Bir PCR testinin hazırlanması ne kadar sürer? Smear ve diğer PCR testleri nasıl yapılır

Çeşitli türlerdeki bulaşıcı hastalıkların teşhisi - hem viral hem de bakteriyel - patojenleri erken bir aşamada tanımlamayı amaçlar, bu da zamanında ve özellikle reçete yazmayı mümkün kılar. etkili tedavi. en çok modern yöntem enfeksiyonların tespiti, polimeraz zincir reaksiyonu anlamına gelen PCR'dir. Bu yöntemin özü nedir ve amacı nedir?

Polimeraz reaksiyonunun özü

Herhangi bir virüs ve mikroorganizmanın yapısı RNA veya DNA molekülleri içerir. Bu bileşiklerin her biri için benzersiz olması karakteristiktir ve bu nedenle yetişkinlerde veya çocuklarda bir kan testinde nükleik asitleri izole ederek mutlak doğrulukla bir teşhis yapılabilir.

Ne yazık ki, hem kan örneklerinde hem de diğer biyolojik materyallerde bulunan DNA konsantrasyonu oldukça düşüktür, bu nedenle sıradan teşhis yöntemleriyle belirlenemez. Bu problemle başa çıkmak için bir zamanlar polimeraz zincir reaksiyonu icat edildi.

Bu nedenle, bu analizin özü, içindeki DNA moleküllerinin konsantrasyonunun artması nedeniyle kan örneğinin spesifik olarak işlenmesinde yatmaktadır ve gelecekte tiplerinin oluşturulması, patojenin türünü de tanımlamayı mümkün kılmaktadır. Doğru tanı koymak için.

PCR kan testi nasıl yapılır?

PCR yöntemi sadece laboratuvar koşullarında gerçekleştirilir. Bunu gerçekleştirmek için hastanın RNA ve DNA'sının yapısını birkaç kez artıran özel enzimler kullanılır. Aynı zamanda, böyle bir sayıda oluşturulmalı ki, mümkün görsel araştırma Anket sırasında, böyle bir sitenin her açıdan gerekli koşullara uygun bir kopyası gerçekleştirilir. analiz nedir kan PCR RNA üzerinde, birçokları için ilginç.

Laboratuvar, çeşitli bulaşıcı ajanların tam yapısını gösteren gerekli veri tabanına sahiptir. PCR yöntemini kullanmak, yalnızca patojen tipini belirlemeye değil, aynı zamanda nicel oranını hesaplamaya da izin verir.

PCR teşhisi ayrıca aşağıdakilerin öne çıktığı bazı yenilikler içerir:

Çeşitli DNA parçalarının bağlanması;

Mutasyonun tanıtılması;

Babalık kurmak vb.

PCR ile hangi hastalıklar tespit edilir?

PCR sayesinde hemen hemen tüm bakteriyel ve viral patolojileri tanımlamak mümkündür. Araştırma için sadece kan değil, üretradan ve rahim ağzından smear, tükürük, meni gibi diğer biyolojik materyaller de kullanılabilir. Analiz, belirli bir hastalığın etken maddesi insan kanına girdiğinde oldukça bilgilendirici hale gelir. Bu nedenle, aşağıdaki patolojiler için PCR için bir kan testi reçete edilir:

Viral hepatit tipleri A, B, C, D ve TT;

Herpetik bir doğanın enfeksiyonu (yani, birinci, ikinci ve dördüncü tipteki virüsler);

Sitomegalovirüs;

Enteroviral enfeksiyon;

HIV enfeksiyonu;

Kızamıkçık;

Listeriosis;

Zona hastalığı;

Enfeksiyöz mononükleoz;

Toksoplazmoz.

PCR'nin diğer biyomalzemeler kullanılarak uygulanmasını dikkate alırsak, bu yöntemle tespit edilebilecek patolojiler listesine aşağıdakiler eklenmelidir:

salmonelloz;

Difteri;

Gardnerelloz;

mikoplazmoz;

Tüberküloz;

trikomoniyaz;

- papilloma virüsü enfeksiyonu (insan papilloma virüsünün yaklaşık yüz farklı suşu).

Toksoplazmoz, sitomegalovirüs, herpes enfeksiyonu ve kızamıkçık içeren TORCH enfeksiyonları için hamilelik sırasında bir PCR kan testi özellikle önem kazanmıştır. Bunun nedeni, yukarıdaki hastalıkların fetüsün gelişiminde anormalliklere neden olabilmesidir.

PCR'nin Avantajları

Bu yöntemin avantajları nelerdir?

• Yüzde yüz teşhis doğruluğu: Kanda patojenin en az birkaç DNA parçası varsa, bunlar PCR reaksiyonu ile belirlenecek, bu da doğru teşhisin yapılacağı anlamına geliyor. Bu yöntem ile diğer teşhis yöntemleri arasındaki temel fark budur - genel analiz kan, ELISA ve diğerleri.
• özgüllük. Örneğin, borreliosis için PCR kan testi sırasında, onu enzim immünolojik testinden veya ELISA'dan ayıran yanlış negatif veya yanlış pozitif sonuç diye bir şey yoktur.
• Analiz, tek bir biyomateryal numunesi bazında aynı anda birkaç patojeni belirlemek için gerçekleştirilebilir, çünkü bu nedenle Bu method hasta için uygun hale gelir, çünkü birkaç kez teste girmesi gerekmez.
• Hızlılık. Bakteriyolojik inceleme sırasında gerekli olan özel besin ortamlarında patojeni izole etmeye ve büyütmeye gerek yoktur. Bitmiş sonucu analiz gününde alabilirsiniz.

• Hepatit için bir PCR kan testi vasıtasıyla, örneğin, hasta enfeksiyon taşıyıcısı (HIV veya hepatit) olarak hareket ettiğinde vücuttaki hastalığın gizli bir etken maddesi belirlenir.
• Uygun Fiyat. Bir patojeni belirlemek için PCR analizinin maliyeti iki yüz elli ila beş yüz ruble arasında değişmektedir. Virüsler için yarı nicel bir inceleme biraz daha pahalı - yaklaşık bin ruble.

Yöntemin dezavantajları

PCR, laboratuvar ekipmanına yüksek talepler getiren yüksek teknolojili bir araştırma yöntemidir. Analiz odası mutlaka biyolojik bir filtreye sahip olmalıdır, çünkü havada her zaman DNA molekülleri içeren tükürük ve cilt parçacıkları bulunur. eğer uymazsan teknik gereksinimler biyomalzemelerle çalışmak yanlış teşhise neden olabilir.

PCR için kimler kan testi yaptırmalıdır?

Ankete herkes katılabilir. Bunun endikasyonu cinsel yolla bulaşan enfeksiyon şüphesidir (HIV enfeksiyonu, bakteriyel vajinoz, klamidya). Korunmasız cinsel temas kazara meydana gelirse, bir kişi belirli bir hastalıkla enfekte olmuşsa, erken bir aşamada doğru tanıyı yalnızca PCR mümkün kılacaktır.

TORCH kompleksinde kan hatasız hamile kadınlar ve sadece çocuk sahibi olmayı planlayanlar tarafından kiralanır.

PCR maksimum olmasına rağmen etkili yöntem teşhis, ancak içinde döngüler halinde gitmeniz gerekmez. Herhangi bir patoloji varlığında hastayı kapsamlı bir şekilde muayene etmek gerekir. Polimeraz zincir reaksiyonu patojeni belirlemeyi mümkün kılarsa, serolojik bir çalışma sayesinde, tedavinin etkinlik seviyesini, insan vücudunun patojene ve ilaçlara tepkisini değerlendirmek mümkündür. HIV için bir PCR kan testi doktor tarafından istenmelidir.

Prosedürün özellikleri ve hazırlanması

PCR tekniği kullanılarak muayene edilen hastalar en güvenilir sonucu alırlar. Bu durumda hata olasılığının neredeyse tamamen ortadan kaldırıldığı söylenmelidir. Bu analizin sonuçları da oldukça hızlı bir şekilde hazırlanır, bu da tanıyı belirlemeyi kolaylaştırır ve gerekli tıbbi prosedürleri zamanında reçete etmek mümkün olur.

PCR yöntemiyle elde edilen sonucun güvenilirliği, inceleme için biyolojik materyalin doğru teslimi ile belirlenir. Hiçbir şeyle kirlenmemelidir, aksi takdirde sonuç objektif olmayacaktır.

• işlemden bir gün önce cinsel ilişki yasağı;
• enfeksiyonları saptamak için kan testi sabahları ve sadece aç karnına yapılmalıdır;
• İdrar da sabahları steril bir kapta verilir.

İşlemden bir buçuk veya iki gün sonra PCR kan testinin kodu çözülür ve sonuç hazır olur. Sonucu aynı gün alabileceğiniz durumlar bile vardır.

Analiz için materyal nasıl hazırlanır?

Çalışmayı olabildiğince başarılı bir şekilde yürütmek için materyali hastadan doğru bir şekilde almak ve yetkin hazırlığını yapmak gerekir. Bir laboratuvar çalışmasında numune hazırlama sırasında çok sayıda hata (yaklaşık yüzde yetmişe kadar) meydana geldiği bilinen bir gerçektir.

Şu anda bazı laboratuvarlarda kan vakum sistemleri. Bir yandan hastayı minimal düzeyde yaralar, diğer yandan malzemeyi ne çevreye ne de personele temas etmeyecek şekilde almayı mümkün kılar. Bu, biyolojik materyalin kontaminasyonunu önler ve analizin güvenilirliğini en üst düzeye çıkarır.

Sonuçların deşifre edilmesi

PCR için bir kan testinin sonucu pozitif veya negatif olabilir. Kan testi negatifse, bu, hasta tarafından verilen materyalde bulaşıcı patojenlerin bulunmadığını gösterir. Pozitif bir analiz, kanda enfeksiyöz ajanlar olduğunu doğrular, bu da hastanın en etkili ve kaliteli tedavisinin gerekli olduğu anlamına gelir.

Elde edilen sonuç, hastalığın herhangi bir belirtisinin yokluğunda bile pozitif olabilir. Bu, ya patolojik sürecin başladığını ya da kişinin taşıyıcı olduğunu gösterir. İkincisi tespit edilirse, tıbbi prosedür gerekmez. Bu durumda, hastanın, örneğin herpes ve diğer enfeksiyonlar için periyodik bir PCR kan testi anlamına gelen bir doktor tarafından sürekli olarak izlenmesi önerilir.

Çoğu zaman üretrada, servikal kanaldan yapılan kazımalarda, tükürükte bulunurlar. Bununla birlikte, hasta bir kişinin, bu hastalıktan rahatsız olmasa bile, tamamen sağlıklı insanlara bulaşabileceği unutulmamalıdır. Kronik hale gelebilir. PCR kullanılarak elde edilen olumlu bir sonuçla, uygun tıbbi prosedürlerin reçete edilmesi gerektiği söylenmelidir.

PCR'nin kantitatif karakterizasyonu

Enfeksiyonlar için bir PCR kan testi de nicel olarak karakterize edilir. Böyle bir sonuç, çeşitli enfeksiyonlar için bireysel olduğu için yalnızca bir uzman tarafından değerlendirilebilir. Doktorun, belirli bir hastalığın gelişiminin kesin aşamasını belirlemek için böyle bir patolojik sürecin aktivite derecesini belirlemesine izin veren nicel özelliktir.

Elde edilen sonuçların incelenmesi, uzmanın uygun ilacı seçmesine, gerekli dozu belirlemesine yardımcı olacaktır.

Teşhis doğruluğu

PCR'nin en önemli üç özelliği vardır, yani:

Duyarlılık;

özgüllük;

Kesinlik.

PCR kullanarak enfeksiyonların teşhisi, vücutta enfeksiyöz ajanları tespit etme olasılığının yüksek olması ile karakterize edilir. Kan ve diğer sıvıların analizi oldukça spesifiktir. Onun sayesinde, örneğin hepatit veya HIV için bir PCR kan testini geçerek belirli bir bulaşıcı süreci kolayca belirleyebilirsiniz. Ayrıca, PCR teşhisi oldukça hassastır. Test materyalinde minimum sayıda enfeksiyöz ajan varsa, PCR yöntemi her zaman pozitif olacaktır.

Çok nadir durumlarda yanlış pozitif sonuç alınabilir. Enfeksiyon yokluğunda, buna göre negatif olacaktır.

Gizli hastalıkların tanımlanması

Bir kişinin CYBE olduğundan şüpheleniliyorsa, gizli enfeksiyonları belirlemek için bir kan testi yapılır. Genital bölgenin herhangi bir hastalığı ancak hasta muayene edilerek belirlenebilir.

Aşağıdaki hastalıklar kursun gizli bir doğasına sahip olabilir:

• üreaplazmoz;
• klamidya;
• mikoplazmoz;
• uçuk;
• bel soğukluğu;
• gardnerelloz.

Bu enfeksiyonlar oldukça yaygın ve çok sinsidir. Hastalığın başlangıcında iyi tanımlanmış semptomları yoktur, bu nedenle hastalar bir uzmana gitmezler. Klamidya, borreliosis ve diğer enfeksiyonlar için zamanında PCR kan testinin sonuçları, doktorun etkili bir tedavi reçete etmesine yardımcı olacaktır.

STD'ler olumsuz etkiliyor üreme sistemi. Kısırlığa veya fetüste kusurların ortaya çıkmasına neden olabilirler. Bu nedenle hamilelik planlamadan önce PCR testi yaptırmak önemlidir.

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) - teşhis alanında yüksek doğrulukta bir yöntem kalıtsal patolojiler, enfeksiyonlar, herhangi bir aşamada (akut veya kronik) viral hastalıklar ve ayrıca - erken bir aşamada - genetik materyal olan DNA'larına, RNA'larına dayanarak patojenleri tanımlayarak hastalığın belirgin tezahürlerinden önce, hastadan elde edilir. Ve bugün polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemlerinin özü, teşhis aşamaları ve prensipleri ile maliyeti hakkında konuşacağız.

polimeraz zincir reaksiyonu nedir

Analizin temeli, amplifikasyondur (ikiye katlama) - insan genetik kompleksini temsil eden kısa bir DNA bölümünden (deoksiribonükleik asit) birçok kopyanın oluşturulması. Çalışma çok az miktarda fizyolojik madde (balgam, dışkı, epitel kazımaları, prostat suyu, kan, meni, amniyotik sıvı, mukus, plasental doku, idrar, tükürük, plevral sıvı, beyin omurilik sıvısı) gerektirir. Bu durumda örneğin bir hastanın ürogenital yolunda tek bir zararlı mikrop bile tespit edilebilir.

PCR tekniği (polimeraz zincir reaksiyonu), 1993 yılında Nobel Ödülü'nü alan Amerikalı bilim adamı K. Mullis tarafından geliştirildi.

Aktif olarak kullanılan:

• enfeksiyonların erken tanısında, genetik,;
• araştırma için son derece az miktarda DNA varlığında adli tıbbi muayenede;
• veterinerlik, eczacılık, biyoloji, moleküler genetikte;
• bir kişinin DNA ile tanımlanması için babalık onayı;
• paleontoloji, antropoloji, ekolojide (ürünlerin kalitesini, çevresel faktörleri izlerken).

Bu video size polimeraz zincir reaksiyonunun ne olduğunu söyleyecektir:

Kime atanır

Bulaşıcı hastalıkların tanısında polimeraz zincir reaksiyonu, yüksek doğruluk ve güvenilirlik açısından en güvenilir yöntemlerden biridir. Örneğin, klamidya ve diğer birçok patojen için PCR analizinin güvenilirliği %100'e (mutlak) yaklaşır. Çoğu zaman, polimeraz zincir reaksiyonu prosedürü, teşhis sırasında belirli bir patojeni tanımlamakta zorluk çeken hastalara reçete edilir.

Laboratuvar PCR testi kullanılır:

• mahsuller veya immünolojik yöntemler kullanılarak tanımlanması zor olan idrar ve genital organların enfeksiyonuna neden olan patojenleri tespit etmek;
• ilk analizin pozitif, ancak şüpheli bir sonucu durumunda ilk aşamada HIV'in yeniden teşhisi için (örneğin, AIDS ile enfekte olmuş ebeveynlerden yenidoğanlarda);
• erken bir aşamada onkolojik bir hastalık oluşturmak (onkogen mutasyonlarının incelenmesi) ve belirli bir hasta için tedavi rejiminin bireysel olarak düzeltilmesi;
• Kalıtsal patolojilerin erken tespiti ve potansiyel tedavisi amacıyla.

Bu nedenle, gelecekteki ebeveynler, genetik bir patolojinin taşıyıcıları olup olmadıklarını öğrenmek için test edilir, çocuklarda PCR, kalıtsal bir hastalığa maruz kalma olasılığını belirler.

• Fetal anormallikleri tespit etmek erken dönem gebelik (büyüyen bir embriyonun bireysel hücreleri olası mutasyonlar için incelenir);
• organ nakli öncesi hastalarda - "doku tiplemesi" için (doku uyumluluğunun belirlenmesi);
• bağışlanan kandaki tehlikeli patojenik organizmaları tespit etmek;
• yeni doğan bebeklerde - gizli enfeksiyonları tespit etmek için;
• antiviral ve antimikrobiyal tedavi sonuçlarını değerlendirmek.

Neden bu prosedürden geçiyorsunuz?

PCR, neredeyse %100 sonuç veren oldukça etkili bir tanı yöntemi olduğundan, prosedür kullanılır:

• kesin tanıyı doğrulamak veya hariç tutmak;
• tedavinin etkinliğinin hızlı değerlendirilmesi.

Çoğu durumda, diğer bakteriyolojik, immünolojik ve virolojik tanı yöntemleri işe yaramazsa, gelişen bir hastalığı saptamak için mümkün olan tek test PCR'dir.

• Virüsler, enfeksiyondan hemen sonra ve hastalık belirtileri ortaya çıkmadan önce PCR ile tespit edilir. Virüsün erken tespiti, hızlı tedaviye izin verir.
• Sözde "viral yük" (veya vücuttaki virüslerin sayısı) da kantitatif DNA analizi ile belirlenir.
• Spesifik patojenler (Koch'un tüberkül basili gibi) zordur ve kültürlenmesi çok uzun sürer. PCR analizi, araştırma için uygun örneklerdeki minimum patojen sayısını (canlı ve ölü) hızlı bir şekilde belirlemenizi sağlar.

Ayrıntılı patojen DNA analizi kullanılır:

• tedaviye hemen başlamanıza izin veren belirli antibiyotik türlerine duyarlılığını belirlemek;
• evcil, vahşi hayvanlar arasında salgınların yayılmasını kontrol etmek;
• önceki salgınları besleyen yeni bulaşıcı mikrobiyal türleri ve patojen alt tiplerini belirlemek ve izlemek.

Teşhis türleri

Standart Yöntem

analiz polimeraz zincirleme reaksiyonuözel primer enzimler kullanılarak belirli bir DNA ve RNA fragmanının çoklu amplifikasyonu (iki katına çıkarılması) temelinde gerçekleştirilir. Kopyalama zinciri sonucunda araştırma için yeterli miktarda materyal elde edilir.

İşlem sırasında, numunede fiilen mevcut olsa bile, yalnızca istenen parça (belirtilen özel koşullara karşılık gelen) kopyalanır.

PCR'nin nasıl gittiği hakkında, bunu söyler detaylı video faydalı diyagramlarla:

Öbür metodlar

• Gerçek zamanlı PCR. Bu tür bir çalışmada, belirli bir DNA fragmanını tanımlama süreci, 30-40 döngülük tüm zincir tamamlandıktan sonra değil, her döngüden sonra başlar. Bu tür bir çalışma, vücuttaki bir patojenin (virüs veya mikrop) miktarı hakkında bilgi edinmenize, yani nicel bir analiz yapmanıza olanak tanır.
• RT-PCR (ters transkripsiyon modu). Bu tahlil, genetik temeli RNA olan virüsleri (örneğin, hepatit C virüsü, immün yetmezlik virüsü) tespit etmek için tek iplikli RNA'yı bulmak için kullanılır. Böyle bir çalışmada, özel bir enzim kullanılır - ters transkriptaz ve belirli bir primer ve tek iplikli DNA, RNA temelinde oluşturulur. Daha sonra bu zincirden ikinci bir DNA zinciri restore edilir ve standart prosedür uygulanır.

Tutma endikasyonları

PCR prosedürü bulaşıcı hastalıklar, neonatoloji, kadın doğum, pediatri, üroloji, jinekoloji, zührevi, nöroloji, nefroloji, oftalmoloji kliniğinde kullanılmaktadır.

Analizin amacı için endikasyonlar:

• kalıtsal patoloji olasılığı olan bir çocukta genetik anormallikler geliştirme riskinin açıklığa kavuşturulması;
• bir hamilelik planlarken her iki ebeveyne veya devam eden bir hamilelik sırasında annenin ciddi bir durumuna teşhis koymak;
• gebe kalma ile ilgili zorluklar, kısırlık nedenlerinin belirlenmesi;
• Şüpheli cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlar akut evre ve kronik hale geçiş semptomları ile;
• belirsiz kökenli inflamatuar süreçlerin nedenlerinin tespiti;
• korunmasız gündelik ve sürekli cinsel temaslar;
• patojenik bir mikroorganizmanın spesifik antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesi;
• Açık semptomların gelişmesinden önce patojenleri tespit etmek için gizli enfeksiyon şüphesi olan hastalar (klinik öncesi tanı);
• hastaların hastalıktan sonra iyileşmeyi onaylaması (geriye dönük tanı);

Teşhis ayrıca aşağıdaki patojenleri doğru bir şekilde tanımlamak gerekirse kullanılır:

• hepatit virüsleri (A B C G), insan bağışıklık yetmezliği, sitomegalovirüs;
• vibrio kolera;
• herpes simpleks virüsü, herpetiform türler;
• retro - adeno - ve rinovirüsler;
• kızamıkçık virüsleri, Epstein-Barr, suçiçeği (Zoster - virüs);
• parvo ve picornavirüsler;
• bakteri Helicobacter pylori;
• legionella, patojenik Escherichia coli türleri;
• stafilokok aureus;
• patojen;
• Clostridia, difteri ve Haemophilus influenzae;

Ayrıca enfeksiyonları belirlemek için kullanılır:

• Enfeksiyöz mononükleoz;
• borreliosis, listeriosis, kene kaynaklı ensefalit;
• Candida mantarlarının neden olduğu kandidiyaz;
• cinsel enfeksiyonlar - trichomoniasis, ureaplasmosis, soluk treponema, gardnerellosis, gonore, mikoplazmoz, klamidya;
• tüberküloz.

Tutmak için kontrendikasyonlar

İşlem hasta ile değil, vücuda herhangi bir etkisi olmaksızın, araştırma için alınan biyolojik materyal ile yapıldığından, potansiyel bir tehlike olmadığı için PCR için herhangi bir kontrendikasyon yoktur.

Ancak kolposkopi işleminden sonra rahmin servikal kanalından biyomateryal örneklemesi yapılmaz. Smearlerin teslimine, analiz için kazımalara adetin bitiminden ve taburculuğun tamamen kesilmesinden sadece 4 ila 6 gün sonra izin verilir.

yöntem güvenli mi

Laboratuvarda biyomateryalinin izole bir çalışmasında hasta üzerinde olumsuz bir etki mümkün değildir.

Prosedür için hazırlık (analiz için biyolojik maddelerin teslimi)

Yabancı bir patojenin DNA'sının tespit edildiği PCR analizi için numune olarak herhangi bir biyolojik sıvı, doku, vücut salgıları kullanılır. Test maddesinin örneklenmesi, bir damardan kan alma, gırtlak, burun boşluğu, üretra, plevral boşluk, serviksten kazıma şeklinde gerçekleştirilir.

Teşhis prosedüründen önce doktor hastaya hangi malzemenin alınacağını açıklar:

1. Cinsel enfeksiyonlar için muayene edilirken genital organlardan salgılar, idrar ve üretradan bir yayma alınır.
2. Herpetik enfeksiyonlar, sitomegalovirüs, mononükleoz için analiz yaparken - idrar alırlar, analiz için boğaz çubuğu, hepatit, toksoplazmoz - damardan kan alırlar.
3. Teşhis amaçlı Çeşitli türler beyin omurilik sıvısı alınır.
4. Pulmonolojide analiz için numuneler balgam ve plevral sıvıdır.
5. Gebelik sırasında olası intrauterin enfeksiyonlarla ilgili bir çalışma yapılırken, analiz için amniyotik sıvı ve plasental hücreler kullanılır.

Analizin güvenilirliği ve doğruluğu, malzeme alınırken koşulların sterilliğine bağlıdır. PCR testi oldukça hassas olduğundan, test maddesinin herhangi bir kontaminasyonu sonucu bozabilir.

Biyomateryal teslimatı için yetkin hazırlık, hastalar için herhangi bir zorluk oluşturmaz. Bazı öneriler var:

• cinsel enfeksiyonlar için analiz yaparken:
  • malzemenin tesliminden 72 saat önce yakın temasları hariç tutun;
  • 3 gün boyunca herhangi bir vajinal ürünü kullanmayı bırakın;
  • önceki günün akşamından beri, incelenen alanın hijyenini gerçekleştirmeyin;
  • üretradan bir örnek alırken 3-4 saat idrara çıkmayı hariç tutun;
• enfeksiyon testinden bir ay önce antibiyotik almayı bırakın;
• sabahları yemeden ve içmeden önce kan bağışı yapın;
• idrarın ilk sabah kısmının toplanması, kapsamlı bir samimi tuvaletten sonra steril bir kapta gerçekleştirilir.

Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi kullanılarak teşhisin nasıl gerçekleştirildiği hakkında daha fazla bilgi edinin.

prosedür nasıl

Reaktörde (amplifikatör veya termal döngüleyici) tekrar tekrar bir PCR çalışması gerçekleştirirken, belirli döngüler tekrarlanır:

1. İlk adım denatürasyondur.. Patojenin DNA (veya RNA) varlığından şüphelenilen tükürük, kan, biyopsi, jinekolojik numuneler, balgam, materyalin ısıtıldığı ve DNA'nın iki ayrı zincire ayrıldığı bir amplifikatöre yerleştirilir.
2. İkinci adım, malzemenin tavlanması veya hafifçe soğutulmasıdır. ve ona tanıyabilecek primerler eklemek istenilen alanlar DNA molekülünde bulunur ve onlara bağlanır.
3. Üçüncü adım uzama- DNA ipliklerinin her birine 2 primerin eklenmesinden sonra oluşur. İşlem sırasında patojenin DNA parçası tamamlanır ve kopyası oluşturulur.

Bu döngüler, her seferinde belirli bir DNA fragmanının (örneğin, belirli bir virüsün programlandığı bir segment) kopyalarının iki katına çıkmasına yol açan bir "zincirleme reaksiyonu" gibi tekrarlanır. Birkaç saat içinde DNA parçasının birçok kopyası oluşturulur ve numunedeki varlığı tespit edilir. Bundan sonra, enfeksiyon türünü belirlemek için sonuçlar analiz edilir ve çeşitli patojen türlerinin veri tabanı ile karşılaştırılır.

Aşağıdaki PCR reaksiyonuna dayalı sonuçların yorumlanması ve sonuç hakkında bilgi edinin.

Sonuçların deşifre edilmesi

Çalışmanın nihai sonucu, biyolojik materyalin tesliminden 1-2 gün sonra verilir. Çoğu zaman - zaten analizden sonraki ilk gün.

Kalitatif Analiz

• Olumsuz sonuç, araştırma için gönderilen maddede hiçbir enfeksiyöz ajan izi bulunmadığı anlamına gelir.
• Pozitif sonuç, biyolojik bir numunede patojenik virüslerin veya bakterilerin çok iyi tespit edilmesi anlamına gelir. yüksek derece teslimat sırasında doğruluk.

Sonuç pozitifse, ancak enfeksiyonun aktivasyon belirtisi yoksa, vücudun bu durumuna asemptomatik “sağlıklı taşıma” denir. En sık viral hastalıklarda belirli bir yerden (servikal kanal, üretra, ağız boşluğu) biyomateryal alırken gözlenir. Bu durumda tedavi gerekli değildir, ancak bir olasılık olduğu için sürekli tıbbi gözetim gereklidir:

• virüsün taşıyıcılardan yayılması ve sağlıklı insanların enfeksiyonu;
• sürecin aktivasyonu ve hastalığın kronik bir forma geçişi.

Bununla birlikte, kan testi pozitifse, bu, enfeksiyonun vücudu etkilediğini gösterir ve bu artık bir taşıyıcılık durumu değil, acil spesifik tedavi gerektiren bir patolojidir.

Kantitatif Analiz

Kantitatif sonuç, uzman tarafından özellikle belirli bir enfeksiyon türü için belirlenir. Temelinde, doğru tedaviyi derhal reçete etmeyi mümkün kılan gelişme derecesini, hastalığın evresini değerlendirmek mümkündür.

ortalama tutar

Bir polimeraz zincir reaksiyonu yürütme fiyatları şu şekilde belirlenir: çalışmanın türü, patojeni tanımlamanın karmaşıklığı, biyolojik materyali toplamanın zorluğu, analiz türü (nitel veya nicel), laboratuvardaki fiyat seviyesi.

Öte yandan, PCR çalışmasında, analiz için bir tür materyal alındığında aynı anda birkaç patojen tespit edilebilir. Bu, diğer laboratuvar testlerinden tasarruf sağlar.

Yaklaşık olarak, ruble cinsinden PCR analizinin maliyeti:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis - 180'den
• klamidya trachomatis - 190'dan
• papilloma virüsü - 380'den 500'e
• kadınlarda ürogenital sistemin biyosenozu (mikrofloranın nicel ve nitel değerlendirmesi) - 800'den.

PCR çalışmasıyla ilgili daha faydalı bilgiler için aşağıdaki videoya bakın:

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), çeşitli enfeksiyonları teşhis etmek için son derece doğru olan modern bir araçtır. PCR analizi, genetik materyallerine (RNA veya DNA) dayalı olarak bulaşıcı hastalıklara neden olan ajanları belirlemenizi sağlar. Çalışma için biyolojik materyal kan, genital organlardan alınan bir sürüntü, tükürük vb.

ANALİZ VEYA ULTRASON SONUÇLARI İLE İLGİLİ DANIŞMA - 500 ruble.

PCR yöntemi 1983 yılında keşfedildi. Yaratıcısı Cary Mullis (ABD), bu keşif için Nobel Kimya Ödülü'nü aldı. Zaten ilk on yılda, teknik, bilim adamlarının ve doktorların tanınmasını sağlayarak tüm dünyada zorunlu bir laboratuvar araştırması haline geldi.

Diana Medical Center, polimeraz zincir reaksiyonu yöntemini kullanarak mümkün olan en kısa sürede ve en yüksek seviye kesinlik. Teşhis tabanımız hepsiyle eşleşir Uluslararası standartlar ve gereksinimler.

PCR ile hangi enfeksiyonlar teşhis edilebilir?

Teşhis için gönderin veya. ANCAKPCR analiziçok çeşitli enfeksiyonları teşhis etmeyi mümkün kılar. Bu grup ayrıca kuluçka döneminde olan gizli, asemptomatik hastalıkları da içerir:

Kullanarak PCR yöntemibulunabilir:

• hepatit C, B;
• genital organların üreaplazmozu;
• - ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellosis;
• genital organların ve solunum yollarının klamidyası;
• bakteriyel vajinoz;
• Enfeksiyöz mononükleoz;
• tüberküloz;
• salmonelloz;
• tüberküloz (pulmoner ve ekstrapulmoner formlar);
• listeriosis, kene kaynaklı ensefalit, Lyme hastalığı;
• , papilloma virüsü, ;
• hamilelik sırasında ve gebe kalmadan önce tespit edilen çocukluk çağı bulaşıcı hastalıkları - kabakulak, difteri, kızamık;
• HIV.

Başka bir yöntemle tespit edilen yukarıdaki hastalıkların her biri için bir PCR çalışması yapılması tavsiye edilir. Birçok enfeksiyona neden olan ajanların çeşitli türleri (suşları) vardır ve daha doğru teşhis, tedaviyi daha etkili hale getirir. Farklı patojen türlerinin kendi enfeksiyon bulaştırma yolları olduğundan, patojeni doğru bir şekilde belirlemek, diğerlerini başkalarına bulaştırmaktan korumaya yardımcı olur. Örneğin hepatit A bulaşabilir. genel konular ve bulaşıklar (kirli el hastalığı) ve hepatit C - sadece kan, tıbbi aletler ve cinsel temas yoluyla. Bu, hastaya yakın olanlar için önemlidir.

Polimeraz zincir reaksiyonu yönteminin özü

Yöntem, patojenin DNA veya RNA bölümleriyle tanımlanmasına dayanır. PCR, suç mahallinde bırakılan deri veya saç parçalarıyla bir suçlu bulunduğunda adli tıpı andırır. Çünkü her canlı organizmanın kendine özgü bir DNA veya RNA yapısı vardır. Yöntem, test materyalinde minimum miktarlarda mevcut olsa bile mikroorganizmayı doğru bir şekilde tanımlamanıza izin verir.

ORC, gizli taşıma, atipik, oblitere ve diğer bulaşıcı hastalık biçimlerini tespit etmek için uygundur. Teşhis oldukça doğrudur, bu nedenle pratikte hata ve yanlış sonuçlar vermez. Analiz genellikle belirli bir virüs veya mikrop türünü tanımlamak için ek bir muayene olarak verilir.

PCR yönteminin avantajları ve dezavantajları

PCR analizi, doktorun yalnızca hastanın vücudundaki enfeksiyöz ajanın türünü değil, aynı zamanda mikrop sayısını da doğru bir şekilde belirlemesini sağlayan etkili bir teşhis aracıdır. Bu özellik, PCR yönteminin viral hepatit gibi kronik enfeksiyonları etkili bir şekilde tespit etmesini sağlar.

Tekniğin avantajları aşağıdaki özelliklerdedir:

• çok yönlülük . Yöntem, incelenen materyalin türünden bağımsız olarak şu anda bilinen tüm mikroorganizmaların belirlenmesini mümkün kılar.
• özgüllük . PCR, başka bir teşhis yöntemi vermeyen bir virüs veya bakterinin DNA'sını %100 doğrulukla belirlemenizi sağlar.
• Duyarlılık - Kopya oluşumunun hızlı reaksiyonu sayesinde en küçük bir DNA veya RNA "parçası" bile tespit edilebilir ve tanımlanabilir.
• Yeterlik - Biyolojik materyalin örneklenmesinden sonraki birkaç saat içinde polimeraz zincir reaksiyonuna dayalı bir teşhis koymak mümkündür, bu da hastalığın zamanında tedavisine başlamayı mümkün kılar.
• Kantitatif analiz imkanı . Bu özellik, fırsatçı floranın (örneğin pamukçuk) neden olduğu hastalıkların belirlenmesinde önemlidir. Vücuttaki Candida mantarlarının artan içeriği hastalığa neden olur ve normal miktar 10 3 - 104 CFU/tampa kadardır. - Numara.

PCR teşhisinin dezavantajları, yüksek teknoloji ekipmanına ve yüksek nitelikli uzmanlara duyulan ihtiyaçtır. Analiz için, gerekli sıcaklığın korunduğu ve deneyin saflığının sağlandığı özel bir laminer kutuya ihtiyaç vardır.

Bir PCR testi nasıl doğru bir şekilde geçilir: hazırlık

Yaklaşan PCR analizine nasıl hazırlanacağını tam olarak anlamak için hasta, ne tür biyolojik materyal alınmasının planlandığını mutlaka doktoruyla kontrol etmelidir. Hazırlık doğrudan buna bağlıdır.

• Genital organlardan akıntı, serviks veya üretradan smear, idrar - bu materyal seçenekleri PCR ile incelenerek genital enfeksiyonlar etkili bir şekilde teşhis edilir.
• viral hepatit C, HIV enfeksiyonu PCR analizi için kan örneği gerektirir.
• Bir boğaz sürüntüsü, enfeksiyöz mononükleozun varlığını doğrulayabilir veya çürütebilir.

Kadınlarda Pap smear

Kadınlarda PCR ile genital enfeksiyonların teşhisi için, kural olarak, vajinal yayma. Hamilelik sırasında, PCR analizine hazırlanmak için standart kurallar geçerlidir.

• PCR'den birkaç gün önce, duştan, samimi hijyen ürünlerinden vazgeçmeniz gerekir.
• Enfeksiyon analizinden bir hafta önce, herhangi bir tür kullanmayı bırakmalısınız. ilaçlar Tabi ki doktor tarafından reçete edilen PCR analiz hazırlık programında yer almıyorlarsa.
• Muayeneden birkaç gün önce cinsel ilişkiden kaçınmaya başlamanız gerekir.
• PCR analizinin yapıldığı gün yıkama gerekli değildir, genital hijyen bir gece önceden yapılır, sadece ılık su kullanılır.
• Testten birkaç saat önce idrar yapamazsınız.

Erkeklerde Pap smear

PCR için üretradan smear almaya hazırlanmak zor değildir. Aşağıdaki kurallara uymanız yeterlidir.

• PCR muayenesinden 2 gün önce cinsel ilişkiden kaçınmaya başlamanız gerekir.
• İlaçlar, tabii ki doktor tarafından özel olarak reçete edilmedikçe, testten yaklaşık 7 gün önce durdurulur.
• Genital organların hijyeni bir gece önceden yapılmalı, PCR analizinin yapılacağı gün yapılmamalıdır.
• Testi yapmadan önce yaklaşık 2-3 saat idrara çıkmamanız önerilir.

Kan tahlili

PCR analizi sırasında hastanın kanı çalışmanın konusu haline gelirse, bunun için hazırlanma kuralları aşağıdaki gibidir.

• Kan bağışı için en uygun zaman sabahtır, analiz aç karnına yapılmalıdır (en az 8 saat yemeksiz). Su serbestçe içilebilir.
• PCR analizinden bir gün önce alkolün reddedilmesi, ondan bir saat önce sigaranın bırakılması.
• Sağlık böyle bir seçeneğe izin veriyorsa, ilaçlar bir süre reddetmeniz önerilir.
• Kan örneği almadan önce yaklaşık 20 dakika dinlenmek zorunludur.
• PCR çalışmasının arifesinde, duygusal ve fiziksel aşırı yükler tamamen hariç tutulur, analiz sonuçlarını etkileyebilirler.

PCR testi nasıl yapılır?

Araştırma için, patojenin bulunabileceği herhangi bir ortam alınır, ancak en yaygın olarak kullanılanlar:

• Kan serumu veya plazma - çeşitli patojenleri tespit etmek için - hepatit B, C, D, G virüsleri, herpes, HIV, sitomegalovirüs;
• İdrar ve prostat suyu - STD'lerin teşhisinde;
• Balgam, plevral sıvı, bronkoalveolar lavaj - tüberkülozun pulmoner ve ekstrapulmoner formlarının teşhisi için;
• Beyin omurilik sıvısı - sinir sistemi enfeksiyonlarının teşhisi için;
• amniyotik sıvı - intrauterin enfeksiyonları belirlemek için;
• boğaz sürüntü - bulaşıcı mononükleoz ve difteri patojenlerini belirlemek;
  STD'lerin teşhisi için mukoza zarlarından kazıma ve lekeler;
  mide mukozası ve mide suyu hücreleri - gastrit ve ülserlere neden olan Helicobacter bakterisini tanımlamak için.

Malzemenin bir kez alınmasıyla, vücuda aynı anda giren birkaç patojeni tespit edebilirsiniz. Bu çok yönlülük hastayı ek tetkiklerden ve gereksiz masraflardan kurtarır.

Yamaları tespit edin ve tanımlayın genetik bilgi Bilinen her patojen için oluşturulan özel referans DNA markörleri (primerler) yardımıyla mümkündür. Standart, milyonlarca diğerleri arasından "kendi" parçanızı bulmanızı sağlar. Bu olursa, polimeraz zincir reaksiyonu tetiklenir.

PCR reaksiyonu, tanımlanan gen bilgisi parçasının çok sayıda kopyasını oluşturur (replikasyon). Yalnızca analiz için gerekli olan DNA ve RNA bölümlerinin kopyalanması önemlidir. Bu nedenle, deneyin saflığı ve personelin ekipman ve numuneleri işleme yeteneği çok önemlidir.

Zincirleme reaksiyon çok hızlı ilerler, iki saat içinde DNA bölümü milyonlarca kez artar, bu da enfeksiyonu tespit etmeyi ve doğru bir şekilde tanımlamayı mümkün kılar. Standartlarla çalışmak için test tüpleri özel bir cihaza yerleştirilir. Programı kullanarak, ortamın sıcaklığını birkaç kez değiştiren ve reaksiyonun seyrini etkileyen bir algoritma ayarlanır. PCR sonucu, çalışmanın bitiminden hemen sonra görülebilir.

PCR analizi nasıl çözülür

Bir PCR çalışması yürütmek, yalnızca hastanın vücudunda bulunan enfeksiyon tipini belirlemeye değil, aynı zamanda nicel bir bakış açısıyla (mikrop sayısı) değerlendirmeye de izin verir. Kantitatif PCR analizinin sonuçlarının deşifre edilmesi, hepatit C gibi çok sayıda kronik hastalığın tedavisinin etkinliğinin saptanması ve doğrulanmasında önemli bir rol oynar.

PCR analizinin sonucu olumlu ve olumsuz cevaplar olabilir.

• olumsuz sonuç . PCR analizi sırasında inceleme konusu olan biyolojik materyalde enfeksiyon izine rastlanmadı. Kural olarak, olumsuz bir sonuca dayanarak, vücutta gerçekten enfeksiyon olmadığı varsayılabilir.
• Olumlu sonuç. PCR analizinin bu sonucu, hastanın biyolojik materyalinde bulaşıcı bir hastalığın izlerinin bulunduğunu gösterir. Pozitif bir PCR test sonucu, yüksek derecede doğruluk ile karakterize edilir.

Bazen enfeksiyon, tam sağlığın arka planına ve hastalık belirtilerinin yokluğuna karşı tespit edilir. Bazı hastalar analizin yanlış yapıldığına inanıyor, ancak gerçek durum farklı. PCR vücutta bir patojen olduğunu gösterdiyse, o zaman gerçekten oradadır. Sadece bulaşıcı hastalıklar, enfeksiyondan hemen sonra başlamaz, farklı uzunluklarda kuluçka süreleri vardır.

Gizli dönem, örneğin AIDS ile çok uzun sürebilir - bazı mekanizmalar virüsleri çoğalmaya zorlayana kadar birkaç yıl. Etken ajan, taşıyıcıların ve iyileşmeyenlerin vücudunda belirlenir. Çoğu zaman, çeşitli cinsel yolla bulaşan hastalıklar gizli (gizli) bir forma girer. Bu durumda, ek laboratuvar teşhisi gerekebilir.

PCR analiz sonuçlarının yorumlanmasının doğruluğu

Yeterince fazla sayıda enfeksiyonun tespit edilmesini sağlayan PCR yöntemi, artan doğruluk, duyarlılık ve özgüllük ile karakterize edilir. Bu özellikler, PCR çalışmasını kullanarak şunları yapabileceğinizi gösterir:

• Enfeksiyöz bir ajanın yokluğunu veya varlığını mümkün olduğunca doğru bir şekilde belirlemek.
• Enfeksiyöz ajanın spesifik tipini mümkün olduğunca doğru bir şekilde belirleyin (özgüllük).
• Gizli olsa bile enfeksiyonu tespit edin. Hastanın incelenen biyolojik materyalinde (hassasiyet) düşük seviyede mikrobiyal DNA varlığından bahsediyoruz.

PCR yönteminin, enzim immünoassay ve enfeksiyonu tespit etmek için diğer immünolojik araçlara göre avantajı, hatalı sonuçlar verme olasılığının daha düşük olmasıdır. Yani, PCR analizinin kodunun çözülmesi, hastanın vücudundaysa, bulaşıcı mikropların bulunmadığını çok daha az gösterir.

Ek olarak, analizin kodunun çözülmesinin vücutta var olmayan bir enfeksiyonun varlığını ortaya koyması, yani yanlış pozitif sonuçlar vermesi neredeyse hiç olmaz.Tabii ki, PCR sonuçları kesinlikle doğru olarak adlandırılamaz, bu yüzden gereklidir. Bu çalışmayı diğer yöntemlerle desteklemek.

Polimeraz zincir reaksiyonu 30 yıldır bilinmektedir. Arkeolojiden genetiğe kadar birçok alanda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Babalık kurmaya yardımcı olan PCR yöntemidir, ancak en sık insan vücudundaki çeşitli bulaşıcı hastalıkları tespit etmek için kullanılır.

PCR analizi nasıl yapılır ve nedir? Bu soruları ayrıntılı olarak cevaplamaya çalışacağız.

PCR analizi - nedir bu?

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), insanlarda çeşitli bulaşıcı ve kalıtsal hastalıkları hem akut hem de kronik evrelerde ve hastalık kendini göstermeden çok önce tespit etmeyi mümkün kılan oldukça hassas bir moleküler genetik teşhis yöntemidir.

PCR yöntemi kesinlikle spesifiktir ve doğru yapıldığında yanlış pozitif sonuç veremez. Yani, enfeksiyon yoksa, analiz asla olduğunu göstermeyecektir. Bu nedenle, şimdi çok sık olarak, tanıyı doğrulamak için patojeni ve doğasını belirlemek için ek bir PCR analizi yapılır.

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) 1983 yılında Cary Mullis (ABD) tarafından geliştirildi ve 1993 yılında ödüllendirildi. Nobel Ödülü kimya alanında.

Bu yöntemin avantajı nedir?

Bu yöntemle teşhis, patojeni doğrudan incelenen materyallerde bulunan gende bulmanızı sağlar. Bu, cinsel enfeksiyonlar, gizli enfeksiyonlar, cinsel yolla bulaşan çeşitli hastalıklar için en doğru analizdir.

PCR teşhisi ve diğer laboratuvar araştırma yöntemleri arasındaki farklar aşağıdaki gibidir:

• yöntem, patojenin kendisini tanımlamayı amaçlar;
• PCR ile teşhis çok yönlüdür: birkaç patojeni tespit etmek;
• hastalıklar, hastanın sadece bir biyolojik örneği yeterlidir;
• yöntem oldukça hassastır ve diğer çapraz reaksiyonlar eşlik etmez.

Ek olarak, PCR teşhisinin avantajı, hastanın herhangi bir biyolojik materyalinin analiz için uygun olmasıdır: kan, genital organlardan salgılar, idrar, meni.

PCR smear ile hangi enfeksiyonlar tespit edilebilir?

Uzun süre kendini göstermeyen “gizli” olanlar da dahil olmak üzere vücutta çok sayıda bulaşıcı ajan bulunabilir.

PCR yayma analizi bu tür enfeksiyonları tespit etmeyi mümkün kılar:

• genital organların ureplazmozu;
• kandidiyaz ();
• uçuk;
• kanser hücrelerinin varlığı;
• hormonal durumu değerlendirmek;

PCR için çalışılan materyal genellikle balgam, tükürük, idrar, kandır. Analizi gerçekleştirmeden önce, bir doktorla ön konsültasyon alarak buna dikkatlice hazırlanmak gerekir.

PCR için kan genellikle aç karnına bağışlanır. güzel sonuçlar araştırma için materyalin servikal kanaldan veya üretradan alındığında analizi gösterir. Bu durumda, PCR teşhisini cinsel ilişkiden en geç bir gün sonra yapmak en iyisidir.

PCR çeşitleri

PCR birçok alanda analiz ve bilimsel deneylerde kullanılmaktadır. Farklı analiz yöntemleri vardır:

1. ters transkripsiyon PCR(Ters Transkripsiyon PCR, RT-PCR (İngilizce)) - bir RNA kitaplığından bilinen bir diziyi amplifiye etmek, izole etmek veya tanımlamak için kullanılır.
2. ters PCR(Ters PCR (İngilizce)) - istenen dizilimdeki yalnızca küçük bir alan biliniyorsa kullanılır. Bu yöntem, DNA genoma eklendikten sonra komşu dizilerin belirlenmesi gerektiğinde özellikle yararlıdır.
3. Nested PCR, bir reaksiyonun yan ürünlerinin sayısını azaltmak için kullanılır. İki çift primer kullanın ve iki ardışık reaksiyon gerçekleştirin.
4. asimetrik PCR(İngilizce Asimetrik PCR) - esas olarak orijinal DNA zincirlerinden birinin amplifiye edilmesi gerektiğinde gerçekleştirilir. Bazı dizileme ve hibridizasyon analiz tekniklerinde kullanılır.
5. kantitatif PCR(Kantitatif PCR, Q-PCR (İngilizce)) veya gerçek zamanlı PCR - her reaksiyon döngüsünde belirli bir PCR ürününün miktarının ölçümünü doğrudan gözlemlemek için kullanılır.
6. Kademeli PCR (Touchdown PCR (İngilizce)) - bu yaklaşımı kullanarak, primerlerin spesifik olmayan bağlanmasının etkisi azaltılır.
7. Gruba özel PCR(İngilizce gruba özgü PCR) - Bir veya iki arasındaki ilgili sekanslar için PCR farklı şekiller bu diziler için koruyucu primerler kullanarak.

Şablonun nükleotid dizisi kısmen biliniyorsa veya hiç bilinmiyorsa, dizisi herhangi bir bazın yerleştirilebileceği dejenere pozisyonları içeren dejenere primerler kullanılabilir. Örneğin, primer dizisi şöyle olabilir: …ATH… burada H, A, T veya C'dir.

Hangi biyolojik materyaller inceleniyor?

Çeşitli biyolojik ortamlar ve insan sıvıları, bir bakterinin yabancı DNA'sının veya bir virüsün DNA'sının veya RNA'sının tespit edilebildiği PCR araştırması için bir materyal olarak hizmet edebilir:

1. İdrar. Erkeklerde genitoüriner sistemin enfeksiyöz lezyonları ve kadınlarda idrar organları için kullanılabilir (erkeklerde, idrarın materyal olarak kullanılması epitel kazıma yerine geçer).
2. Balgam. Tüberküloz teşhisi için ve daha az sıklıkla klamidya ve mikoplazmozun solunum formlarının teşhisi için kullanılır. 15-20 ml miktarındaki balgam, steril (tek kullanımlık) bir şişede toplanır.
3. biyolojik sıvılar. Prostat suyu, plevral, beyin omurilik, amniyotik sıvı, eklem sıvısı, bronkoalveolar lavaj, tükürük endikasyonlara göre alınır.
4. Mukoza zarlarından epitel kazımaları. Genellikle gonore, klamidya, mikoplazmoz, üreaplazmoz, trikomoniyaz, gardnerelloz, herpetik ve mukoza zarlarını etkileyen diğer enfeksiyonlar gibi cinsel yolla bulaşan hastalıkları (STD'ler) teşhis etmek için kullanılır.
5. Biyopsiler. Çoğu zaman, mide ve duodenumun biyopsi örnekleri Helicobacter pylori enfeksiyonunu saptamak için kullanılır.
6. Kan, plazma, serum. Hepatit B, C, D, G virüsleri, herpes, CMV, HIV, insan genlerinin PCR analizi için kullanılır.

Analize nasıl hazırlanılır?

PCR sonucunun güvenilirliği, doğrudan inceleme için materyalin tesliminin doğruluğuna bağlıdır. Materyal kontamine olmamalıdır, aksi takdirde çalışmanın sonucu objektif olmayacaktır. PCR testi yapmadan önce en önemli öneriler aşağıdaki gereksinimleri içerir:

1. Sabahları steril bir kapta idrar verilir.
2. Sabahları aç karnına enfeksiyonlar için kan testi yapılmalıdır.
3. Testten bir gün önce cinsel olarak aktif olmamalısınız.

Analiz sonucu, söz konusu işlemden 1.5-2 gün sonra hazır olacaktır. Sonucun aynı gün hazırlanabileceği durumlar vardır.

PRP analizinin deşifre edilmesi

Sunulan çalışmayı yorumlama süreci basitliği ile dikkat çekmektedir. PCR analiz sonuçları materyalin tesliminden 1.5-2 gün sonra alınabilir. Bazı durumlarda, sonuç ilk gün hazırdır ve şu anlama gelebilirler:

• olumsuz sonuç teşhis edilen materyalin istenen enfeksiyöz ajanı içermediğini gösterir.
• PCR pozitif patojenin DNA veya RNA'sının insan vücudunda bulunduğunu gösterir.

Bazı durumlarda, mikroorganizmaların kantitatif tayini yapılır. Bu özellikle fırsatçı patojenlerin neden olduğu hastalıklar için geçerlidir. Çünkü bu bakteriler olumsuz etkilerini ancak fazla olduklarında gösterirler.

Ayrıca, kantitatif PCR analizi, terapötik taktiklerin seçimi ve HIV ve hepatit virüsleri gibi viral enfeksiyonların tedavisinin izlenmesi amacıyla önemlidir.

Enfeksiyonları teşhis etmede PCR ne kadar doğrudur?

PCR yöntemi, yüksek doğruluk, özgüllük ve hassasiyet ile karakterizedir. Bu, bu analizin şunları yapabileceği anlamına gelir:

• enfeksiyonun varlığını veya yokluğunu doğru bir şekilde belirlemek;
• tam olarak ne tür bir enfeksiyon olduğunu belirtin (özgüllük);
• biyolojik materyalde çok düşük bir mikrobiyal DNA içeriğinde bile enfeksiyonu tespit eder,
• hangi test edilmiştir (hassasiyet).

PCR analizi: fiyat ve şartlar

Belirli bir analizin fiyatı, hangi enfeksiyon için test edileceğinize bağlı olacaktır. Yaklaşık fiyatlar ve şartlar:

1. STI: 300-500 ruble, terimler - 1 gün;
2. Epstein-Barr virüsü, insan papilloma virüsü, herpes, sitomegalovirüs: 300-500 ruble, terimler - 1 gün;
3. Hepatit A, B, C, D, G: kalitatif analiz 650 ruble, kantitatif analiz 2000 ruble. Şartlar - 5 güne kadar;
4. Hepatit C virüsüne karşı antikorlar, toplam (Anti-HCV) - 420 ruble;
5. Hepatit C virüsüne karşı antikorlar, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 ruble;
6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 ruble, terimler - 1 gün;
7. HIV (antikorlar ve antijenler) - 380 ruble;
8. HIV RNA, niteliksel olarak - 3.500 ruble;
9. HIV RNA, niceliksel olarak - 11.000 ruble.

Paradan tasarruf etmek için sabit bir analiz paketi seçebilirsiniz. Bu hizmet, PRC yöntemini kullanarak (in vitro, onklinik vb.) analiz yapabileceğiniz çoğu klinik tarafından verilmektedir.

PCR (polimeraz zincir reaksiyonu), 20. yüzyılın sonlarında ve 21. yüzyılın başlarında klinik laboratuvar teşhislerinin ana yöntemlerinden biri olan ve tıp biliminin çeşitli alanlarında büyük faydalar sağlayan moleküler biyolojinin bir başarısıdır.

Bu nedenle, insan vücudunun milyonlarca hücresi arasında kaybolan canlı virüsün kendisi değil, yalnızca DNA'sının bir parçacığı olsa bile, o zaman PCR, eğer hiçbir şey ona müdahale etmezse, muhtemelen görevle başa çıkacak ve rapor edecektir. olumlu bir sonuçla “yabancının” kalması. Bu, PCR'nin özü ve ana avantajıdır.

Avantajlar ve dezavantajlar

PCR teşhisini gerçekleştiren laboratuvar, ekipman, test sistemleri ve tıbbi personelin nitelikleri açısından en yüksek gerekliliklere tabidir. Bu, son derece hassas ve son derece spesifik reaktiflerden oluşan bir cephaneliğe sahip yüksek teknolojili bir laboratuvardır, bu nedenle belirli bir dezavantajı yoktur. Yokluğunda olumlu bir sonuç vermediği sürece klinik bulgular ve böylece klinisyeni bir ikilemle karşı karşıya bırakır: Tedaviye başlamaya değer mi, değmez mi?

Hastayı gözlemleyen doktor, herhangi bir hastalık belirtisi görmediği için test sonuçlarının güvenilirliğinden şüphe etmeye başlar. Ancak yine de PCR sisteminin yüksek duyarlılığı göz önüne alındığında, klinik öncesi aşamada bile patojeni tespit ettiği ve bu durumda olumlu bir sonucun dezavantajdan çok avantaj olduğu unutulmamalıdır. Buna dayanarak, ilgili hekim, lehte ve aleyhte diğer argümanları dikkate alarak tedavinin uygunluğuna kendisi karar vermelidir.

Polimeraz zincir reaksiyonunu kullanarak teşhisin avantajları açıktır:

• Yüksek özgüllük belirli bir organizmada bulunan, ancak insanlara yabancı olan seçilmiş nükleik asit parçacıkları örneğindeki mevcudiyet nedeniyle %100'e ulaşan;
• Yüksek performans sonuçta PCR, malzeme örnekleme gününde test yapma fırsatı sağlayan ve böylece hastayı gereksiz endişelerden kurtaran yüksek teknolojili otomatik bir tekniktir;
• Tek bir örnek üzerinde çalışan PCR, birçok çalışma yürütebilmekte ve birden fazla patojeni tespit etmek eğer böyle bir görevi varsa. Örneğin, PCR'nin ana yöntemlerden biri olduğu bir klamidyal enfeksiyonu teşhis ederken, klamidya ile birlikte Neisseria (gonokok) da tespit edilebilir - patojen. Üstelik bu, sonuçların güvenilirliğini olumsuz etkilemez;
• PCR testi kuluçka döneminde tehlikeli mikroorganizmaları gösterir vücuda somut bir zarar vermek için henüz zamanları olmadığında, yani, erken teşhis patolojik sürecin yaklaşmakta olan gelişimi konusunda uyarır, bu da ona hazırlanmayı ve onu tamamen silahlandırmayı mümkün kılar.

Ayrıca, teşhis sırasında bazen ortaya çıkan yanlış anlamaları önlemek için PCR, gerektiğinde uzman amaçlı kullanmak için sonuçlarının kaydedilebilmesi (fotoğraf, bilgisayar) ile kendini korur.

PCR yanıtlarındaki norm, olumsuz bir sonuç olarak kabul edilir., yabancı nükleik asit parçalarının bulunmadığını gösteren pozitif bir yanıt, vücutta bir enfeksiyonun varlığını gösterir, dijital değerler, virüsün durumunu ve test sırasındaki konsantrasyonunu gösterir. Bununla birlikte, analizin eksiksiz bir kopyası, "PCR" konusunda özel eğitim almış bir doktor tarafından gerçekleştirilir. Sonuçları kendiniz yorumlamaya çalışmak bir anlam ifade etmez, çünkü olması muhtemeldir, yanlış anlamanız ve önceden endişelenmeye başlamanız mümkündür.

PCR “korkuyor” nedir, ne yapabilir ve buna nasıl hazırlanmalı?

Diğer herhangi bir çalışmada olduğu gibi, bazen test sonuçları yanlış pozitif veya yanlış negatiftir burada PCR bir istisna değildir. Bu, aşağıdaki durumlarda olabilir:

1. Reaksiyonun aşamalarından birinde teknolojik sürecin ihlali;
2. Malzemenin toplanması, depolanması veya nakliyesi ile ilgili kurallara uyulmaması;
3. Malzemede yabancı safsızlıkların varlığı.

Bu, PCR - enfeksiyonların teşhisine dikkatli, dikkatli ve doğru bir şekilde yaklaşılması gerektiğini, aksi takdirde malzeme numunelerinin yapısal yapılarını değiştirebileceğini ve hatta çökebileceğini düşündürmektedir.

PCR teşhisinin aşamaları. Yanlış sonuçlar çalışmanın herhangi bir aşamasında ihlal verebilir

Enfeksiyonların PCR teşhisi, diğer laboratuvar yöntemleri arasında "altın standartlar" kategorisine aittir, bu nedenle ilk bakışta birbiriyle hiçbir ortak yanı olmayan birçok hastalığın patojenlerini aramak için kullanılabilir:

• Çeşitli lokalizasyonların tüberkülozu, pnömoni (klamidyanın neden olduğu atipik dahil);
• Çocukluk çağı enfeksiyonları (kızamık, kızamıkçık, parotit, kızamık);
• Difteri;
• salmonelloz;
• Zoonotik bulaşıcı hastalık - listeriosis (hastalık, lenf düğümlerine, merkezi sinir sistemine, iç organlara zarar veren çeşitli semptomlarla karakterizedir);
• Epstein-Barr virüsünün penetrasyonundan kaynaklanan hastalıklar (bulaşıcı mononükleoz, vb.);
• Papilloma virüsü enfeksiyonunun neden olduğu onkolojik patoloji (HPV ve türleri);
• Borreliosis (Lyme hastalığı, kene kaynaklı ensefalit);
• Etken maddesi insan midesinde yaşayan bakteri Helicobacter pylori olan Helicobacter pylori enfeksiyonu. Helicobacter'in mide veya oniki parmak bağırsağı kanseri gelişimine neden olduğu kanıtlanmıştır;
• ve pratik olarak her şey.

Cinsel yolla bulaşan enfeksiyonların PCR teşhisi özellikle önemlidir, çünkü bu şekilde neden olan hastalıklar genellikle uzun bir süre herhangi bir klinik belirti olmadan ilerler, ancak hamilelik sırasında daha aktif hale gelmeye başlar ve böylece çocuğun sağlığını ve hatta yaşamını tehdit eder. . Ve aynı şekilde davranın. Bazıları ("meşale") aynı anda CYBE'lerle ilgilidir, bu nedenle ikincisi daha ayrıntılı değerlendirme gerektirir. Okuyucu, makalenin ilerleyen bölümlerinde en popüler yöntemlerle tanışabilecektir.

Güvenilir bir sonuç elde etmek için nasıl düzgün hazırlanır?

PCR hazırlığının oldukça basit olduğunu ve hastanın özel çaba göstermesini gerektirmediğini hemen not ediyoruz. Sadece üç basit görevi tamamlamanız gerekiyor:

1. Testi yaptırmadan 24 saat önce cinsel ilişkiye girmeyin;
2. Bir damardan kan almak ve analiz etmek için aç karnına gelmeniz gerekir, bu arada içemezsiniz;
3. İdrar geceleri (sabahları - eczaneden bir gün önce satın alınan steril bir kavanozda) geçirilmelidir.

PCR herhangi bir biyolojik ortamda çalışabilir

PCR yöntemi "kana susamış" değildir, bu nedenle şüpheli bir bulaşıcı ajan içeren herhangi bir biyolojik ortamı kabul eder. seçim - araştırma için almanız gerekenler doktora kalır.

Böylece, bir patojen arayışında, bir kan testine ek olarak (uygun olmasına ve çoğu durumda diğer materyallerle paralel olarak alınmasına rağmen), şunları kullanabilirsiniz:

• (ürogenital sistemin deşarjı);
• Mukus kazıma ağız boşluğu, konjonktiva, nazofarenks, genital sistem (kadınlarda serviks ve vajinadan, erkeklerde - üretradan alınırlar);
• tükürük;
• meni;
• prostat suyu;
• Plasental dokular ve amniyotik sıvı (amniyotik sıvı);
• Örneğin, belirli CYBE'leri ve Mycobacterium tuberculosis'i saptamak için idrar tortusu (santrifüjden sonra);
• Aynı amaçla balgam ve plevral sıvı;
• eksüdalar;
• Merkezi sinir sisteminin şüpheli bulaşıcı lezyonu durumunda beyin omurilik sıvısı;
• Karaciğer, on iki parmak bağırsağı, mide vs.'den alınan biyopsi materyali (biyopsi).

Yukarıdakilere eklemek isterim ki, her durumda, sıyrıklarda ve salgılarda bile, test için yeterli malzeme olacaktır, çünkü PCR testi büyük hacimler gerektirmediğinden, genellikle analiz için birkaç mikrolitre yeterlidir. Eppendorf tipi mikrotüp ve çalışmaya gönderildi.

PCR hastalıkları ve kullanımı

HIV ve polimeraz zincir reaksiyonu

Genellikle anonim bir anketi geçerken pozitif sonuçlar immünoblotlama, tanı tekrarlanır. Tanı doğrulanırsa, hastaya ek çalışmalar verilir:

1. İmmünolojik reaksiyonları kullanarak, enfeksiyonun ilk etapta bulaştığı CD 4 lenfositlerin (bağışıklık sistemi yeterli hücreler - T yardımcıları veya yardımcıları) sayısının mutlak değerlerinin belirlenmesi, ardından temel özelliklerini kaybeder ve ayırt edemezler " kendi" ve bir başkasının. Vücudun normal hücreleri için kan plazmasında dolaşan virüsün RNA'sını alırlar ve onlara tepki vermezler;
2. Viral RNA'nın PCR ile tespiti ve bu verilere dayanarak patolojik sürecin evresini, ciddiyetini ve prognozu belirlemek için viral partiküllerin konsantrasyonunun hesaplanması. Tabii ki, bu konuda "norm" kelimesi yoktur, çünkü tepki her zaman olumludur ve dijital değerlerin kodunun çözülmesi doktorun yetkisi dahilindedir.

PCR ve hepatit

PCR yöntemi patojenleri tespit edebilir, çoğu zaman test, diğer yöntemlerle zayıf bir şekilde tespit edilen hepatit C'yi teşhis etmek için kullanılır.

Hepatit C virüsü (RNA içeren) insan vücudundaki davranışında HIV'e benzer. Karaciğer hücrelerinin (hepatositler) genomuna sıkışarak orada beklemeye devam ediyor, en az 2 yıl sonra, en az 20 yıl sonra gelebilen kanatlarda bekliyor, bu yüzden doktorlar ona "nazik katil" dedi. Hepatit C, karaciğer parankiminde daha sonraki aşamalarda kendini gösteren malign bir sürecin oluşumuna yol açar. Bağışıklık sistemi tüm bu olayları fark etmez ve virüsü hepatosit sanır. Doğru, virüse karşı antikorlar bazı miktarlarda üretilir, ancak yeterli bir bağışıklık tepkisi sağlamazlar. Hepatit C teşhisi için ELISA, virüsün iz bıraktığını gösterdiği ve kendini bırakıp bırakmadığı bilinmediği için çok bilgilendirici değildir. HCV ile, kendi kendine iyileşme vakaları bilinirken, virüse karşı antikorlar kalır ve ömür boyu dolaşıma devam eder (immünolojik hafıza). PCR, antikor oluşumunun belirgin bir şekilde önündedir ve bir viral partikülü 1-1,5 hafta gibi kısa bir sürede tespit edebilir, antikorlar ise 2 ay ile altı ay arasında ortaya çıkabilir.

İnsan vücudunda yaygın hepatit C virüsü şüphesi durumunda PCR teşhisi en uygun araştırma yöntemidir, çünkü yalnızca hastanın kanında veya karaciğer biyopsisinde "yumuşak bir düşman" varlığını tanıyabilir.

Bununla birlikte, bazen AT'nin pozitif olduğu ve PCR sonucunun negatif olduğu durumlar vardır. Bu bazen virüs miktarı çok düşük olduğunda veya kan dolaşımına girmeden karaciğerde uykuda olduğunda olur. Gerçeği hala bulmak için hasta yeniden analiz edilir, hatta birden fazla.

Papilloma virüsü enfeksiyonu

Kendi kendine iyileşme olmazsa, PCR yapılmadığı ve hastalık belirtisi olmadığı için konakçının vücudunda uzun süre kendini göstermeden de kalabilir, bundan şüphelenmez bile. Bununla birlikte, latent de olsa papillomavirüs enfeksiyonunun varlığı, belirli virüs türlerinin neden olduğu insan sağlığına kayıtsız olmaktan uzaktır. onkolojik hastalıklar(tip 16, 18).

Daha sık olarak, nüfusun kadın yarısı HPV'den muzdariptir, çünkü virüs kadın genital bölgesini ve özellikle bazı virüs türlerinin displastik süreçlerin gelişimine katkıda bulunduğu serviksi ve daha sonra displazi değilse serviks kanserini sever. tedavi edilir ve virüs salınır. Böylece, polimeraz zincir reaksiyonu viral DNA'yı tespit edecek ve ardından kadının vücuduna yerleşmiş “kötü” veya “iyi” (onkojenik veya onkojenik olmayan) tipi gösterecektir.

Diğer CYBE ve TORCH enfeksiyonları

Açıkçası, polimeraz zincir reaksiyonu nükleik asitlerden oluşan herhangi bir yabancı yapıyı bulabilir, bu nedenle bu test tüm STD'leri ve TORCH enfeksiyonlarını tespit etmek için uygundur, ancak her zaman kullanılmaz. Diyelim ki, daha uygun fiyatlı ve daha ucuz olanlar varsa, neden tespit etmek veya gonokok yapmak için bu kadar pahalı araştırmalar yapıyoruz?

TORCH enfeksiyonları ve CYBE'ler birbiriyle o kadar ilişkilidir ki, belirli bir patojenin hangi gruba atanması gerektiğini belirlemek bazen zordur. Genel olarak, bunları anlamak zor olabilir, çünkü bunlar her zaman cinsel yolla bulaşabilen veya sadece belirli koşullar altında (bağışıklık yetmezliği) oldukça çeşitli mikroorganizma gruplarıdır ve olası olumsuz etkileri nedeniyle sadece hamilelik sırasında ilgi çekebilir. seyri ve fetüs üzerinde.

Gizli enfeksiyonları tespit etmek için ana yöntem PCR'dir.

Klinik bulguların gelişimi, sadece ana görevi olan PCR ile bazen ELISA ile birlikte, bazen de bazen ELISA ile bulunabilen çeşitli patojenlere dayanmaktadır. tek doğrulayıcı test olarak, özellikle hastalık belirtileri yoksa. Böyle zor bir durum, bariz patojenlere ek olarak fırsatçı patojenleri de içeren bir polimikrobiyal enfeksiyon tarafından yaratılabilir.

Üreplazma sıklıkla mikoplazma ile birlikte görülür. Ve bu bir tesadüf değil. Klamidya gibi bu türler ne virüs ne de bakteridir, hücrelerin içinde yaşarlar ve CYBE'lere aittirler, ancak sağlıklı bir vücutta bulunmaları da nadir değildir. Bu nedenle, sağlıklı bir taşıyıcıyı hasta bir kişiden ayırt etmek için, PCR'nin en güvenilir olduğu düşünülen özel yöntemlere ihtiyaç vardır, çünkü bu mikroorganizmaların yapısının ve davranışının özellikleri nedeniyle diğer çalışmalar etkisizdir.

(Tip 1, 2) ve aynı zamanda herpes virüslerine (tip 5) ait olana gelince, buradaki durum da belirsizdir. Dünya nüfusunun enfeksiyon oranı% 100'e yaklaşıyor, bu nedenle, bu durumda, virüsün tanımlanması ve dozu çok önemlidir, bu özellikle hamilelik sırasında önemlidir, çünkü bir yetişkin için, virüsü kök salmıştır. vücut çoğu zaman sorun çıkarmaz ve hastalık belirtisi vermez.

Bu nedenle, bir doktor tarafından verilen böyle bir muayene göz ardı edilmemelidir, çünkü bazı durumlarda polimeraz zincir reaksiyonu, sadece bir kadını değil, aynı zamanda küçük, doğmamış bir erkeği ciddi komplikasyonlardan koruyabilen zorunlu ve gerekli bir laboratuvar teşhis yöntemidir.

Sonuç olarak PCR gibi harika bir yöntemin 30 yılı aşkın süredir insanlığa hizmet ettiğini belirtmek isterim. Aynı zamanda, testin görevleri bulaşıcı hastalıkların patojenlerini aramakla sınırlı değildir. Moleküler biyolojinin topraklarında doğan polimeraz zincir reaksiyonu, genetik ile ayrılmaz bir şekilde bağlantılıdır. adli tıpta kişisel tanımlama için başarıyla kullanıldı, adli tıpta babalık kurmak için, veteriner hekimlikte, hayvan kliniğinin pahalı ekipman satın alma kabiliyeti varsa ve diğer alanlarda (sanayi, Tarım vb.).

Video: PCR - öz ve uygulama