik sıvıları (meni, vajinal salgı) da incelenebilir ancak en iyi malzeme kandır. Tükürük, ter, idrar ve gözyaşı kullanılmaz, çünkü virüs içeriği minimumdur.

HIV için PCR'nin Avantajları

Yöntemin avantajları, yanlış bir pozitif sonucun son derece düşük olasılığı, vücudun herhangi bir biyolojik sıvısı için reaksiyonun evrenselliğidir. Analiz geniş bir yelpazeye sahiptir:

• Farklı enfeksiyonları tespit etmek için bir kan alımı kullanılabilir.
• Teknik acil, sonuç ertesi gün hazır.
• Güvenilirlik %85 ​​ile %98 arasında değişmektedir.
• HIV varlığı enfeksiyondan 10-14 gün sonra belirlenebilir (şu anda henüz antikor yoktur).
• Yaş sınırlaması yoktur, doğum anından itibaren hemen yapılabilir.

Yöntemin eksileri

PCR'nin dezavantajları aşağıdaki gibidir:

• Pahalı analiz.
• Gelişmiş tıbbi ekipman gereklidir.
• Laboratuvar asistanının ve tahlili yapan doktorun yüksek vasıflı olması gerekmektedir.
• Reaksiyon oldukça hassastır, bu nedenle hata %20 olabilir.
• yanlış olabilir olumlu sonuç hastanın otoimmün süreçleri, onkolojisi, kronik enfeksiyonları varsa.
• Virüs havadan analize bulaşabileceğinden laboratuvar tesislerinin özel temizliği gereklidir. O zaman sonuç yanlış olacaktır.

PCR yürüten laboratuvarlar için teşhis kalitesini artırmak için SanPiN sistemi için dahili kontrol için özel katı önlemler geliştirilmiştir. Ayrıca, bu teknikle çalışmak için tüm kurallara uyulmalıdır:

• Test tüpleri üzerindeki bilgilere kesinlikle uyulması gerekmektedir.
• Kan almadan önce tekrar bakın ve analizin sipariş edildiğinden emin olun.
• Hemşire tüplerin doğru etiketlemesini yapmalıdır.
• Çapraz kontaminasyonu önlemek için laboratuvar doktoru biyomateryal ile tüm manipülasyonları doğru bir şekilde yapmalıdır.
• Test sistemi mükemmel kalitede olmalıdır.

Ancak tüm bu koşullar sağlanırsa cevaptaki hata bölümlerin ancak %2'si kadar olabilir.

Analiz süresi

Birçoğu, HIV için PCR'nin ne kadar süre hazır olacağıyla ilgileniyor. Teşhis 8 saatten fazla sürmez. Hasta ertesi gün bir cevap alabilir. Ekspres test 2 saat içinde gerçekleştirilir.

PCR'nin Güvenilirliği

Pek çok avantajına rağmen, PCR ideal bir tanı yöntemi olarak kabul edilmez. Vücutta HIV varlığı için tarama testleri yapılması gerekiyorsa ona başvururlar.

Analiz için kan ne zaman alınır?

HIV için PCR ne kadar sürer? İddia edilen enfeksiyondan 4-4 gün sonra kan alındığında zaten güvenilir bir sonuç elde edilebilir. 2 hafta sonra, HIV için güvenilirlik% 98 ve 5 günlük bir süre ile -% 80 olacaktır. Sonuç üzerinde PCR bulunması güvenilir olacaktır, ancak kesinlikle doğru bir sonuç için ELISA da yapılır.

ELISA analizi sadece virüse karşı antikorların varlığında etkili olacaktır, bu süre 1-3 ay ile altı ay arasında sürebilir. ELISA daha yüksek bir olasılık verdiğinden (%98-99.9) PCR, HIV enfeksiyonunun varlığını %100 doğrulayan bir test olarak adlandırılamaz. Ancak öte yandan, bu, antikorların ortaya çıkmasını beklemenin gerekli olmadığı tek tekniktir.

HIV ile PCR, ART'nin etkinliği, HIV hastalığının evresi ve VN sayısı (vücutta HIV varlığının nicel bir değerlendirmesi) hakkında bilgi sağlayabilir. Bu, değişikliklerin ciddiyetini ve kapsamını gösterecektir.

Kanda antikorlar varsa, HIV için PCR testleri de gereklidir, ancak bunların varlığı klinik olarak HIV enfeksiyonunun güvenilirliğini göstermez.

Analizi sadece enfeksiyon ve gündelik cinsel ilişki durumunda değil. Diğer sebepler:

• Hamilelik için planlama.
• yaklaşan operasyon.
• Sıradan seks.
• Bazı meslekler işe kabul için bu analizi gerektirir (öğretmenler, doktorlar ve diğer sağlık personeli).
• Mahkumlar.
• tüberküloz hastaları.
• Acil Durumlar Bakanlığı ve polis çalışanları.
• Egzotik ülkelerden tatilden sonra döndü (eğer enfeksiyon olmadığından emin olmak istiyorsanız).
• Fahişeler.
• Yabancı öğrenciler.
• Uyuşturucu bağımlıları.

Ayrıca, bir hastadaki bazı semptomlar HIV testini zorunlu kılabilir:

• Ani kilo kaybı.
• 3 haftadan uzun süren ishal.
• Sıcaklıkta uzun süre makul olmayan bir artış.
• Büyümüş lenf düğümleri.
• Açıklanamayan pnömoni, kandidiyaz vb. nedeni

Analizin şifresini çözmek, laboratuvar asistanının değil, ilgilenen doktorun ayrıcalığıdır.

PCR veya ELISA, hangisi daha iyi?

RNA ile virüs hem niteliksel hem de niceliksel olarak tespit edilir. Bu analiz, çapraz reaksiyona giren birkaç patojen olsa bile belirli bir patojeni açıkça tanımlar. Biyolojik materyal kurutulmuş halde dahi kullanılabilir. Dezavantajı, cihazlar veya test tüpü üzerinde çok küçük bir miktarda yabancı DNA bulunmasıyla bile yanlış bir pozitif sonuç verilebildiğinde, PCR'nin yüksek duyarlılığıdır.

ELISA'nın görevi ve olasılığı, bir retrovirüse karşı antikorların varlığını belirlemektir. Doğruluğu %99 olmasına rağmen, erken aşamalar o uygulanamaz.

Niteliksel HIV testi

HIV için yüksek kaliteli PCR yürütmek, virüsün vücuttaki varlığını belirler. Bu durumda sonuçlar şöyle görünecektir: pozitif, yanlış pozitif, negatif. Fakat bu çalışma retrovirüsün miktarı hakkında bilgi vermeyecektir. Böyle bir nitel analiz, vücutta başka yöntemlerle HIV enfeksiyonu tespit edildiğinde uygun değildir.

Yüksek kaliteli PCR ile tedavinin etkinliğini kontrol etmek imkansızdır.

Kantitatif HIV testi

Biyolojik bir üründeki virüs RNA'sının kopya sayısını saymak için sadece HIV ile enfekte kişiler tarafından gerçekleştirilir.

Böyle bir çalışmanın amacı, devam eden tedaviyi izlemek ve virüsün ona karşı direncini belirlemektir. Bu tür hesaplamalarda antiviral tedavi, bir doktor tarafından körü körüne reçete edilmez, bu nedenle daha etkili olacaktır. HIV enfeksiyonu için kantitatif PCR çok daha sık yapılır. Bu analiz kopya/ml kan olarak görüntülenir.

Hangi sonuçlar verilebilir:

• Virüsün RNA'sı yok veya çok az (yaklaşık 20 kopya/ml). Kesin bir teşhis yoktur.
• 20 - 10 ila 6. derece kopya / ml - tanı güvenilirdir.
• 10'dan fazla 6. kopya / ml - büyük VN.

Laboratuvarlar HIV için gerçek zamanlı PCR testi yapabilir. Bu, sonuçların otomatik olarak kaydedilmesiyle PCR ürünlerinin birikiminin gözlemlenmesi ve sayısal olarak değerlendirilmesi anlamına gelir.

HIV için PCR, viral bir mikroorganizmanın genetik yapısının belirlendiği güvenilir ve kayda değer bir tanı yöntemidir. Kandaki viral mikroorganizmanın göstergesi minimum ise, çalışma sırasında virüste çoklu nicel bir artış gözlenir. Bu, PCR'nin güvenilirliğinin çok yüksek olduğunu göstermektedir.

HIV için kan testi nasıl yapılır

Testi yaptırmadan önce hastanın birkaç gün yağdan zengin besinler yemesi önerilmez. Yemeklerden önce kan testi yapılmalı, son yemek en geç 8 saat önce olmalıdır. Ayrıca bu gün ve öncesi hariçtir alkollü içecekler ve kızarmış yiyecekler.

Yalnızca bu tür koşullar doğru bir analiz sonucu sağlayacaktır.

Ancak genel bir kan testinin yardımıyla, vücutta HIV'in var olduğundan veya bulunmadığından tam olarak emin olunamaz. Hasta kan bağışladıktan sonra sadece bazı parametreler doktorun hastada HIV olduğundan şüphelenmesine neden olabilir:

• Artan eritrosit sedimantasyon hızı.
• Düşük hemoglobin kan sayımı.
• Kanda eritrosit hücrelerinin bileşimi azalır.
• Nötrofilik lökositlerin seviyesi düşer.
• Kandaki lenfosit hücreleri artar.
• Azaltılmış kan trombositleri.

PCR çalışması nedir

Kural olarak, bağışçının kanındaki immün yetmezlik virüsünü belirlemek için bir analiz yapılır. Bu tip virüslerin insan vücudunda erken teşhisi de kan plazmasında virüslerin üremesini engelleyen ve salgıladıkları toksinleri (antikorları) nötralize eden protein bileşiklerinin üretilmesinden önce yapılır.

Bu spesifik kan serumu proteinleri, standart HIV testleri (enzime bağlı immünosorbent testi) ile belirlenir, ancak yalnızca 1 ila 3 aylık belirli bir süreden sonra ve nadir durumlarda, kişi enfekte olduktan bir yıl sonra.

HIV için PCR RNA veya DNA analizi kaç günde yapılır? HIV için PCR teşhisi yapılırsa, yüksek doğrulukla sonuç iki hafta sonra bilinecek ve %98.5-99 güvenilir veya 5 gün sonra olacaktır. Bu durumda, HIV için PCR testi sadece %79,5-80 güvenilir olacaktır. Bu HIV testi, enzim immunoassay ile karşılaştırıldığında, emek yoğun bir çalışmadır; her kişiye değil, yalnızca özel olarak endike olduğu kişilere veya ücretli olarak atanır.

Analiz ne için?

Polimeraz zincir reaksiyonu aşağıdaki durumlarda gerçekleştirilir:

• Enfeksiyon anından antikorların tezahürüne kadar geçen süre içinde insan immün yetmezlik virüsünün varlığını doğrulamak veya çürütmek (2 haftadan 3 aya kadar sürer).
• İmmünoblot verileri hakkında şüphe varsa.
• Tüm HIV-1 genlerinin yerleşik bir seti veya başka bir HIV-2 türü ile.
• İnsan vücudundaki virüslerin aktivitesini belirlemek ve gözlemlemek.
• Annesi insan immün yetmezlik virüsünün taşıyıcısı olan doğmuş bir çocukta HIV testlerine reaksiyonu tespit etmek.
• Kan transfüzyonu yapılırsa.

PCR'nin avantajı nedir?

Bu teşhis yöntemi iyidir çünkü:

HIV teşhisi için PCR yöntemleri vardır: kalitatif ve kantitatif yöntemler. Niteliksel olarak, etkilenen lenfosit hücresinin kalıtsal materyalinin (genomunun) toplamında tamamlayıcı bir DNA segmenti belirlenir. Tespit edilen viral patojenin kendisi değil, sadece virüs tarafından hücreye yerleştirilen yapılardır.

Hücre çekirdeği, okunacağı ve çoğaltılacağı virüsün DNA'sını depolayacaktır.

Kantitatif yöntemde kopyalanan viral RNA'nın kantitatif indeksi belirlenir. Terapötik sonucu kontrol etmek, patolojik sürecin ciddiyetini belirlemek için sadece insan immün yetmezlik virüsü ile enfekte olanlarda yapılır.

PCR yöntemi ne kadar güvenilir

Ne yazık ki, bu yöntem ideal değil. Bunun nedeni, analiz verilerinin hatalı olması, yanlış pozitif sonuç gösterebilmesidir. Bu tanı yöntemi, HIV enfeksiyonu varlığı için bir tanı koymak veya tarama testleri yapmak gerektiğinde kullanılır.

Her şey doğru yapılmışsa: tüpler karıştırılmamışsa, kan örneği alınmadan önce reçeteye bakılmış, tüpler hemşire tarafından doğru şekilde etiketlenmiş ve daha birçok işlem yapılmış ve laboratuvar doktoru laboratuvar yönetmeliklerine uymuşsa (manipülasyonlar doğru şekilde yapılmıştır). çapraz kontaminasyon ve diğer normlar hariç biyomateryal), test sisteminin mükemmel kalitesi, ardından PCR analizi, bölümlerin en fazla %2'sinde yanlış pozitif sonuç verebilir.

Temas halinde

Tanım

HIV enfeksiyonu, insan immün yetmezlik virüsünün (HIV) neden olduğu bir hastalıktır. İnsan immün yetmezlik virüsü, retrovirüsler (Retroviridae) ailesine ait RNA içeren bir virüstür. İki tip vardır: HIV-1, HIV enfeksiyonunun ana etken maddesi, pandeminin nedeni, AIDS'in gelişimidir. HIV-2, çoğunlukla Batı Afrika'da bulunan nadir bir tiptir. HIV enfeksiyonunun sonucu AIDS'tir (edinilmiş immün yetmezlik sendromu) - bu, insan bağışıklık sisteminin herhangi bir enfeksiyon türüne direnemeyecek kadar etkilendiği HIV enfeksiyonunun son aşamasıdır. Herhangi bir enfeksiyon, hatta en zararsızı bile ciddi hastalıklara ve ölüme yol açabilir. Bugün, dünya bir HIV enfeksiyonu salgını yaşıyor, dünya nüfusunun görülme sıklığı giderek artıyor. Enfeksiyon kaynağı insandır. İnsanlarda virüs, seminal sıvı, servikal sekresyon, lenfositler, kan plazması, beyin omurilik sıvısı, gözyaşı, tükürük, idrar ve Anne sütü, ancak içlerindeki virüsün konsantrasyonu farklıdır. Virüsün en yüksek konsantrasyonu şu biyolojik ortamlarda bulunur: menide, kanda, servikal sekresyonda. HIV bulaşma yolları: - korunmasız cinsel temas - kan ve kan ürünlerinin transfüzyonu - tıbbi müdahaleler sırasında steril olmayan aletlerin kullanılması - steril olmayan aletlerle sağlık personelinin yaralanması - perinatal enfeksiyon: virüsün hamilelik ve doğum sırasında bulaşması. Virüs stabil değildir ve sadece insan vücut sıvılarında ve sadece hücrelerin içinde yaşayabilir. Bu bakımdan öpüşme ve ev içi temas yoluyla, ortak tuvalet kullanırken, böcek ısırıkları yoluyla, tükürük yoluyla bulaşma tehlikesi yoktur, içme suyu ve Gıda Ürünleri. HIV enfeksiyonunun klinik seyrinde 5 aşama ayırt edilir: kuluçka, birincil belirtiler, gizli, ikincil hastalıklar ve terminal. Enfeksiyondan 3 ila 6 hafta sonra, genellikle grip benzeri semptomlarla karakterize, kalıcı olmayan bir akut sendrom gelişir. yüksek seviyeler periferik kanda viremi. Çoğu durumda, bunu HIV'e özgü bir bağışıklık tepkisi ve genellikle semptomların başlamasından sonraki 4 ila 6 hafta içinde plazma viremisinde bir azalma izler. Serokonversiyondan (spesifik antikorların ortaya çıkması) sonra, yıllarca sürebilen klinik olarak stabil bir asemptomatik faz başlar. Asemptomatik dönem, plazmada düşük seviyede kalıcı viremi ve daha sonra ciddi immün yetmezlik, çoklu fırsatçı enfeksiyonlar, onkogenez ve ölüme yol açan CD4+ T-lenfosit seviyelerinde kademeli bir azalma ile karakterize edilir. HIV RNA'sının PCR ile belirlenmesi, artan bir risk döneminden sonra (potansiyel enfeksiyondan 7-10 gün sonra) olası enfeksiyonun erken tanısında kullanılabilir. HIV RNA'sının viral yükünün belirlenmesi, HIV enfeksiyonunun seyrinin prognozunu değerlendirmek için göstergelerden biri ve tedavinin etkinliğinin en erken göstergesidir. Belirlemenin özgüllüğü %100'dür. Tespitin hassasiyeti 80 IU/ml'dir. Sonuç, hücrelerdeki kopya sayısında verilir.

HIV enfeksiyonu nedir? Bu, retrovirüs ailesinden bir RNA virüsünün neden olduğu bir hastalıktır. HIV enfeksiyonunun son aşamasında, insan bağışıklık sistemi çeşitli enfeksiyonlara direnemez. Bu durumda, olağan SARS ile enfeksiyon bile ölümcül olabilir.

Doğrudan bir enfeksiyon kaynağı bir kişidir, çünkü HIV virüsü yalnızca vücudun hücrelerinde yaşayabilir - çevreye girdiğinde anında ölür. Bu nedenle ev içi temaslar, yiyecek, su, ortak banyo kullanımı yoluyla bulaşmaları imkansızdır.

HIV enfeksiyonu kan plazmasında, servikal sekresyonda, ejakülatta, beyin omurilik sıvısında, tükürükte, gözyaşında, anne sütünde ve idrarda bulunabilir, sadece konsantrasyonu her yerde farklıdır. HIV, enfekte bir donörden kan nakli, korunmasız cinsel temas, tedavi edilmemiş bir tıbbi aletten yaralanma ve hamilelik ve doğum sırasında anneden çocuğa perinatal enfeksiyon yoluyla bulaşabilir.

HIV RNA PCR endikasyonları

İnsan vücudundaki HIV enfeksiyonunun seyri 5 aşamaya ayrılmıştır:

• kuluçka süresi;
• hastalığın ilk belirtilerinin aşaması - grip başlangıcına benzer keskin bir semptom başlangıcı ile karakterizedir;
• gizli faz - yıllarca sürebilir, kandaki hastalığa karşı antikorların ortaya çıkması ile karakterize edilir;
• hastalığın ikincil belirtilerinin aşaması - kandaki lenfositlerin seviyesi yavaş yavaş azalır;
• son aşama.

PCR yöntemini kullanan HIV RNA için kalitatif bir kan testi, olası enfeksiyonun erken teşhisinde uzun süredir kullanılmaktadır. Genellikle HIV virüsü ile potansiyel enfeksiyondan 7-10 gün sonra alınır. PCR yöntemi, viral yük seviyesini belirler ve HIV enfeksiyonu için ilaç tedavisinin etkinliğinin en doğru göstergelerinden biridir.

Merkezimize başvurarak tamamen anonim olarak HIV1 virüsü testi yaptırabilirsiniz.

Hazırlık kuralları

KAN TESTLERİNE HAZIRLIK İÇİN GENEL KURALLAR

Çoğu çalışma için sabahları aç karnına kan bağışı yapılması önerilir, bu özellikle belirli bir göstergenin dinamik olarak izlenmesi durumunda önemlidir. Gıda alımı, hem çalışılan parametrelerin konsantrasyonunu hem de numunenin fiziksel özelliklerini (artan bulanıklık - lipemi - yağlı yiyecekler yedikten sonra) doğrudan etkileyebilir. Gerekirse, 2-4 saatlik bir oruçtan sonra gün içinde kan bağışı yapabilirsiniz. Kan almadan kısa bir süre önce 1-2 bardak karbonatsız su içilmesi tavsiye edilir, bu çalışma için gerekli kan hacmini toplamaya, kan viskozitesini düşürmeye ve test tüpünde pıhtılaşma olasılığını azaltmaya yardımcı olacaktır. Çalışmadan 30 dakika önce sigara içerek fiziksel ve duygusal aşırı yüklenmeyi dışlamak gerekir. Araştırma için kan damardan alınır.

PCR tanı tekniği orijinal olarak 35 yıl önce Amerikalı bilim adamı Kari Mullis tarafından geliştirildi. Çalışmanın mucidi, öncü çalışmaları nedeniyle 1993 yılında uluslararası bir Nobel Ödülü aldı. Herhangi bir laboratuvar faaliyeti için vazgeçilmez hale gelmiştir.

PCR, moleküler biyolojide, DNA'nın küçük bölümlerinin birçok kopyasını yapmak (güçlendirmek) için kullanılır. DNA polimeraz, önceden var olan bir 3-OH grubuna yalnızca bir nükleotid ekleyebilir. Bu yüzden ilk nükleotidi ekleyebileceği bir primere ihtiyacı var. Bu gereksinim, teşhis edilmesi gereken model dizisinin belirli bir bölümünü tanımlamanıza olanak tanır. PCR reaksiyonunun sonunda, milyarlarca kopyada (amplikon) belirli bir dizi birikir.

PCR, özel makineler tarafından gerçekleştirilen termal döngü adı verilen bir ısıtma ve soğutma işlemini içerir. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) nispeten basit bir tekniktir. İn vitro (in vitro analiz) spesifik DNA fragmanları elde etmek için DNA şablonunu güçlendirir. Geleneksel Yöntemler Bir DNA dizisini bir vektörde klonlamak ve onu canlı bir hücrede kopyalamak, genellikle birkaç günden birkaç haftaya kadar süren çalışmaları gerektirir. Ancak birkaç saat sonra PCR kullanarak DNA dizilerinin amplifikasyonunun sonuçlarını alabilirsiniz.

Bulaşıcı hastalıkların tanısında kullanılan biyokimyasal analizlerin çoğu oldukça büyük miktarda biyolojik materyal gerektirir. PCR için bu koşul zorunlu değildir. Böylece PCR daha hassas patojen tespiti sağlayabilir. Ve oldukça sınırlı miktarda biyomateryal ile daha kısa sürede belirli dizilerin daha yüksek amplifikasyon seviyeleri. Bu özellikler tekniği son derece kullanışlı hale getirir. Sadece temel araştırmalarda değil, aynı zamanda kişisel amaçlar için de. Genetik kimlik testi, adli tıp, endüstriyel kalite kontrolü dahil.

Analizin ana değeri, ilk belirtiler gelişmeden önce cinsel yolla bulaşan patolojileri tespit etme olasılığında yatmaktadır. HIV enfeksiyonunun erken teşhisi gerekliyse PCR analizi kullanılır. Bir donörün kanındaki virüsün RNA'sını belirlemenin yanı sıra. Testin yüksek duyarlılığı nedeniyle, iddia edilen enfeksiyondan 7-14 gün sonra bir yanıt alınabilir. Teşhisin güvenilirliği% 85'ten% 98'e ulaşacaktır. Ancak, PCR testi herkese atanmaz. Çünkü oldukça pahalı bir araştırma. En önemlisi, pahalı ekipman ve laboratuvar personelinden belirli profesyonel beceriler gerektirir. Hasta daha önce enfeksiyon riskinin arttığı durumlarda bulunmadıysa, polimeraz reaksiyonu önerilmez.

HIV için kalitatif tip polimeraz reaksiyonu

HIV için yüksek kaliteli PCR yapmak, vücutta viral bir hastalığın varlığını belirlemenizi sağlar. Hasta sonucu aşağıdaki işaretler şeklinde alabilir: pozitif, yanlış pozitif, negatif. Ancak çalışma, retrovirüsün kopya sayısını belirlemeyi mümkün kılmıyor. Daha önce enfeksiyon tanısı almış hastalarda kalitatif analiz yapılmaz. Antiviral tedavinin etkinliği üzerinde bir kontrol olarak reçete edilmemiştir.

HIV için PCR kantitatif tipi

Hastanın biyolojik materyalindeki virüs RNA'sının kopyalarını belirlemek amacıyla yapılır. Kantitatif PCR, devam eden tedavinin izlenmesi için yalnızca önceden tanımlanmış bir enfeksiyonu olan hastalara reçete edilir.

gerçek zamanlı PCR

DNA bölümlerinin kopyalarının oluşumu için laboratuvar tanısında kullanılır. Ayrıca biyomateryaldeki DNA dizisinin eşzamanlı nicel çalışması ve tespiti için. Aslında, tanı nicel bir PCR'dir.

Bir notta!

Çeşitli laboratuvarlarda çeşitli teşhis formülasyonları bulabilirsiniz: "PCR kantitatif belirleme" ve "Gerçek zamanlı PCR".

Her iki analiz de aynıdır.

HIV teşhisi için materyal alınması

PCR kullanılarak HIV teşhisi için biyolojik materyalin örneklenmesi belirli standartlara göre gerçekleştirilir. Manipülasyon tedavi odasında gerçekleştirilir. Tek kullanımlık steril aletler kullanılmaktadır. Paketin aletlerle açılması doğrudan hastanın yanında gerçekleştirilir. Toplanan materyal, CrO3 (krom karışımı) ile ön işleme tabi tutulmuş steril tüplere yerleştirilir. Biyolojik materyal, sabahları ve aç karnına bağışlanan venöz kandır. Testten birkaç gün önce alkol, yağlı ve baharatlı yiyeceklerin kullanımını hariç tutmalı, ilaç almayı bırakmalısınız.

iptal edilirse ilaçlar mümkün değilse, bu analizden önce bildirilmelidir.

Ek olarak, cinsel yolla bulaşan hastalıkları belirlemek için üretra ve vajinadan bir sürüntü alınabilir. Çalışma anonim olarak yapılır, hasta sonuçları kişisel olarak alır. Yanınızda bir kimlik bulundurmanız tavsiye edilir.

HIV için PCR'yi ne kadar süre alabilirim

HIV virüsünün varlığını daha sonra tespit etmek mümkündür 4-6 enfeksiyondan sonraki günler. Bu durumda, analizin bilgi içeriği %85'e ulaşacaktır. 10-13 gün sonra, analiz hastalığı %98 doğrulukla belirleyebilir. Negatif bir sonuç, ancak iddia edilen enfeksiyondan en geç 2 hafta sonra gönderilirse geçerli olacaktır.

Yanlış pozitif sonucun nedenleri

Yanlış pozitif sonuç almak zordur.

Bu, biyolojik materyal örnekleme kurallarına uyulmaması, tüpün yanlış etiketlenmesi, düşük kaliteli bir test sisteminin kullanılması ve diğer benzer faktörler durumunda mümkündür. Diğer durumlarda, böyle bir sonuç elde etme şansı% 2'den fazla değildir.

Test sonuçlarını almak ne kadar sürer?

Teknik açıdan PCR sonuçları 4 saat içinde alınabilir. Bununla birlikte, pratikte, hasta bir ila birkaç gün arasında bir laboratuvar sonucu alır. Genel olarak, zamanlama laboratuvarın iş yüküne ve çalışmalarının ne kadar organize olduğuna bağlıdır.

Yenidoğanda polimeraz reaksiyonu yürütmek

Bir çocuk HIV pozitif bir anneden doğduğunda PCR reçete edilir. Bu durumda ELISA yapmak bilgilendirici değildir. Çocuğun yaklaşık 2 yaşına kadar retrovirüse karşı antikorları olduğundan. Bu nedenle enzim immunoassay kesin bir cevap vermeyecektir. 4-6 haftalık bir çocukta PCR yaparken ve olumlu bir sonuç alırken enfeksiyon hakkında konuşacağız.

8 haftalıktan altı aylıkken yapılan PCR negatif sonuç verirse (çocuğun anne sütü ile beslenmemesi şartıyla), enfeksiyon hariç tutulur.

ELISA, HIV'i belirlemek için neden daha iyidir?

Polimeraz reaksiyonu, virüsün RNA'sını, kantitatif dahil olmak üzere vücuttaki varlığını tanımlamanıza izin verir. ELISA'nın görevi, HIV enfeksiyonuna karşı antikorları belirlemektir. Olası enfeksiyonu belirlemek için enzim immünoassay, PCR'den daha düşük değildir, doğruluğu% 99'a ulaşır. Bununla birlikte, PCR'den farklı olarak, hastalığı gelişiminin erken aşamalarında belirleyemez.

HIV için PCR'nin Faydaları

• Polimeraz reaksiyonu, doğrudan enfeksiyöz bir ajanın varlığını belirler. Örneğin, ELISA yalnızca bir mikroorganizmanın antikorlarını ve atık ürünlerini tespit edebilir.
• Test, birkaç çapraz reaksiyona girenler olsa bile belirli bir patojeni açıkça tanımlar.
• Teknik, kurutulmuş kan damlaları da dahil olmak üzere her türlü biyolojik materyali incelemeye izin verir.

PCR'nin eksiklikleri arasında, analizin artan duyarlılığı seçilebilir. Bu bazen yanlış bir pozitif sonuca neden olur. Bu, test tüpünde veya aletlerde az miktarda yabancı DNA bulunduğunda bile olur.

PCR ve ELISA kullanarak HIV teşhisi: yorumlama, sonuçların güvenilirliği

Test sonuçlarının vücutta HIV ve p24 antijenine karşı antikor olmadığını gösterdiği ELISA negatiftir. Bu moleküller mevcutsa, pozitif bir teşhis sonucu verilir. Bazı durumlarda hasta yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuç alabilir. Bu bir sonuç erken dönem hamilelik, herpes enfeksiyonunun varlığı, yanlış materyal örneklemesi, test tüplerinin taşınmasının ihlalleri. Ayrıca devam eden otoimmün hastalıkları ve hepatiti olan hastalarda da benzer sonuçlara rastlanmaktadır. çeşitli tipler. ELISA ve virüs proteinlerinin ayrılmasını birleştiren bir Western Blot (bağışıklık lekelemesi) gerçekleştirilebilir.

Daha sonra, viral enfeksiyon gp160'ın glikoproteininin varlığında pozitif bir sonuç olacaktır. HIV zarf glikoproteinleri gp41 ve gp120'nin öncüsüdür. Bu moleküller yoksa, laboratuvar testinin sonucu negatif olarak kabul edilir. Western Blot'u ELISA ile birlikte yürütmek, güvenilirliği %98'i aşan sonuçlar elde etmenizi sağlar. ELISA'nın pozitif ve Western Blot'un negatif olması durumunda, test şüpheli kabul edilir ve PCR gerektirir.