Kakvi su embriji prikladni za transplantaciju. Preporuke za prijenos embrija

Kada se primijeni tradicionalne metode uzgoja i selekcije životinja, visoki genetski potencijal ne može se u potpunosti iskoristiti, potreban je temeljno novi sustav uzgojnog rada koji bi omogućio naglo ubrzanje procesa genetskog poboljšanja životinjske populacije. Treba se temeljiti na biotehnološkim metodama upravljanja reprodukcijom. Ubrzana kontrolirana reprodukcija životinja omogućuje maksimalno korištenje rezervnih reprodukcijskih i proizvodnih mogućnosti koje se ne ostvaruju prirodnim osjemenjivanjem.

Uvođenjem biotehničke tehnike u praksu stočarstva - metode umjetnog osjemenjivanja - uzgajivači su stekli mogućnost usmjerenog reguliranja sudjelovanja vrijednih proizvođača u reprodukcijskom procesu, intenzivno ih koriste za brzo kvalitativno poboljšanje stada na velika ljestvica. Međutim, sudjelovanje ženki u procesu reprodukcije ostaje beznačajno. Dakle, za produktivni život krave, ma koliko ona bila visokoproduktivna, od nje se na uobičajeni način ne može dobiti više od 10 teladi. Ovaj se pokazatelj povećava transplantacijom (transplantacijom) embrija, što vam omogućuje da u potpunosti iskoristite energetski, proizvodni i nasljedni potencijal krava rekordera.

Bit ove metode je u dosljednoj primjeni kliničkih, biotehničkih i laboratorijskih tehnika za izazivanje superovulacije (umjetno povećanje broja ovulacija kod vrijednih darivateljica, nakon čega slijedi njihova inseminacija spermom muških poboljšivača, ekstrakcija (ispiranje) embriji u ranom stadiju razvoja i njihov prijenos (transplantacija). ) u genitalni trakt vrijednih ženskih primatelja kako bi se dobilo transplantirano potomstvo koje kombinira visoke uzgojne i proizvodne kvalitete muškog proizvođača i ženskog darivatelja). Embriotransfer ne zamjenjuje, već samo nadopunjuje metodu umjetne oplodnje.

Prvu transplantaciju embrija proveo je 1890. engleski znanstvenik W. Heap, koji je transplantirao nekoliko zigota izvađenih iz tijela zečeva u ženke druge pasmine i dobio punopravno potomstvo. Nakon toga, ruski liječnik M. Ona-nov (1891.), kazanski ginekolog V.S. Gruzdev (1897), Pincus (1936) Godine 1931. Warwick i Berry izveli su transplantaciju embrija kod ovaca i koza. Osamdesetih godina prošlog stoljeća Nadaleko su bili poznati senzacionalni pokusi talijanskog liječnika Petruccija koji je uspio postići oplodnju ženskog jajašca izvan tijela i pratiti razvoj ljudskog embrija smještenog u umjetnu kolijevku do starosti od dva mjeseca.

U našoj zemlji nastavljeni su pokusi transplantacije embrija. Jedan od prvih pokusa transplantacije zigota kod ovaca izveo je sovjetski biolog A.I. Lopyrin (1949-1952). Pedesetih godina prošlog stoljeća A. V. Kvasnitsky uspješno je proveo pokuse transplantacije zigota u svinja. Moramo žaliti što su istraživanja koja su proveli ovi znanstvenici, ispred stranih znanstvenoj razini tih godina, naknadno su suspendirani kao neperspektivni.

Prve pokuse transplantacije zigote kod ovaca metodom superovulacije izveli su 1955. engleski znanstvenici G.L. Edward i L.E. Rawson. Godine 1961. Rawson je izvršio prijenos ovčjih zigota avionom na udaljenosti od 6 tisuća milja, koristeći "žive inkubatore" - jajne kanale zeca.

Godine 1931. Hartman je prvi put izvadio održive embrije iz jajovoda zaklane krave; 1951. E.L. Willet i dr. dobili su prvo, a 1953. dva telad nakon pet transplantacija zigota u stadiju 8-12 blastomera. Daljnji napori ovih istraživača bili su usmjereni na razvoj metoda za višestruku ovulaciju (poliovulaciju), povećanje prinosa punopravnih embrija, razvoj metoda za uzgoj embrija izvan tijela i oplodnju jajnih stanica.

akumulirano do ranih 1970-ih. iskustvo je pokazalo da se prijenos embrija može prenijeti iz laboratorija u stočarsku praksu. Važno je napomenuti da je metoda transplantacije embrija dobila praktično značenje nakon što je spojena s tehnikom indukcije višestruke ovulacije. 1970-ih obilježen je početkom praktične primjene ove metode u nizu zemalja (Velika Britanija, SAD, Kanada, Njemačka, Austrija, Novi Zeland, Čehoslovačka, Mađarska), u kojima su se pojavile tvrtke koje su se bavile dobivanjem transplantirane teladi iz visokokvalitetnih produktivne krave.

Značajan napredak u tehnologiji transplantacije embrija (zigota) postignut je u Francuskoj, gdje je ova metoda prvi put korištena 1983. godine. Obavljeno je 3,3 tisuće embriotransplantacija, većinom u uvjetima stočarskih farmi, a istovremeno više od 1 tisuće pohranjeni u smrznutom stanju.. embriji.

Transplantacija embrija dosegla je najveći praktični opseg u SAD-u i Kanadi, gdje je broj embriotransfera premašio 100 000 godišnje. Već 1988. godine u centrima za umjetno osjemenjivanje goveda u tim je zemljama bilo više od 1000 transplantiranih bikova.

Poljoprivrednici u kapitalističkim zemljama cijenili su metodu presađivanja zametaka i, unatoč visokim troškovima prijenosa zametaka (do 2000 američkih dolara), rado ih uključuju u svoje programe uzgoja. Postoji izvješće da je na jednoj od američkih aukcija holštajn-frizijski transplantirani vol procijenjen na 130.000 dolara.

U republikama bivši SSSR prvo tele za transplantaciju primljeno je 1975. godine, no početkom uvođenja metode presađivanja embrija u stočarsku praksu treba smatrati 1984. godinu, kada je primljeno više od 2 tisuće teladi za transplantaciju.

Transplantacija embrija je temeljno nova biotehnička metoda upravljanja usmjerenom reprodukcijom stada, učinkovito sredstvo intenziviranja napretka u stočarstvu. Metoda presađivanja omogućuje potpunije iskorištavanje potencijalne plodnosti ženki kako bi se od onih koje se odlikuju visokom (rekordnom) produktivnošću dobio maksimalan broj potomaka i na taj način kompletiralo matično jato i stoka proizvođača samo s izvanrednim životinjama. Time se značajno ubrzava selekcija životinja prema željenim svojstvima, stvaraju se preduvjeti za stvaranje homogenog stada formiranog od visokoproduktivnih životinja koje potječu od jednog para roditelja rekordera. To može značajno povećati broj krava potrebnih za proizvodnju stada.

Obično se od jedne krave donorke po tretmanu dobije do pet teladi. Ako se krava donor koristi 2-5 puta tijekom godine, tada se od nje u tom razdoblju može dobiti od 6-10 do 20-25 teladi. Sa samo 20 krava rekorderki to je, očito, moguće

stvoriti zamjensko stado od 200 grla, dok se u normalnim uvjetima od iste krave u isto vrijeme ne dobije više od 10 teladi. Stoga je transplantacija embrija obećavajuća metoda za brzu reprodukciju visoko produktivnih životinja, osobito rijetkih pasmina, genetski jedinstvenih jedinki.

Transplantacija embrija pomaže u dobivanju značajnog broja sinova od vrijedne majke, koji se do početka intenzivne seksualne upotrebe mogu procijeniti produktivnošću njihovih punorodnih sestara (braće i sestara). U tom smislu, u mnogim je zemljama glavna svrha transplantacije embrija dobivanje bikova od vrhunskih krava za korištenje u mreži umjetnog osjemenjivanja životinja.

Dakle, transplantacija embrija značajno povećava učinkovitost odabira muških poboljšivača za stjecanje poduzeća za umjetnu oplodnju.

Metoda transplantacije embrija u budućnosti može postati sredstvo očuvanja i reprodukcije genskog fonda rijetkih i ugroženih pasmina životinja. Njegova uporaba pojednostavljuje razmjenu genskog fonda između zemalja: nema problema s transportom, potrebe za mjerama karantene, olakšava se aklimatizacija pasmina i hibrida, stoga se šire mogućnosti korištenja svjetskih genetskih resursa. U nizu zemalja životinje rođene transplantacijom upisuju se u matične knjige. Zbog toga zamrznuti embriji domaćih životinja postaju predmet izvoza i uvoza.

U govedarstvu se metodom presađivanja može povećati plodnost dobivanjem blizanaca: presađivanjem dva embrija u jedan primatelj (u oba roga) ili dodatnim presađivanjem (presađivanjem) embrija u slobodni rog već oplođene životinje.

Treba uzeti u obzir da transplantacija embrija može poslužiti kao osnova za proučavanje različitih aspekata reproduktivne funkcije životinja, utjecaja endo- i egzogenih čimbenika na mnoge od njih. Rezultati istraživanja (fiziološko-biokemijski, genetski, histološki, imunološki, mikrobiološki, ginekološki i dr.) poslužit će kao temelj za daljnje usavršavanje metode.

Izraženo je sljedeće mišljenje: korištenjem životinja otpornih na bolesti kao što su leukemija, mastitis itd. kao donora, moguće je prenijeti određenu imunološku otpornost na ove bolesti na potomstvo. U tom smislu vrlo je primamljiva ideja iskorjenjivanja leukemije u mliječnom govedarstvu uz pomoć transplantacije embrija. Zapadnonjemački stručnjaci smatraju da se metodom presađivanja embrija zdravo potomstvo može dobiti čak i od zaraženih donora.

S obzirom na navedeno, očito je da je transplantacija embrija perspektivna metoda za intenziviranje reprodukcije stada visokoproduktivnih životinja, što uključuje maksimalno korištenje genetski potencijal izvanrednih životinja koje obaraju rekorde. Međutim, potrebno je uzeti u obzir sljedeće.

Prvo, transplantacija embrija je učinkovita samo kada se kao donori i proizvođači koriste genetski vrijedne životinje, ispitane kvalitete potomaka i priznati poboljšivači.

Drugo, uspjeh transplantacije uvelike ovisi o kvaliteti i zdravstvenom stanju (uključujući i stanje spolnih organa) darivatelja i primatelja; učinkovitost metoda, sredstava, shema hormonskog liječenja životinja, pridonoseći pojavi superovulacije u njima; stupanj reaktivnosti (osjetljivosti) darivatelja na njihovo hormonsko liječenje i stupanj stimulirane superovulacije; kvalitetu proizvođača sperme korištenih za osjemenjivanje donora i plodnost ovuliranih jajnih stanica; cjelovitost ispiranja embrija, učinkovitost primijenjenih metoda uzgoja i skladištenja embrija izvan tijela; usavršavanje metode prijenosa embrija do primatelja; sinkronizacija spolne funkcije u donora i primatelja; usađivanje embrija i sposobnost primatelja da donese plod.

Treće, pozitivne strane Primjena transplantacije embrija u stočarstvu može se u potpunosti očitovati samo punom hranidbom, pravilnim održavanjem, racionalnim korištenjem davatelja i primatelja, intenzivnim ciljanim uzgojem zamjenskog podmlatka, provođenjem planskog ciljanog selekcijskog i uzgojnog rada na farmi uz procjenu životinje prema kompleksu gospodarski korisnih svojstava, sustavno provođenje planiranih mjera za sprječavanje i otklanjanje neplodnosti rasplodnog grla na temelju rezultata redovitih opstetričkih i ginekoloških medicinskih pregleda životinja, prisutnost visokokvalificiranih stručnjaka koji tečno vladaju teoriju i praksu transplantacije embrija, osiguravajući pri primjeni metode udobnu prostoriju, odgovarajuću opremu, reagense i preparate.

Jamac učinkovitosti metode transplantacije embrija je razuman pristup njegovoj primjeni na strogo znanstvenoj osnovi, strogo pridržavanje tehnoloških zahtjeva.

Reproduktivni organi položeni u embrionalnom razdoblju životinjskog razvoja kod ženki pokazuju svoju funkcionalnu aktivnost s početkom puberteta. S početkom puberteta kod ženki (u junica - u 6-12, u kobila - u 18, u svinja - u 5-8, u ovaca - u 5-8 mjeseci), folikuli sazrijevaju u jajnicima, mijenja se endokrina pozadina , koje su popraćene odgovarajućim morfološkim i funkcionalnim promjenama na genitalijama, koje imaju za cilj stvaranje povoljnih uvjeta za osjemenjivanje, oplodnju i gravidnost, kao i promjene u ponašanju i spolnoj aktivnosti životinja. Te se promjene ponavljaju u određenom slijedu od jedne ovulacije do druge tijekom reproduktivnog života ženke (izmjenjuju se izražena spolna aktivnost i relativno mirovanje), nazivaju se spolni ciklus.

Prema učenju A.P. Studentov spolni ciklus uključuje tri faze: uzbuđenje, inhibiciju i balansiranje. Stadij ekscitacije karakteriziraju četiri međusobno povezane faze (fenomena):

• 1) u vrućini ( estrus)- morfofunkcionalne promjene na spolnim organima (manifestiraju se hiperemijom, otokom vulve, sluznice rodnice i predvorja, vidljivog dijela vrata maternice, otvorom cervikalnog kanala, izljevom sluzi iz spolovila u izvana);
• 2) opća reakcija tijela - uzbuđenje ( reakcija)- promjena u ponašanju ženke, koja se očituje tjeskobom, skakanjem na druge ženke, smanjenjem apetita i produktivnosti;
• 3) seksualni lov ( seksualni libido) pozitivna seksualna reakcija ženke na muškarca, koja se očituje kao "refleks nepomičnosti";
• 4) ovulacija ( ovulacija) - završetak sazrijevanja folikula, njegovo pucanje s oslobađanjem zrelog jajašca iz njega u jajovod.

Ti se fenomeni pojavljuju u određenom slijedu, naslanjajući se jedan na drugi. Uzimajući u obzir osobitosti formiranja i vremena manifestacije navedenih faza faze uzbuđenja, spolni ciklusi su sinkroni (ako se vrijeme manifestacije svih pojava podudara) i asinkroni (ako je vrijeme početka i završetka ispoljavanje pojedinih faza stadija ekscitacije se ne poklapa). Ovisno o fiziološkom stanju ženke, uvjetima njezine ishrane, održavanja i eksploatacije, spolni ciklusi mogu biti potpuni (sve faze stadija uzbuđenja su dobro izražene, pojavljuju se pravodobno) ili inferiorni (kada se određena pojava dogodi). javlja) - anestralno, areaktivno, alibidno ili anovulatorno.

Faze inhibicije karakterizirane su povećanjem znakova spolnog uzbuđenja. Stadij balansiranja karakterizira dinamička ravnoteža između procesa ekscitacije i inhibicije, koja se očituje u relativnom seksualnom mirovanju.

O specifičnim značajkama spolnih ciklusa može se suditi iz sljedećih podataka. Kod krava nakon teljenja stadij ekscitacije nastupa nakon 18-25 dana i traje 2-5 dana. Formiranje faze ekscitacije:

• prvo postoje znakovi estrusa;
• zatim (nakon 2-4 dana) seksualno uzbuđenje;
• nakon 4-15 sati javlja se pojava lova koja se nastavlja

od 10-13 do 17-23 sata (prosječno 16 sati);

Ovulacija se javlja 10-15 sati nakon završetka lova.

Trajanje spolnog ciklusa je 18-22 dana (u prosjeku

Kod ovaca, pod povoljnim uvjetima za hranjenje i držanje, stadij ekscitacije može se pojaviti unutar 1 mjeseca nakon rođenja, ali češće se manifestira u određenoj sezoni (kolovoz-ožujak). Stadij ekscitacije traje 3-6 dana. U pozadini estrusa i opće reakcije, istodobno se manifestira lov, koji se nastavlja ovisno o pasmini ovaca: od 38-40 sati - kod ovaca Askani, s finim krznom, Karakul, Koridel, Gemshire, krznene pasmine, kao i kod Merino ovaca Sjevernog Kavkaza; do 41-70 sati - kod ovaca romanovske pasmine (u prosjeku, kod ovaca - 46 sati, kod odraslih životinja - 59 sati). Ovulacija se javlja uglavnom nakon 27-31 sata (za romanovske ovce - nakon 36 sati) i završava nakon 30-36 sati (za romanovske ovce proteže se do 52 sata) nakon početka lova. Kod većine životinja folikuli ovuliraju između 44. i 49. sata.Trajanje spolnog ciklusa je 14-19, češće 14-17 dana.

U kobila stadij uzbuđenja nastupa nakon poroda 5., češće 7-12. dana i traje 6-12 dana. U pozadini estrusa i opće reakcije, očituje se lov koji traje 2-12 dana (kod mladih kobila - do 4-5, kod kobila srednje dobi - 5-7, kod starih kobila - 7-12 dana). Ovulacija se često podudara s vremenom najupečatljivije manifestacije estrusa, seksualnog uzbuđenja i lova, javlja se na kraju potonjeg, trajanje spolnog ciklusa je u prosjeku 20-21 dan.

Kod svinja, pod povoljnim uvjetima za postojanje stadija ekscitacije, može se javiti unutar 1 mjeseca nakon rođenja, češće nakon odbijanja prasadi. Stadij uzbuđenja formira se sinkrono (estrus, seksualno uzbuđenje i lov pojavljuju se jedan za drugim unutar 24 sata) i asinkrono (24-77 sati prolazi između manifestacije pojedinih pojava). Estrus i opća reakcija često traju 3-4 dana. Lov kod većine krmača počinje 1 dan nakon faze uzbuđenja i traje za svinje za popravak - u prosjeku 40 sati, za glavne matice - 50-54 sata Ovulacija se često javlja 2. dana estrusa (u prosjeku 24 sata nakon ) i traje od 1-3 do 24-48 sati (obično 10-12 sati).

Reproduktivni proces kod životinja počinje osjemenjivanjem, tj. uvođenje muške sperme u ženski genitalni trakt. Prirodno osjemenjivanje životinja - spolni odnos (koitus) postaje moguć zbog manifestacije u ženki i mužjaka kongenitalnih seksualnih refleksa: grljenje, kopulacija, erekcija, ejakulacija. Danas se reprodukcija životinja temelji na masovnoj primjeni metoda umjetnog osjemenjivanja.

Pri odabiru optimalnog vremena osjemenjivanja uzimaju se u obzir uvjeti održivosti i očuvanje sposobnosti oplodnje sperme u reproduktivnom aparatu ženke (do 24-48 sati) i jaja nakon ovulacije (4-6 sati), vrijeme potrebno za sazrijevanje u spermatozoid (najmanje 6 sati) i jajne stanice (do 2 sata), kao i specifičnosti spolnog ciklusa. Osjemenjivanje treba provesti tijekom faze estrusa, koju otkriva mužjak sonde, prije nego što nastupi ovulacija. Kako bi inseminacija bila učinkovita, potrebno je osigurati da doza ubrizgana u ženski spolni trakt sadrži optimalnu količinu aktivnih spermija sposobnih za oplodnju jajašca; različita je kod različitih životinjskih vrsta. Pri odabiru metode umjetnog osjemenjivanja životinja različitih vrsta uzima se u obzir vrsta njihove prirodne oplodnje. Za životinje s vaginalnim tipom prirodnog osjemenjivanja (krave, junice, ovce) koristi se cervikalna metoda umjetnog osjemenjivanja; umjetno osjemenjivanje životinja s uterinim tipom osjemenjivanja provodi se uterinskom metodom, uz korištenje odgovarajućih alata.

Inseminacija, u kombinaciji s brojnim čimbenicima koji doprinose, osigurava susret spermija s jajnom stanicom u gornjoj trećini jajovoda i oplodnju, tj. fiziološki proces koji se sastoji u spajanju jajnih stanica i spermija, nakon čega slijedi njihova međusobna asimilacija i disimilacija, uslijed čega nastaje kvalitativno nova stanica - zigota s potpunim (diploidnim) kromosomskim sklopom, koja ima dvostruko nasljedstvo (po ocu i majčinski). Oplodnja kod životinja sastoji se od nekoliko faza: denudacija (oslobađanje jajašca od zračnog vijenca - folikularnih stanica pod utjecajem hijaluranidaze spermija), prodiranje spermija kroz prozirnu membranu i žučni prostor, uvođenje spermija u citoplazmu jaje kroz membranu žumanjka i stvaranje dvaju pronukleusa s pola (haploidnim) skupom kromosoma u svakom od njih, spajanje pronukleusa.

Nastala zigota dobiva snažan poticaj za daljnji razvoj i počinje se brzo fragmentirati s povećanjem broja blastomera. Jezgra zigote se u intervalima od otprilike 24 sata dijeli na dvije, četiri, osam itd. blastomeri. Cijepanje kravlje zigote traje oko 8 dana. Tijekom prva 2-4 dana dolazi do drobljenja u jajovodu, a zatim u jednom od rogova maternice. Otprilike 4-5 dana, drobljenje blastomera formira gustu skupinu stanica (16-32) - ranu morulu, čiji se vanjski sloj (trofoblast) sastoji od brzo dijelećih malih svijetlih blastomera, a unutarnji sloj (embrioblast) sastoji se od blastomera koji se sporo dijele. 5-7 dana formira se kasna morula koja se sastoji od 32-90 blastomera, a 7-8 dana između trofoblasta i embrioblasta nastaje šupljina ispunjena tekućinom - to je rana blastocista s 80-120 blastomera. 19. dana blastocista se transformira u embrij s ekstraembrionalnim membranama. Usađivanje embrija u sluznicu maternice događa se nakon 18-20 dana kod ovaca, 18-21 dana kod goveda, 11 dana kod svinja.

Od trenutka oplodnje počinje embrionalno razdoblje koje traje: kod krava - 60 dana, kod ovaca - do 48 dana, kod svinja - 38 dana. U ovom trenutku, polaganje organa, formiranje fetalnih membrana. Sljedeći dani prije poroda - fetalno razdoblje; u ovom trenutku dolazi do rasta organa, dovršava se formiranje tijela.

Intrauterini razvoj novog organizma određuje posebno fiziološko stanje ženke povezano s plodom, zvano trudnoća, koja počinje od trenutka oplodnje - dan posljednjeg (plodnog) osjemenjivanja i završava rođenjem zrelog fetusa, je karakteriziran kompleksom promjena u metabolizmu, hematološkom i hormonskom statusu, morfofunkcionalnim promjenama u svim fiziološkim sustavima ženskog tijela koji osiguravaju normalan razvoj embrija i fetusa. Posljedično, normalan tijek trudnoće osiguran je dijalektičkim jedinstvom, međusobnom vezom suprotnosti: majčinskog organizma i intrauterino razvijajućeg pojedinca. Povreda ovog jedinstva dovodi do pobačaja - prijevremenog prekida trudnoće. Optimalni način hranjenja, držanja i iskorištavanja trudnih ženki, za koje je inherentna napetost svih funkcija, osmišljen je za promicanje rađanja zdravog potomstva, kako bi se spriječio prijelaz fiziološke trudnoće u patološku.

Usmjerena regulacija reprodukcije životinja trebala bi se temeljiti na poznavanju značajki neurohumoralne regulacije spolnih procesa.

Ritam spolnih ciklusa, slijed i međusobni odnos njihovih faza i faza (fenomena) objašnjavaju se interakcijom živčanog i humoralnog (endokrinog) sustava tijela. Neophodan uvjet za pojavu i manifestaciju spolnih ciklusa je prisutnost dvije skupine hormona:

• 1) gonadotropni - folikulostimulirajući (FSH), luteinizirajući (LH) i luteotropni (LTH), ili laktogeni, proizvedeni od strane hipofize, a tijekom trudnoće - također od placente;
• 2) gonodalni, ili ovarijski, nastaje u jajnicima - folikularni (folikulinski), ili estrogenski (poznate su tri vrste estrogena: estron, estradiol, estriol, od kojih je drugi najaktivniji), koji nastaje u sazrijevanju folikula, i progesterona - hormona žutog tijela . Hormoni drugih endokrinih žlijezda (nadbubrežne žlijezde, štitnjače, timusa) sudjeluju u regulaciji spolnih procesa. Cijeli humoralni sustav prima primarne impulse iz cerebralnog korteksa.

Na formiranje i manifestaciju novog ciklusa, osim unutarnjih, utječu i vanjski čimbenici: hrana, svjetlost i mužjak su od najveće važnosti. S hranom, sterone i vitamini ulaze u životinjsko tijelo, iz kojeg se pod utjecajem insolacije sintetiziraju tvari poput folikula; stvaraju povoljnu pozadinu za utjecaj muškog na žensko.

Iritaciju čimbenicima okoliša percipiraju receptori očiju, kože, probavnog trakta i drugih organa, kao i olfaktorni, vizualni, slušni, taktilni (taktilni) analizatori, ulazi u cerebralni korteks kroz centripetalne živce, odakle se prenosi centrifugalnim putovima do hipotalamusa. Ovdje se stvara neurosekret (faktor oslobađanja) koji preko krvi djeluje na hipofizu.

Stražnja hipofiza proizvodi pituitrin (njegov glavni sastavni dio je oksitocin), koji pojačava kontraktilnu aktivnost glatkih mišića genitalnog trakta i vimena. Neurosekrecija hipotalamusa također budi hipofizu (njezin prednji režanj) za oslobađanje FSH čijim ulaskom u krv dolazi do razvoja i sazrijevanja folikula u jajnicima. Sazrijevanje jednog ili više folikula prati stvaranje estrogena, koji preko kemoreceptora i analizatora mozga izaziva estrus, opće uzbuđenje i lov. Prisutnost velike količine estrogena inhibira izlučivanje FSH i istovremeno stimulira otpuštanje LH i LTH prednjeg režnja hipofize. Pod utjecajem LH (uz optimalan omjer FSH i LH od oko 1:10) dolazi do ovulacije i stvaranja žutog tijela. Litotropni hormon regulira funkciju žutog tijela, budi ga za proizvodnju progesterona, stimulira rad mliječne žlijezde tijekom dojenja. Hormon žutog tijela inhibira daljnje oslobađanje LH, potiče luteotropnu funkciju hipofize, ne ometa lučenje FSH, što rezultira rastom novih folikula, a spolni ciklus se ponavlja.

Kada nastupi trudnoća, proliferativni procesi u maternici koji se javljaju tijekom estrusa intenziviraju se pod djelovanjem hormona žutog tijela. Progesteron određuje razvoj sekretorne funkcije endometrija, priprema sluznicu maternice za pričvršćivanje embrija i njegov normalan razvoj, doprinosi očuvanju trudnoće u početnoj fazi (s njegovim nedostatkom ili ekstruzijom žutog tijela, embrij umire, dolazi do pobačaja); inhibira rast folikula i ovulaciju, sprječava kontrakciju maternice (antifolikularna funkcija progesterona), uzrokuje hipertrofiju mliječnih žlijezda i priprema ih za laktaciju.

U regulaciji spolne funkcije sudjeluju prostaglandini koje proizvodi sluznica maternice i drugi organi, koji potiču sintezu prolaktina, progesterona i drugih hormona, smanjuju lučenje luteotropina, te sudjeluju u regulaciji rađanja; PG-F povećava kontraktilnost maternice, potiče resorpciju žutog tijela, smanjujući sadržaj progesterona u krvi; PG-E smanjuje kontraktilnost maternice.

Donator (od lat. (1po - daryu) - ženka koja je dosegla anatomsku i fiziološku zrelost, visoke uzgojne vrijednosti, od koje se nakon hormonalne stimulacije, superovulacije i inseminacije spermom vrhunskog proizvođača dobivaju embriji. Primatelj (od lat. gearu - ona koja prima, prihvaća) je manje produktivna životinja koja se koristi za nošenje zametaka. Telad dobivena od njih naziva se transplantacija.

Odabir visoko produktivnih životinja glavna je tehnika uzgoja koja omogućuje povećanje njihove produktivnosti iz generacije u generaciju. Kod presađivanja embrija potrebno je što više koristiti rekorderke u rasplodnim stadima kao donore embrija koje će njegovati manje produktivne životinje primateljice. Glavni kriterij za odabir krava donora je razina proizvodnje mlijeka, tj. njihov visok genetski rezultat i sposobnost prenošenja poželjnih osobina na potomstvo. Prilikom odabira donora, njihovo podrijetlo, produktivnost roditelja, trajanje gospodarsko korištenje, prisutnost izvanrednih predaka u rodovnici, njihove reproduktivne kvalitete.

Produktivnost davatelja tijekom nekoliko laktacija trebala bi biti 50-80% iznad standarda pasmine, a sadržaj masti u mlijeku trebao bi biti jednak ili iznad standarda. Prema francuskim stručnjacima, razlika u produktivnosti davatelja i primatelja trebala bi biti najmanje 200 kg mlijeka. Prema standardima usvojenim u SSSR-u, krave s razinom mliječne produktivnosti od najmanje 7000 kg mlijeka u 305 dana laktacije s udjelom masti od 3,6-4,2% prikladne su za korištenje kao donatori. Odabir majki donatorica budućih bikova provodi se još pažljivije. Osim procjene razine mliječnosti i udjela masti, pri odabiru krava donorica uzimaju se u obzir i brojne dodatne značajke: oblik vimena i sisa, protok mlijeka, sadržaj bjelančevina u mlijeku, konstitucija, čvrstoća kostiju i kopita, nasljedna otpornost (sklonost mastitisu i drugim bolestima), pokazatelji reproduktivne funkcije za nekoliko teljenja, adaptivna svojstva. Prema skupu uzgojnih svojstava (stupanj mliječnosti, oblik vimena i sisa, protok mlijeka, konstitucija) krave donorice moraju ispunjavati uvjete elitno-rekordnog razreda, biti otporne na bolesti, otporne na tehnološke napore, i imaju visoku reproduktivnu sposobnost. Obično se uzimaju samo mlade (4-5 godina) zdrave, visokoproduktivne krave ili krave tvorničkog tova, bez metaboličkih poremećaja, koje su imale najmanje dva normalna teljenja u posljednje tri godine s optimalnim trajanjem postpartuma i međuteljenja. razdoblju, koriste se kao donori. Životinje u dobi od 8 godina i starije malo su korisne za ove svrhe zbog smanjenja superovulacijskog odgovora na injekcije gonadotropina. Izlučene krave mogu se koristiti kao donori samo ako su visokog uzgoja i vrijednost robe prethodnih godina dobro zdravlje i pod uvjetom da razlog odstrela nije povezan sa smanjenjem reproduktivne sposobnosti. Ne isključuje se mogućnost korištenja junica starijih od 15 mjeseci kao donora, pod uvjetom da su porijeklom (ali treba imati na umu da životinje koje ne doje imaju lošiji odgovor na gonadotropne hormone od onih u laktaciji).

Odabir darivatelja provodi se komisijski uz izdavanje veterinarskog certifikata za svaku životinju ili skupinu životinja. Farma na kojoj se biraju krave donori mora biti slobodna od bruceloze, tuberkuloze, paratuberkuloznog enteritisa, leukemije, klamidije, kampilobakterioze, virusnih respiratornih bolesti, infektivnog rinotraheitisa, pustularnog vulvovaginitisa, slinavke i šapa i drugih zaraznih bolesti. Životinje moraju biti cijepljene u skladu s planom protuepizootskih mjera. Svaki budući darivatelj podvrgava se temeljitom kliničkom pregledu. Ginekološkim pregledom utvrđuje se stanje spolnih organa životinja. U broj darivatelja nisu uključene životinje koje su imale težak porod, zaostalu posteljicu, mastitis, postpartalne bolesti, disfunkciju jajnika i maternice, kao i ginekološke bolesti, pothranjenost, metaboličke poremećaje i druge patološke procese. Potrebno je odrediti trajanje spolnog ciklusa kod odabranih krava. Životinje s inferiornim spolnim ciklusom, anafrodizijom isključene su iz broja donora, krave primljene s drugih farmi prethodno su cijepljene.

Hormonsko liječenje (stimulacija superovulacije) počinje 2-3 mjeseca nakon teljenja. Životinje koje ne reagiraju na hormonsko liječenje isključuju se iz broja donora. Treba imati na umu značajnu varijabilnost u odgovoru davatelja na superovulacijsko liječenje: do 20-40% krava davatelja ne proizvodi održive embrije; oko / 3 donora se moraju izlučiti. Pri planiranju transplantacije polaze od mogućnosti dobivanja prosječno pet punopravnih embrija od svake krave donora u jednom tretmanu. Broj donorskih tretmana tijekom godine prilagođava se ovisno o potrebama odgovora na liječenje. Prema N.I. Kirillova i dr. (1986), krave su prikladne za višekratnu upotrebu kao donori, koje dobro reagiraju na hormonske tretmane i daju najmanje pet normalnih embrija za prvo i drugo vađenje.

Ne postoji konsenzus o učestalosti korištenja donora. Mogu se ponovno koristiti ne prije 1,5-2 mjeseca nakon sljedećeg ispiranja. U pravilu, otprilike 30 dana nakon ispiranja embrija, faza ekscitacije spolnog ciklusa nastavlja se kod krava donora. U Sjedinjenim Američkim Državama uobičajeno je ponovno hormonalno tretirati krave donore preskakanjem dva estrusna ciklusa nakon što se embriji isperu. U Francuskoj se 7. dan nakon vađenja embrija darivateljice tretiraju prostaglandinom, zatim se preskaču jedan ili dva ciklusa, nakon čega se, počevši od 8.-12. dana sljedećeg ciklusa, ponovno liječe darivateljice. U SSSR-u je preporučeno koristiti dva ili tri puta s intervalom od 45-60 dana za dobivanje embrija od krava donora, a zatim ih vratiti u stado za prirodnu reprodukciju. Tijekom tog razdoblja osigurano im je punopravno hranjenje, ograničavajući opskrbu silažom i koncentratima; osigurati svakodnevno aktivno vježbanje.

Prikladno je napomenuti da se s jednom upotrebom krave kao donora, razdoblje od teljenja do oplodnje povećava na 40 dana, a s ponovljenom upotrebom, za odgovarajući veći broj dana (N. I. Kirillova i sur., 1986). Hormonsko liječenje krava može smanjiti proizvodnju mlijeka, pa čak i zaustaviti. Da bi se obnovio prinos mlijeka, donorima se mogu dati injekcije.

odjeljci sintetskih analoga prostaglandina F-2 alfa (estrofan, enzaprost, estrumat).

Kao primatelji koriste se krave niske uzgojne vrijednosti (po mogućnosti ne starije od šest godina) i junice bilo koje pasmine srednje ugojenosti (živa težina 340-380 kg; bolje od hibrida) u dobi od 16-20 mjeseci. Životinje primatelji moraju biti dobro razvijene, klinički zdrave, bez patološke promjene u genitalnom području i metabolički poremećaji, s izraženom spolnom ciklusnošću. Dijagnostičkim studijama treba isključiti brucelozu, trihomonijazu, kamence, bakterije, leukemiju, rinotraheitis, leptospirozu, klamidiju, paratuberkulozu i druge zarazne bolesti.

Preporučeno stanje davatelja i primatelja je 1: 5-10. Učinkovitost transplantacije embrija uvelike ovisi o usklađenosti spolnog ciklusa u davatelja i primatelja. Stoga je potrebno točno odrediti vrijeme manifestacije faze estrusa, trajanje spolnog ciklusa.

Normalna reproduktivna sposobnost životinja i proizvodnja dobro razvijenog potomstva u velikoj su mjeri osigurani punopravnom uravnoteženom ishranom davatelja i primatelja, uzimajući u obzir njihovo fiziološko stanje i produktivnost. Prema standardima hranidbe, prehrana životinja treba biti uravnotežena u pogledu energije, bjelančevina, ugljikohidrata, makro- i mikroelemenata, vitamina u njihovom optimalnom omjeru. Donatori i primatelji hrane se prema individualnim obrocima, pravilno odabirući raznovrsnu visokokvalitetnu hranu. Posebnu pozornost treba obratiti na hranidbu suhoparnih krava: njihova prehrana treba se sastojati od kvalitetnog sijena i minimalne količine sočne, zelene i koncentrirane hrane.

Metode izazivanja superovulacije. Višestruka ovulacija u donora uzrokovana je njihovim hormonskim liječenjem, uzimajući u obzir osobitosti neurohumoralne regulacije njihovih spolnih procesa. Konkretno, indukcija superovulacije u donora temelji se na povećanju sadržaja FGS u njihovoj krvi, stimulaciji zbog toga sazrijevanja mnogih folikula; indukcija u odgovarajućem trenutku regresije žutog tijela i ovulacije maksimalnog broja zrelih folikula. U tu svrhu koriste se: nativni serum gravidnih kobila (FFA), keofilizirani serum gravidnih kobila, pročišćen od balastnih proteina (PMSF) ili zoo

folikulostimulirajući hormon (FSH), dobiven iz hipofize životinja, u kombinaciji s luteolitičkim hormonom (sintetski analog prostaglandina F-2 alfa-estrofan, egzoprost, estrafulan itd.).

FFA i GSFA su pripravci koji sadrže gonadotropne hormone, koji su po svojim biološkim svojstvima gonadotropni hormoni prednje hipofize. Serumski gonadotronin ima folikulostimulirajući i luteinizirajući učinak, pri čemu je prvi 2-3 puta jači od drugog. FFA aktivnost (FSFA) mjeri se u međunarodnim ili mišjim (IU) jedinicama. Jedna međunarodna jedinica (ili 2,5 IU) jednaka je 0,25 mg standardnog lijeka. Titar hormonskog seruma, određen sadržajem gonadotropina u njemu, kreće se od 60 do 300 IU po 1 ml i obično iznosi 120-180 IU po 1 ml nativnog seruma.

Kravama donoricama PMFA ubrizgava se supkutano jednom usred spolnog ciklusa u prisutnosti dobro razvijenog žutog tijela u jednom od jajnika. Superovulacijska doza je 200-300 IU (povećanje doze dovodi do povećanja broja ovuliranih folikula, ali je popraćeno povećanjem broja neoplođenih i degeneriranih jajašca, što je prepuno stvaranja cista u jajnicima) . Nakon 40-48 sati - estrofan ili estrumat - 500 mcg. Istovremeno se dobije 6-7 ovulacija po donoru. Možete unijeti egzoprost - 30 mg. Kod većine životinja toplina se javlja 48 sati nakon injekcije prostaglandina.

No treba napomenuti da 40-70% krava na uvođenje PMSG-a reagira superovulacijom. Ostatak ima atipične reakcije: izostanak rasta folikula, mali broj ovuliranih folikula, stvaranje folikularnih cista. Uz to, nakon takvog tretmana, zabilježeno je smanjenje plodnosti, poremećaji u razvoju zigote. Ove negativne posljedice objašnjavaju se hormonskom neravnotežom, jer egzogeni FFA gonadotropini zadržavaju biološku aktivnost u tijelu žena dva tjedna.

Kako bi se isključio dugoročni učinak FFA gonadotropina na jajnike, predloženo je korištenje antiseruma za gonadotropine: donor se tretira antiserumom četiri dana nakon injekcije MFFA. U isto vrijeme, prema N.I. Sergeeva (1986), reagiraju sa superovulacijom 9,2; prinos normalnih embrija raste s 1,8 na 4,1. No, takvi se rezultati postižu nakon prva dva tretmana PMSG-om; broj životinja koje reagiraju na treći tretman smanjen je za 50%, prinos embrija pogodnih za transplantaciju smanjen je na 2,8 po reagiranom darivatelju. Stabilnije rezultate daje standardni pripravak FFA (foligon) u kombinaciji s antiserumom čehoslovačke ili belgijske proizvodnje: oko 90% darivateljica reagira superovulacijom, svaka od njih u prosjeku ima 7,4 ovulacije.

Učinkovitije je koristiti folikulostimulirajući hormon (FSH-P) od 9. do 12. dana spolnog ciklusa. Prednost ovog lijeka je da se višestrukim (5-8 puta) liječenjem broj ovulacija i normalnih embrija ne smanjuje, au nekim slučajevima čak i povećava. Zbog brze inaktivacije u tijelu, FSH-P se primjenjuje u frakcijskim dozama (potrošnja lijeka za tijek liječenja je 32-50 mikrona). Predloženo je nekoliko opcija za korištenje FSH-P. Dakle, V.P. Belyaev i suradnici (1988.) dobili su dobar superovulacijski odgovor pri korištenju FSH-P u intervalima od 12 sati u opadajućim dozama: 8 + 8 + 8 + 5 + 3 + 3 + 2 + 2 mg; 48 sati nakon početka liječenja kravi donorici ubrizgan je estrofan u dozi od 2 mg (500 μg), dok je više od 71% krava odgovorilo poliovulacijom s prosječnim brojem ovulacija od 8,7 (izvađeno je 6,5 embrija po donoru). , od čega 4,8 punopravnih ). Estrofan je najbolje primijeniti dva puta u razmaku od 12 sati: prvi put - 500 mcg, drugi - 250 mcg.

Treba imati na umu da oko 30% životinja ne reagira na FSH.

Ako se liječenje krava donora provodi uzimajući u obzir individualnu reaktivnost organizma na hormonske lijekove, može se povećati superovulacijski odgovor životinja (V.V. Madisson, S.N. Krylov, 1986.). Utvrđen je pozitivan odnos između embrionalne produktivnosti i mliječne produktivnosti kod krava donora: više je embrija dobiveno od krava s višom razinom mliječne produktivnosti nego od manje produktivnih životinja.

Utvrđena je značajna varijabilnost superovulacije (od 1 do 100 folikula) ovisno o vrsti, kvaliteti, dozi, vremenu, učestalosti primjene lijeka, načinu liječenja životinja, takvim genetski određenim čimbenicima kao što su razina folikulogeneze, broj primarnih folikula koji mogu odgovoriti na hormonsko liječenje, imunološku reaktivnost organizma, kao i o pasmini, dobi, statusu laktacije, zdravstvenom stanju životinje, veličini jajnika i njihovoj osjetljivosti na gonadotropin, uvjetima hranidbe i donorima ( Yablonsky V.A., 1988).

Postoji nekoliko shema za obradu krava donora.

shema 1. 10-12. dan spolnog ciklusa - nativni pripravak PMSG - 3000-3800 IU, hormogon u smjesi s PUFA - 500 IU; 12-14 dana - prostaglandin - 500-30 mcg / mg; 14-16. dana - lov, osjemenjivanje; 21-23 dana - ekstrakcija embrija.

Shema 2. 2. dan spolnog ciklusa – vitamin ALI- 150.000 IU vitamina E- 100 mg, vodeni kalij - 100-200 mg; 10-12 dan - na-

aktivni lijek PMSG - 3000-3800 IU, vitamin ALI- 7500 IU, vitamin U - 50 mg; 12-14 dana - prostaglandin - 500-30 mcg / mg; 14-16. dana - lov, osjemenjivanje; 21-23 dana - ekstrakcija embrija.

Shema 3. 8., 9., 10., 11., 12. dan spolnog ciklusa - FSH-P - 10 mg; 13. dan - lov, oplodnja; 20. dan - vađenje embrija.

Kod tzv. metode indukcije superovulacije 16-17. dana spolnog ciklusa kravi se ubrizgava 1500-3000 IU PMSG. Već 2. dan kod životinja se pojavljuje lov. Radi lakšeg prepoznavanja, 10. i 20. dan im se ubrizgava 10 mg ekstradiol benzoata, a 21. dan - na dan lova - intravenski 1500-300 IU korionskog gonadotropina.

Kao što je već spomenuto, trenutačno se liječenje gonadotropinima provodi u lutealnoj fazi ciklusa. Pritom se darivateljima najprije daje prostaglandin (jednom ili, bolje, dva puta u razmaku od 11 dana), određuje se vrijeme početka vrućine (taj dan ćemo uzeti kao "nulti") i na 8-13 dan nakon toga, tj. u aktivnu lutealnu fazu ubrizgava se 1500-3000 IU PMSG. Na tom se principu temelji "danska" metoda korištenja prostaglandina (ili njegovog analoga), koji uzrokuje luteolistički učinak i ovulaciju.

Da bi se povećao prinos zametaka i njihova biološka korisnost, kravama donoricama daju se i vitaminski pripravci. (ALI - 120-150 tisuća IU, E - 80-100 mg), elementi u tragovima (kalijev jodid - 100-200 mg dnevno s hranom).

Francuska shema pripreme donatora predviđa preliminarnu sinkronizaciju njihovog lova uz pomoć sinkromata B (novi prostaglandin koji u svom sastavu sadrži analog progesterona i estradiola). Lijek se ugrađuje donatoru ispod kože uha. Devetog dana implantat se vadi. Jedanaestog dana životinja počinje loviti. Od 10. do 22. dana vrši se oplodnja donora, a 33. dana vađenje embrija.

Izražena potraga za donoricama ukazuje na dobar odgovor njihovih jajnika na hormonske pripravke. Utvrđivanje približnog broja zrelih folikula tijekom inseminacije je teško. Bolje je to učiniti nakon ovulacije u smislu broja formiranog žutog tijela i broja izvađenih embrija i jajašaca.

Ako krave ne reagiraju na hormonsko liječenje, isključuju se iz broja donora.

Da bi se izazvala superovulacija u ovaca donora, ubrizgava im se serumski gonadotropin od 700-1500 IU 12-13. dana spolnog ciklusa. Lov nastupa za 2-4 dana, 74-100% tretiranih ovaca ima superovulaciju. Može se primijeniti intravenski rano u estrusu

500-100 IE hCG (korionski gonadotropin) (Vlakhov K.N., 1982). Dobri rezultati postižu se uvođenjem 12 000 IU FFA 11. dana spolnog ciklusa i 260 μg prostaglandina nakon 68 sati. U ovom slučaju dolazi od 3 do 38 ovulacija (Averill R.L., 1958; Sergeev N.I. et al., 1984).

Kod svinja superovulacija je uzrokovana primjenom PMSG u dozi od 600-800, dok broj ovulacija doseže 33-38. Za poticanje poliovulacije u kobila, ubrizgava im se 2000-3000 IU hCG.

Inseminacija donorica. Nakon hormonskog tretmana darivateljica u fazi spolnog uzbuđenja (tijekom faze estrusa prije početka ovulacije), one se podvrgavaju osjemenjivanju. Trenutno se reprodukcija stada domaćih životinja temelji na širokoj primjeni metode umjetnog osjemenjivanja.

U krava liječenih gonadotropinima u folikulinskom stadiju (15-16. dan spolnog ciklusa), lov se javlja nakon 3-7 dana. U krava podvrgnutih kombiniranom liječenju gonadotropinima i prostaglandinom F-2 alfa u lutealnoj fazi spolnog ciklusa, lov se javlja 36-75 sati nakon injekcije prostaglandina i traje prosječno 24 sata (do 36-48 sati). Da bi se otkrila, svaka 3-4 sata provodi se hunting test Ovulacija počinje 54-60 sati nakon primjene prostaglandina; proteže se do dva dana. Krave je potrebno umjetno osjemenjivati ​​8-12 sati nakon otkrića tjeranja (Newcomb, 1980. - najkasnije 48 sati nakon primjene prostaglandina), ponovno - nakon 12 sati; kod produljenog lova provodi se treća (i eventualno četvrta) oplodnja nakon istog vremena. Ako se početak tjeranja ne može ustanoviti, krava donor se osjemeni u određeno vrijeme - 56 i 72 sata nakon injekcije prostaglandina.

Za umjetno osjemenjivanje krava donora koristi se visokokvalitetna sperma očeva, ocijenjena kvalitetom potomstva i priznata kao poboljšivač. Primijeniti cervikalnu metodu umjetne oplodnje s rektalnom fiksacijom cerviksa; u dozi ubrizgane sperme treba biti najmanje 40-50 milijuna aktivnih spermija.

Umjetno osjemenjivanje ovaca provodi se: u kolovozu-rujnu - za dobivanje zimskog janjenja iu listopadu-studenom - za postizanje proljetnog janjenja uz završetak svih radova u roku od 35-40 dana. Odabir matica u lovu počinje rano ujutro uz pomoć sondnih ovnova. Ovce se osjemenjuju tijekom razdoblja lova dva puta: ujutro - nedugo nakon što se kod njih uspostavi pojava lova, ponovno - navečer istog dana ili (uz nastavak lova) sljedećeg jutra. Umjetna oplodnja provodi se visocervikalnom metodom pomoću vaginalnog spekuluma i staklene štrcaljke-katetera ili poluautomatske štrcaljke. Unesite u cervikalni kanal do dubine od 1-2 cm od 0,06 (svježe dobivena) do 0,1-0,2 ml (razrijeđena) sjemena koja sadrži najmanje 50 milijuna aktivnih spermija u dozi (aktivnost spermija svježe dobivenih spermija mora biti najmanje 8 bodovi, pohranjeni kratko vrijeme - ne niže od 7 bodova).

Umjetno osjemenjivanje svinja provodi se u sljedećim terminima:

• 1) s tri detekcije tijekom dana kod krmača u fazi estrusa - jednom, u prosjeku, 24 sata nakon početka estrusa;
• 2) u slučaju otkrivanja tjeranja kod krmače dva puta tijekom dana - prvi put - 12 sati nakon što su utvrđeni znakovi tjeranja, ponovno - nakon 12 sati; 3) s jednim otkrivanjem krmača tijekom dana u fazi estrusa (ujutro) - odmah nakon njegovog uspostavljanja i ponovno nakon 24 sata.

Koriste se dvije metode intrauterinog umjetnog osjemenjivanja: 1) osjemenjivanje razrijeđenom spermom prema tehnologiji VIZH pomoću uređaja POS-5 (sperma se ubrizgava u količini od 1 ml na 1 kg težine životinje, ali ne više od 150 ml, koji sadrži 3-5 milijardi aktivnih spermija); 2) frakcijska metoda inseminacije univerzalnom sondom UZK-5 (injicira se 40-50 ml nerazrijeđene ili slabo razrijeđene sperme koja sadrži 2-3 milijarde aktivnih spermija, a zatim od 70-80 do 100 ml fiziološke otopine). Za osjemenjivanje se koristi sperma s aktivnošću: svježe dobivena - s aktivnošću od najmanje 7 bodova, kratkotrajno pohranjena - s aktivnošću od najmanje 6 bodova.

Umjetno osjemenjivanje kobila provodi se ako imaju folikul 3. i 4. stupnja zrelosti (s jasnom manifestacijom znakova izlova 3. i 4. stupnja) i ponavlja se svaka 24 sata do pojave ovulacije i znakova izlova. uvenuti. Kobile se intrauterino osjemenjuju pomoću gumenog ili ebonitnog katetera sa staklenom štrcaljkom kapaciteta 30-40 ml. Doza sjemena (od 25 do 45 ml) treba sadržavati najmanje 300 milijuna aktivnih spermija. Aktivnost sperme treba biti: u svježe dobivenim ejakulatima - aktivnost od najmanje 6 bodova, u zamrznutoj i odmrznutoj spermi - aktivnost od najmanje 2 boda.

Vađenje embrija. Budući da se tijekom superovulacije folikuli ne otvaraju istodobno, oplodnja jajnih stanica i njihov prolaz kroz jajovod je vremenski rastegnut. Dana 4-5 dana, glavni broj embrija kreće se iz jajovoda u rog maternice, iako oko 10% njih može ostati u jajovodu do 8 dana. Postupno se embriji pomiču s vrha roga maternice na njegov prednji dio, a 7-8 dana oko 73% njihovog broja je ovdje, oko 20% se zadržava u sredini.

dijelovi roga, a 7% - u jajovodima. Do 8-9 dana embriji ostaju u slobodnom stanju.

U krava donora šestog-sedmog dana nakon osjemenjivanja pažljivom palpacijom kroz rektum broji se broj žutih tijela i utvrđuje stupanj njihove razvijenosti. Nakon toga, embriji se uklanjaju. Uzimanje zametaka iz životinja donora može se izvesti na dvije metode: kirurški i nekirurški.

Sve do sredine 1970-ih. embriji iz krava vađeni su uglavnom kirurškom metodom, vađenjem iz jajovoda ili roga maternice, ovisno o stadiju u kojem je operacija obavljena. Kada se koristi kirurška metoda, donator se drži 1-1,5 dana na dijeti za izgladnjivanje, a zalijevanje se isključuje 6 sati prije operacije.

Predlaže se nekoliko operativnih pristupa: uz bijelu liniju abdomena, u predjelu gladne jame (lijevo ili desno), kroz gornji sloj vagine.

Kirurško vađenje embrija laparotomijom uz bijelu liniju češće se izvodi kod junica, u dobro opremljenoj klinici.

Premedikacija uključuje intramuskularnu injekciju 2 ml rampuna, 4 ml 0,1% otopine atropina ili 4 ml kombelina. Životinja je fiksirana na operacijskom stolu u dorzalnom položaju. Operacija se izvodi u općoj anesteziji (intravenozno 10% otopine kloralhidrata u količini od 100 ml na 100 kg težine životinje). Nakon anestezije i pripreme operacijskog polja napravi se abdominalni rez u dužini od 15 do 30 cm po bijeloj liniji što bliže zdjelici (ispred mliječne žlijezde). Nakon što je napravljen rez na peritoneumu, ruka se umetne u trbušnu šupljinu, pronađe se i ukloni jedan rog maternice zajedno s jajovodom i jajnikom, u kojem se broji broj žutih tijela. Tijelo je fiksirano u otvoru za ranu. Da bi se uklonio embrij, maternica se ispere velikom količinom tekućine. Pranje embrija može se provesti uterinskom ili utero-oviduktnom metodom. U oba slučaja, prvo se napravi mali rez na stijenci roga maternice u blizini njezina tijela, kroz njega se umetne Follyjev kateter i pomakne do vrha roga. U balon-manžetu katetera ubrizgava se 20-30 cm zraka.

Kada se koristi uterinska metoda, vrh roga maternice se probuši iglom, kroz njega se štrcaljkom ubrizgava tekućina za pranje zagrijana na 37 °C - Dulbeccov medij s dodatkom 1% goveđeg albumina ili sterilnog seruma (dijelovi ubrizgava se do 120 ml tekućine u lumen roga). Tekućina za ispiranje koja istječe kroz Folly kateter skuplja se u sterilnu bočicu (epruvetu) kapaciteta 150 ml. Učinite isto s drugim rogom maternice.

Tubarna metoda se razlikuje po tome što se za ispiranje embrija u ampulu jajovoda sa strane lijevka uvodi tupa igla s elastičnim crijevom (gumena ili staklena kanila) i kroz nju se dovodi tekućina za ispiranje koja prolazi kroz jajovod, rog maternice i kroz Follyjev kateter (sl. 12.6) ulazi u sterilnu posudu.

Riža. 12.6.

Kirurško vađenje embrija laparotomijom u gladnu jamu najjednostavnija je i najmanje dugotrajna metoda. Može se izvoditi u lokalnoj anesteziji.

Krava donor se fiksira u stojeći položaj, a operacijsko polje se priprema prema općeprihvaćenim kirurškim principima. Premedikacija se provodi intramuskularnom injekcijom 0,7 ml rampe. Nanesite paralumbalnu anesteziju s 2% -tnom otopinom novokaina (prema I.I. Magda) u kombinaciji s infiltracijskom anestezijom duž linije abdominalnog reza. Potonji počinje na razini zgloba kuka, odstupajući od njega naprijed za 2 cm (na udaljenosti od 8 cm ispred linije zglob koljena između vanjskog ilijačnog tuberkula i stražnjeg ruba rebra, 10 cm ispod poprečnih kostalnih nastavaka lumbalnih kralježaka). Pranje embrija provodi se na isti način kao što je gore opisano.

Nakon ispiranja, maternica se vrati na mjesto, trbušna šupljina se ispere fiziološkom otopinom, u nju se ubrizga 1 milijun jedinica penicilina i streptomicina, rana trbušne stijenke se napudra tricilinskim prahom i zašije, a zatim se tretira s otopinom joda i primjenom ljepljivog zavoja. Konci se uklanjaju nakon dva tjedna.

Kirurška metoda vađenja embrija kroz rez u gornjem vaginalnom forniksu (transvaginalna metoda) koristi se u slučajevima kada je zbog anatomskih karakteristika strukture cerviksa nemoguće izvršiti nekirurško vađenje embrija. Ova metoda je prikladna samo za jednokratnu upotrebu donatora.

Životinja se fiksira u stroj i broji se broj žutih tijela u svakom jajniku. Perinealno područje se opere sapunastom vodom, dezinficira 70% alkoholom. Premedikacija se provodi intramuskularnom injekcijom 0,7 ml rampoona, 4 ml kombelena ili 4 ml 0,1% atropina i epiduralnom injekcijom 5-10 ml 2% otopine novokaina između zadnjeg sakralnog i prvog kaudalnog kralješka. Nakon 10-15 minuta, rep se odvodi u stranu, fiksira zavojem; unutarnja površina vagine se navodnjava 2% otopinom diocida. Temeljito operite ruke sapunom i četkom, tretirajte je otopinom amonijaka i obrišite 5% otopinom joda. Uzmu skalpel u ruku, stegnu ga između prstiju skupljenih u konus i uvedu u rodnicu. S jedne strane vrata napravi se dorzalni rez forniksa rodnice u dužini od 2-3 cm, izvadi se skalpel iz rodnice, kroz rez u trbušnu šupljinu uvuku najprije dva prsta, zatim ostatak pa cijela ruka naizmjenično. . Posebno pripremljena tupa igla promjera 1 - 2 mm se probuši u blizini bifurkacije roga maternice, povezanog s jajnikom koji sadrži žuta tijela. Kroz nastalu rupu umetne se kraj katetera s balonom kako bi se isprali embriji. U kanister se ubrizgava 7-10 cm 3 zraka, špricom se ulijeva tekućina za ispiranje temperature 37°C u rog maternice i usisava natrag. Vrijeme pranja - 25-30 minuta; u ovom slučaju moguće je prikupiti oko 70% embrija.

Za transvaginalno vađenje embrija također se može koristiti poseban instrument koji se sastoji od metalne kanile s dvije bočne rupe spojene na lateks Folly kateter. staviti na srednji prst instrumentalni prsten i uvucite ruku kroz vaginalni rez u trbušnu šupljinu. Dospijevaju do donje trećine roga maternice, umetnu kanilu u njen lumen i isperu se. Tijekom pranja prst se skida s prstena, vrh roga se podiže i prstima se stisne utero-tubalni spoj. Rana na stijenci rodnice zacjeljuje otprilike 4 dana nakon operacije.

Životinja je fiksirana u stroju. Na forniksu rodnice napravi se uzdužni rez i kroz njega se pažljivo uvedu kastracijske štrcaljke ili efemenator. Rog maternice koji se uklanja zajedno s jajovodom, mezenterijem i jajnikom hvata se rukom i stavlja u otvoreni uređaj. Nakon provjere pravilnog položaja genitalnog područja koje treba ukloniti, zatvoriti efeminator blagim pritiskom ruke i brzo zavrnuti krilni dio matice, odvojiti amputirani dio i izvaditi ga iz trbušne šupljine. Stegnite batrljak roga maternice hemostatskom pincetom. Na sličan način uklonite drugi rog maternice. Efemenator se ostavi zatvoren 5 minuta, zatim se ukloni zajedno s amputiranim tkivima. Mješavina antibiotika ubrizgava se u trbušnu šupljinu kroz vaginalni rez.

Amputirana tkiva se prenesu u laboratorij, pregledaju, broji se broj žutog tijela i neovuliranih folikula, isperu od strane jajovoda prema otvorenom kraju roga maternice, skupljajući tekućinu za ispiranje u sterilne Petrijeve zdjelice. Za pranje jednog roga troši se 20-60 ml, jajovoda - oko 10 ml medija.

Vađenje embrija iz genitalija zaklanih životinja je najjednostavnija metoda. U klaonici (fabrika za preradu mesa) zaklanim životinjama se oduzimaju spolni organi, dostavljaju u laboratorij, gdje se, ovisno o vremenu proteklom od osjemenjivanja, peru rogovi maternice ili jajovoda na gore opisani način. Ispiranje embrija mnogih zaklanih životinja je učinkovito ako nije prošlo više od 2-2,5 sata nakon klanja.

Kirurške metode su složene, dugotrajne, mogu se koristiti za jednu životinju najviše tri puta.

Za praktične uvjete (na stočarskim farmama) najprihvatljivija je metoda nekirurško vađenje embrija.

Prije pranja donorskih embrija, poželjno je držati 12 sati na dijeti gladovanja. Životinja se fiksira u aparat, radi niska epiduralna anestezija, rektum se oslobađa od izmeta. Odredite broj žutog tijela u svakom jajniku. Rep je zavijen, vezan za vrat životinje. Područje vanjskih spolnih organa i perineuma opere se toplom vodom i sapunom, osuši ubrusom i dezinficira 70% etilnim alkoholom ili aerosolom Septonex. Optimalno vrijeme za nekirurško vađenje embrija je sedmi-osmi dan nakon inseminacije, kada se on nalazi u prednjem i srednjem dijelu roga maternice, a maternica-jajovod je čvrsto zatvoren.

Pod kontrolom ruke u polietilenskoj rukavici smještenoj u rektumu, u cervikalni kanal uvodi se dvosmjerni urološki Folly kateter s umetnutim metalnim stiletom. Usmjerava se na jedan od rogova maternice, napreduje sve dok balon-manžeta ne bude iza bifurkacije, a kraj katetera ne dosegne vrh roga. Stilet je uklonjen. 15-20 cm 3 zraka ubrizgava se u balon-manžetu za fiksiranje katetera i ograničavanje šupljine za ispiranje. Zatim se na kateter pričvrsti štrcaljka, otvori slavina i pod umjerenim pritiskom ubrizga se 20-60 ml fiziološke tekućine u rog maternice (Dulbeccov fosfatni pufer s dodatkom 1% fetalnog seruma, ili goveđi serumski albumin). (4 mg / ml), ili medij TCM-199, kao i 0,06 mg / ml dihidrostreptomicin sulfata u 100 IU penicilina), s temperaturom od 37,3-38 ° C. Rog maternice se nježno masira kako bi se embriji odvojili od njegovih stijenki. Slavina se okrene, tekućina za pranje se ulije u sterilnu posudu. Šaržno pranje se ponavlja 4-7 puta, ukupna potrošnja fiziološke podloge po rogu je 200-500 ml. Pri ispiranju se uzima u obzir volumen otopine dobivene iz maternice, jer se s njegovim smanjenjem smanjuje broj opranih embrija. Većina embrija se nalazi u prva tri pranja. Po završetku zahvata kateter se prenosi u drugi rog odakle se na isti način uklanjaju embriji.

Francuska tvrtka IM B predložila je trokanalni kateter s fleksibilnom teleskopskom sondom s kanilom. Sonda se pohranjuje i transportira nesastavljena u zračno-parnoj formalinskoj komori (kutija od nehrđajućeg čelika ili plastika s tabletama u obliku pare). Nakon rada sonda i savitljive cijevi se peru destiliranom vodom, suše propuhivanjem zraka kroz savitljive spojne cijevi.

V.P. Belevich (1986) dizajnirao je jednokanalni kateter bez manšete koji omogućuje ekstrakciju oko 75% embrija od donora. F.I. Ostashko je zajedno s drugim znanstvenicima predložio uređaj za aseptično dobivanje embrija, njihovu pretragu, procjenu i pohranu. I. Kh. Khabibulin (1986.) opisao je poboljšanu metodu ispiranja embrija iz krava pomoću zatvorenog hidrostatskog sustava i četveroputnog ventila.

Nakon završetka ispiranja embrija, otopina antibiotika se ubrizgava u šupljinu maternice. Nakon 4-5 dana, prostaglandin F-2 alfa se ubrizgava u kravu donoricu kako bi se spriječila sljedeća faza ekscitacije spolnog ciklusa. Nekirurškom metodom dobiva se 42-50% embrija (više od pet punopravnih embrija po darivatelju).

Embriji se kod ovaca vade samo kirurški u općoj anesteziji ili u lokalnoj anesteziji laparotomijom uz bijelu liniju trbuha. Ovisno o primijenjenoj metodi, embriji se ispiraju iz jajovoda (do 3 dana) ili iz roga maternice (od 3 do 6 dana). Prema L. Rawsonu (1971.), iz jajovoda se mogu isprati gotovo svi embriji, a iz rogova maternice čak do 90%.

Embriji u ovaca ispiraju se kirurški, laparotomijom, histerektomijom, nakon klanja donora. U tom slučaju koristi se zvonolika kanila, plastični ili stakleni kateter s uvođenjem tekućine za ispiranje kroz jajovod, utero-tubarni spoj, vrh roga maternice i ispiranje prema cerviksu. Embriji se ispiraju i presađuju iz stadija nepodijeljene zigote u stadij blastociste, tj. 1-5 dana nakon osjemenjivanja.

Embriji kobila donora ispiraju se kirurški i nekirurški. Kirurški prijem embrija provodi se laparotomijom po bijeloj liniji. Ligatura se stavlja na ipsilateralni rog maternice i uvodi se kateter. Pomoću štrcaljke u jajovod se ubrizgava 30-50 ml medija, što omogućuje ispiranje 77% embrija 1-6 dana nakon inseminacije. Također je moguće ekstrahirati embrije 7-8 dana nakon ovulacije na nekirurški način, metodama koje se koriste u stočarstvu. Postoje izvješća o upotrebi produljenog Folly katetera (Imel K. et al., 1981.), a maternica se ispire otopinom Krabs-Ringera, Prakera, Tsyulbekka i drugih.

Tehnologija embrija. Najprije traže embrije i ocjenjuju njihovu kvalitetu. Tekućina za ispiranje s embrijima prikupljenim u stakleni cilindar prekriva se aluminijskom folijom, prenosi u sterilnu kutiju, gdje se taloži u termostatu na 37°C 30 minuta. Bolje je otopiti tekućinu za pranje u konusnim posudama opremljenim slavinama, lijevcima za odjeljivanje ili posudama s posebnim sitima za embrije. Temperatura u boksu treba biti 25-28°C. Ovdje se svakodnevno provodi mokro čišćenje, 1-2 sata prije rada s embrijima, površina instrumenata, opreme, zidova se briše sa 70% alkohola; uključuju germicidne lampe. Osoblje je dužno raditi u sterilnim mantilima, kapama i obući, koristiti čisto, sterilno posuđe i alat. Ruke prije rada tretiraju se tamponom navlaženim 70% alkoholom. Kako bi se izbjegla kontaminacija tekućine za pranje i embrija, prema francuskoj tehnologiji, sve manipulacije s embrijima provode se pod laminarnim protokom filtriranog zraka u posebnim ormarima, u kojima silazni tokovi zraka sprječavaju prodor mikroflore.

Pri radu s embrijima koriste se različiti mediji koji se unaprijed pripremaju (osmotski tlak otopina treba biti 300 min, pH 7,2-7,6). Najčešći od njih je Dulbeccov fosfatno puferirani medij, u 1 litru se dodaje 4 g goveđeg albumina neposredno prije upotrebe (može se zamijeniti goveđim ili ovčjim serumom inaktiviranim 20 minuta na 56°C, koji se dodaje na brzina 20% volumena medija), 1,0 g glukoze, 0,036 g natrijevog piruvata i 100 tisuća jedinica kalijeve soli benzilpenicilina. Isti medij se koristi za kratkotrajnu pohranu embrija.

Nakon taloženja tekućine za pranje uz pomoć sifona, njen gornji sloj se usisava. Donji sloj - sediment (50-100 ml) pažljivo se sipa u malim obrocima (po 20-30 ml) u Petrijeve zdjelice promjera 100 mm ili posudice s okruglim dnom čije je dno obloženo 1 x 1 cm. kvadrate radi praktičnosti i ispitati pod binokularnim povećalom ili stereoskopskim mikroskopom (MBS-9) pri povećanju od 15-25x. Otkriveni embriji se hvataju mikropipetom i stavljaju u Petrijevu zdjelicu promjera 40 mm s hranjivim medijem (Dulbeccova otopina ili medij TCM-199 s dodatkom embrionalnog seruma).

Pretraga može biti otežana zbog prisutnosti inkluzija (atipične stanice, sluz, krvni ugrušci). Kako bi se olakšao ovaj proces, Istraživački institut za stočarstvo šumske stepe i Polisja Ukrajinske SSR predložio je, nakon pregleda i ekstrakcije embrija, homogenizirati sedimentnu tekućinu rotirajući je u homogenizatoru brzinom od 3- 5 tisuća okretaja u minuti za 4-6 minuta. To omogućuje značajno smanjenje optičke gustoće ispiranja i otkrivanje oko 20% embrija tijekom druge pretrage.

Nakon što je potraga za embrijima završena, njihova se kvaliteta procjenjuje pomoću invertnog mikroskopa. U proučavanju embrija uzimaju se u obzir: podudarnost stupnja razvoja embrija s njegovom dobi, oblik embrija, stanje (cjelovitost) prozirne membrane, ujednačenost drobljenja, broj i veličina blastomera, stanje citoplazme, prozirnost perivitelinskog prostora. Kao što je ranije spomenuto, broj blastomera u embriju u razvoju udvostručuje se otprilike svaka 24 sata.Ako ih je, na primjer, 2. dana bilo 2, a zatim 3.-4. - 4-8, itd. 4-7. dana dosežu stadij morule, 7-8. - ranu blastocistu, 8.-9. - blastocistu, 9.-10. - kasnu blastocistu, 10.-11. - embrij izlazi iz prozirne šupljine. ljuska. Zbog određenog produljenja superovulacije i neistodobne oplodnje jajnih stanica, u tekućini za pranje mogu se naći embriji različite dobi.

Biološki potpuni embriji (stari 8 dana) imaju jasan sferni (pravilno sferni) oblik, promjer 120-200 mikrona, jasno izražen trofoblast i embrioblast, jednaku veličinu blastomera s gustim međustaničnim kompleksom, što određuje kompaktnost embrij. Embriji se smatraju neispravnim ako sadrže blastomere različitih veličina s nejasnim staničnim membranama i drugim znakovima degeneracije.

U tekućini za pranje, neoplođena jaja u stanju degeneracije, s naboranom, neujednačenom citoplazmom, kao i embriji nepravilnog oblika s kršenjem integriteta prozirne membrane, njezinim puknućima, delaminacijama, kompresijom šupljine, neravnomjernom fragmentacijom, poremećaj stanične komunikacije, može se naći i granulacija citoplazme.

Embriji koji oštro zaostaju za normalnim razvojem s izraženim znakovima asinkronije u fragmentaciji blastomera, njihovom degeneracijom nisu prikladni za transplantaciju, dok se embriji s neznatnim morfološkim promjenama smatraju uvjetno prikladnima.

Značajno veće promjene uočavaju se kod zamrznutih embrija; zamrzavanje i odmrzavanje ostavlja specifičan trag na građu embrija, pa njihova procjena može biti otežana. Nije uvijek moguće točno odrediti korisnost embrija starih 7-8 dana zbog njihove višestaničnosti. Degeneracija embrija počinje u fazi morule tijekom njihovog prolaska kroz jajovod, ali se morfološki to manifestira u kasnijim fazama, kada su u rogu maternice.

Greve (1980) predlaže procjenu embrija prema sljedećim pokazateljima (slika 12.7).

Riža. 12.7.

Životno sposobni embriji su embriji čiji stupanj razvoja odgovara njihovoj starosti, računato od dana lova. Takvi su embriji sferični bez znakova lize, bubrenja, vakuolizacije ili degeneracije pojedinih blastomera. Embriji ekstrahirani 6.-8. dana najčešće su u fazi kasne morule, blastocista u početnoj ili kasnoj fazi širenja blastocelija i, što je rjeđe, u fazi izležene blastociste. Najprikladniji su za transplantaciju u sinkroniziranih primatelja.

Retardirani (retardirani) embriji su embriji koji su u više različitih faza razvoja od očekivanih prema njihovoj dobi. Smatra se da su retardirani ili da potječu iz kasnije ovuliranih folikula. Kada se presade na sinkronizirane primatelje, imaju manje šanse za usađivanje i nastavak razvoja.

Malformirani (degenerirani) embriji su oni koje karakteriziraju rastrgane, natečene ili vakuolizirane blastomere ili lizirana citoplazma. Takvi se embriji ne koriste za transplantaciju.

Neoplođena jaja su homogena jaja bez prisustva blastomera i perivitelinskog prostora. Ponekad se nađe jedno polarno tijelo.

Wright (1984) klasificira embrije prema morfološke značajke u tri klase:

• 1) normalno;
• 2) s manjim odstupanjima;
• 3) s povećanim brojem degeneriranih stanica.

Elsden et al (1978) dijele embrije na četiri

ocjene: loše, srednje, dobro i odlično.

Istraživački institut za stočarstvo Šumske stepe i Polisije Ukrajine predložio je sustav od 5 točaka za procjenu embrija prema morfološkim značajkama; omogućuje diferencirani pristup procjeni, uzimajući u obzir stupanj razvoja embrija (morula i blastocista) (tablice 12.2, 12.3).

Tablica 12.2

Ljestvica ocjenjivanja morule (rana morula - MO 1, kasna - MO 2)

Tablica 12.3

Skala ocjenjivanja blastociste (rana blastocista - BL 1, kasna - BL 2)

Ponekad neiskusni stručnjaci mogu zbuniti kompaktnu morulu (6-7 dana razvoja) s neoplođenim jajetom.

Glavna razlika između embrija i jajeta je prisutnost blastomera, stanjivanje prozirne membrane do 25 mikrona i blago povećani promjer morule.

Korištenje embrija izvrsne i dobre kvalitete daje dvostruko povećanje njihovog usađivanja. U dvojbenim slučajevima, oprane stanice mogu se staviti u malu količinu hranjivog medija na 30-40 minuta (ili 12-24 sata) u termostatu za dijagnostički uzgoj na temperaturi od 37°C. Embriji nezadovoljavajuće kvalitete se odbacuju.

Predložene su i druge metode za procjenu održivosti embrija - pomoću funkcionalnih testova, posebnih boja, in vitro i in vivo uzgoja (u jajovodima kunića), mikrometrije, elektronske mikroskopije itd.

Skladištenje embrija. Od vađenja embrija do transplantacije njihovim primateljima prođe 2-3 sata; tijekom tog vremena nakon evaluacije mora se održavati održivost embrija. Da bi se to postiglo, isperu se u Dulbeccovom fosfatnom puferu s dodatkom antibiotika, usisaju u mikrotrake zajedno s malom količinom medija i pohrane na sobnoj temperaturi ili stave u 0,5 ml medija na satno staklo. Biološki kompletni embriji se prenose u sterilnu Petrijevu zdjelicu čije je dno obloženo vlažnim filter papirom i stavljaju u termostat (temperatura 37°C).

Potreba za očuvanjem vitalnosti embrija na dulje vrijeme javlja se u nedostatku dovoljnog broja odgovarajućih primatelja, upitne kvalitete opranih embrija, potrebe za stvaranjem banke embrija.

s ciljem provedbe dugoročnih programa razmjene genskog fonda između zemalja i kontinenata na komercijalnoj osnovi.

Predloženo je nekoliko metoda pohranjivanja embrija:

• 1) kratkotrajno izvan tijela;
• 2) kratkotrajno u tijelu;
• 3) dugotrajno u ukapljenim plinovima (krioprezervacija).

Kratkotrajno skladištenje i uzgoj zametaka. Pri razvoju metode kratkotrajne pohrane embrija uzeto je u obzir iskustvo uzgoja stanica i tkiva.

Kratkotrajno skladištenje embrija izvan tijela provodi se na sljedeći način. Stavljaju se u ampule ili PVC slamke za osjemenjivanje u Dulbeccovoj, Ham-10, B2-Menezoovoj, modificiranoj Tyrodeovoj ili Krebs-Ringerovoj otopini. Najprikladniji medij pokazao se medij TCM-199 s dodatkom 20% seruma krvi fetusa ili jelena. Okoliš mora biti obogaćen ugljičnim dioksidom. Embriji s podlogom usisavaju se u slamke na način da se uz rubove stvore zračni prostori duljine 1-1,5 cm.Krajevi slamke se zatvore čeličnim kuglicama ili polietilenskim cjevčicama i inkubiraju na 37°C u termostatu. . Biološki potpuni embriji mogu se uzgajati na 37°C pod slojem vazelinskog ulja: Pasteurovom pipetom embriji se prenose u sterilnu epruvetu koja sadrži 0,5-1 ml medija, sterilno vazelinsko ulje se slojevito nanosi, pokriva tankom folijom i staviti u termostat. Također možete prenijeti embrije u 0,2 ml medija na satnom staklu, prekriti slojem (25 kapi) vazelinskog ulja, staviti u Petrijevu zdjelicu, koja se nalazi na eksikatoru, kroz koji prolazi mokra plinska smjesa (90% dušik). 5% kisika i 5% ugljičnog dioksida).

biološki održivih embrija optimalni uvjeti kulture ostaju sposobne za život 24-48 sati.Na kraju uzgoja embriji se procjenjuju pod mikroskopom, oni sposobni za život koriste se za transplantaciju.

U ranim fazama razvoja embriji se mogu čuvati na niskim pozitivnim temperaturama, što uzrokuje obrnutu inhibiciju metaboličkih procesa. Postoje izvješća da temperatura od 10°C omogućuje produljenje održivosti embrija do 5-6 dana. Najosjetljiviji na hlađenje su embriji svinja, čija vitalnost naglo opada na 10-15°C. Embriji goveda također su osjetljivi na hlađenje, osobito u fazi 8-16 blastomera, iako dobro podnose hlađenje u stadijima morule i blastociste.

Kratkotrajno skladištenje i uzgoj embrija (3-5 dana) u tijelu (jajovodi kunića) na tjelesnoj temperaturi omogućuje njihov interkontinentalni transport s naknadnom retransplantacijom. Utvrđeno je da se zameci ovaca kirurški presađeni u jajovode kunića razvijaju normalno do izlijeganja iz prozirne ljuske ili implantacije. Vjeruje se da se goveđi embriji u fazi osam blastomera i morule također mogu uzgajati do 72-96 sati in vitro, a zatim do 7 dana u vezanim jajovodima kunića. Nedostatak metode je povećan rizik od ozljeda zbog povećanja broja ispiranja i transplantacija.

Krioprezervacija (zamrzavanje) embrija. Godine 1953. O. Smith je prvi put zamrznuo zečje embrije. Godine 1971. - 1972. god u inozemstvu su započeti namjenski pokusi zamrzavanja životinjskih i ljudskih zametaka (R. Whittingham, D. Wilmuth, L. E. A. Rawson, Wiledsen i dr.). U SSSR-u je prvi put krioprezervacija embrija provedena 1979. godine.

Kod goveda su za zamrzavanje najprikladniji embriji od 7-8 dana odlične i dobre kakvoće, tj. u stadiju blastociste (60-150 blastomera diferenciranih u embrioblast i trofoblast) Embriji ovaca i koza zamrznuti su u stadiju morule i blastociste 5-8. dana, embriji svinja - 4-5. Zamrzavanje najbolje podnose svježi embriji.

Uputama za transplantaciju goveđih embrija (1987.) predviđeno je zamrzavanje pomoću domaćeg automatskog softverskog uređaja UOP-1 koji se sastoji od elektroničke jedinice, komore i spremnika s tekućim dušikom.

Odabrani embriji su zasićeni krioprotektorom - glicerolom ili dimetil sulfoksidom (DMSO). Krioprotektor se unosi u medij kako bi se spriječila kristalizacija vode. Korištene tehnologije zamrzavanja omogućuju sekvencijalni prijenos embrija u otopine krioprotektora rastućih koncentracija (glicerol - 0,25; 0,50; 0,75; 1,0 M; DMSO - 0,35; 0,50; 1,0 i 1,5 M ) pripremljene na Dulbeccovom fosfatnom puferu s dodatkom 20 % krvnog seruma i penicilina. U svakoj otopini, embriji se drže 5-10, au posljednjem - 15-20 minuta. Embriji izvrsne kvalitete mogu se odmah staviti na 30 minuta u 1,0 M glicerol ili 1,5 M DMSO.

V.A. Yablonsky (1988) ističe: ako se glicerin koristi kao krioprotektor, tada se embriji najprije stavljaju na 10 minuta u 3,3% otopinu glicerola, zatim na 14 minuta u 6,6% i na 30 minuta u 20% th. U sredini razdoblja izlaganja, embriji se ispiru 5 minuta nizom usisavanja u Pasteurovu pipetu i otpuštaju. Ove manipulacije s embrijima provode se na satnim staklima postavljenim u Petrijeve zdjelice.

Nakon zasićenja podloge s embrijima krioprotektorom, ona se prenosi (1-4 embrija svaki s 0,3-0,4 ml podloge s krioprotektorom) u epruvete, ampule ili slamke, koje se zatvaraju (epruvete se prekrivaju folijom, ampule se zatvaraju). , slamka se s oba kraja zatvori plastičnim čepovima) i zamrzava na kat ili dva kata, polako ili brzo, stavljanjem u zamrzivač programa. Embriji se stavljaju u slamke sljedećim redoslijedom: medij-zrak-medij i embrij-zrak-okolina.

Polagano zamrzavanje embrija provodi se na sljedeći način. Embriji se hlade s 20 na 6-7°C brzinom od GS/min. Nakon postizanja unaprijed određene temperature (4-5°C prije početka stvaranja leda), izaziva se umjetna kristalizacija medija kako bi se spriječile osmotske promjene. To se postiže tako da se u otopinu ubace zrnca leda, kristalin srebrnog jodida ili neki prehlađeni predmet (primjerice, pinceta ili pipeta ohlađena u tekućem dušiku s kapljicom zamrznutog medija na kraju, probijanjem folije, brzim dodirivanjem površine tekućine ili stijenke epruvete ili ampule u zoni gornjeg ruba stupca medija). Daljnje hlađenje se provodi brzinom od 0,3°C/min od -35 do -36°C, nakon čega se brzo uranja u tekući dušik.

Polako zamrznuti embriji se prije upotrebe odmrzavaju u alkoholnoj kupelji - u staklenoj cilindričnoj tikvici na temperaturi od -50°C u koju se stavljaju epruvete ili ampule sa embrijima. Odmrzavanje se provodi na sobnoj temperaturi brzinom od 4°C/min do -10°C, nakon čega se embriji prenose na 5 minuta u vodenu kupelj na temperaturi od 20°C. Na kraju, embriji se prenose u medij koji se koristi za uklanjanje krioprotektora.

Tehnologija za brzo zamrzavanje embrija predložena u Francuskoj temelji se na korištenju medija (Dulbeccov fosfatni pufer + krvni serum) koji sadrži glicerol i saharozu. To je kako slijedi. 0,5 M otopina saharoze, zrak, 1,0 M otopina glicerola s embrijem, zrak, 0,5 M otopina saharoze usisavaju se uzastopno u slamku. Embriji se hlade od 20°C do -7°C brzinom od GS/min, stimulira se umjetna kristalizacija, nakon čega se hlade brzinom od 0,3°C/min od -35 do -36°C, a zatim brzinom od 0,1 °C/min do -60 °C i prebačen u tekući dušik.

Brzo smrznute embrije (prije upotrebe) odmrzavajte u vodenoj kupelji na 37°C 30 sekundi pri brzini od 3°C/min ili 10-12 sekundi. Da biste to učinili, slamka (epruveta, ampula) brzo se izvadi iz spremnika uronjenog u tekući dušik i spusti u termostat za vodu.

Odmrznuti embriji se zajedno s podlogom prenose iz epruvete ili ampule na satno staklo radi morfološke procjene. Ako su embriji normalne kvalitete, isperu se od glicerina ili DMSO-a, uzastopno stavljaju u prethodno pripremljene otopine krioprotektora opadajuće koncentracije. U završnoj fazi, tri puta se operu u mediju bez glicerola i drže u njemu 10-20 minuta. Na kraju pranja, embriji se ponovno procjenjuju radi održivosti, a oni koji se smatraju prikladnima stavljaju se u instrument za transplantaciju.

Nakon odmrzavanja slamka se protrese 3-4 puta da se uklone mjehurići zraka i promiješa njezin sadržaj, nakon čega se ostavi 15 minuta u okomitom položaju. Budalom kroz zid slamke pronalazi se embrij i procjenjuje se njegova održivost.

Istraživački institut za stočarstvo šumske stepe i Polisja Ukrajinske SSR predložio je sljedeću tehnologiju očuvanja: embriji svježe oprani u fazi morule prenose se 10 minuta u 0,5 M otopinu DMSO na PBS mediju, zatim 20 minuta u istom mediju s 1,3 M DMSO, nakon toga se 3-4 embrija prebace u epruvetu koja sadrži 0,5 ml FBS i 1 M DMSO. Cijev se zatvori i stavi u hladnjak i zamrzivač. Za veću praktičnost, embriji se mogu staviti u posebne mini-slamke, u koje se prvo skupi "/ 4 volumena medija s embrijem, zatim mjehurić zraka i "/ 4 volumena FBS medija. Slamka se zatim zatvori i prebaci u zamrzivač.

Zamrzavanje se provodi prema sljedećem programu: od 22-25 do 6°C hladi se brzinom od GS/min, kristalizacija medija se umjetno pobuđuje, zamrzava se od -6 do -40°C brzinom od 0,3°C/min, a od -40 do -60°C - brzinom od 0,GS/min, nakon čega se epruvete s embrijima ohlađenim na -60°C prenose u tekući dušik.

Brojne zemlje razvile su vlastite tehnologije za zamrzavanje i odmrzavanje embrija - dvostupanjsko, jednostupanjsko, u slamkama, slamčice koje sadrže dva medija istovremeno - za zamrzavanje (Dulbeccova tekućina s 10% glicerina i embrija u njoj) i medij za odmrzavanje (Dyulbeccova tekućina, koja sadrži 20% fetalnog seruma ili 4 g/l goveđeg albumina i 0,5 M otopine saharoze). Nakon odmrzavanja podloga se promiješa, slamka se drži 10-20 minuta na sobnoj temperaturi, a embrij se presađuje u primatelj.

Svi radovi na pripremi podloge i zamrzavanju embrija provode se u skladu sa zahtjevima asepse.

Smrznuti embriji pohranjuju se u Dewarovu posudu napunjenu tekućim dušikom (na primjer, marke Kharkov 34B), u koju se stavljaju u posebne kanistre.

Nakon zamrzavanja i odmrzavanja, 44-63% embrija ostaje održivo.

Sinkronizacija faze uzbuđenja spolnog ciklusa (lov). Za

transplantacije svježe dobivenih embrija, potrebno je osigurati manifestaciju estrusa u donora i primatelja. Bit sinkronizacije svodi se na korištenje zasebnih tehnika ili hormonskih sredstava za regulaciju spolne funkcije kod primatelja i darivatelja kako bi se kod njih potaklo istodobno insceniranje seksualnog uzbuđenja u unaprijed određeno vrijeme.

U velikim stadima svaki dan postoji dovoljan broj životinja u stanju lova. No, teško je predvidjeti u koliko će ženki i kada doći. Stoga se u praktičnim uvjetima najčešće pribjegava umjetnoj stimulaciji faze pobuđivanja spolnog ciklusa i njegove sinkronizacije kod primatelja. U tu svrhu najčešće se koriste hormonske metode koje se temelje na poticanju ili produljenju funkcije žutog tijela ili, obrnuto, inhibiciji njegove funkcije.

U prvom slučaju, injekcije progesterona ili razne metode uvođenje njegovih sintetskih analoga - gestagena (klormadinon acetat ili CAP, medroksiprogesteron ili MPA, melengestrol acetat ili MGA, megestrol acetat, amol, diamol 1C1-79939, 1C1-80996 itd.), koji blokiraju gonadotropnu funkciju hipofize, ne remeteći sintezu FSH i LH, održavajući postojanje žutog tijela i visoku razinu progesterona u krvi. Istodobno, folikuli sazrijevaju samo do druge faze, dok je početak estrusa, estrusa, opće reakcije i ovulacije inhibiran. Prestanak davanja progesterona ili gestagena životinjama praćen je intenzivnim oslobađanjem hormona hipofize i pojavom u ženki faze ekscitacije spolnog ciklusa.

Međutim, vrijeme početka faze uzbuđenja spolnog ciklusa kod životinja varira - od 2 do 6 dana, oplodnja jaja se smanjuje. Stoga je sinkronizacija spolne funkcije ovom metodom od ograničene važnosti u tehnologiji transplantacije embrija. Istisnut je sinkronizacijom spolnog ciklusa uz pomoć prostaglandina skupine F2 i njegovih sintetskih analoga - prostina (SAD), kloprostenola, estrumata (Velika Britanija), estrofana (Čehoslovačka), enzaprosta (Mađarska) itd., koji , s izraženim luteolitičkim i uterotoničkim učinkom, uzrokuju morfološku i funkcionalnu regresiju žutog tijela i na taj način kontroliraju trajanje spolnog ciklusa.

Razvijeno je nekoliko shema za sinkronizaciju faze pobude spolnog ciklusa (lov) kod krava (junica). Jedna od njih uključuje dvije injekcije estrofana u razmaku od 11 dana. ponovno

estrofan se daje 2. dan nakon injekcije davatelju PMSG-a ili 3. dan nakon početka liječenja FSH-P. Kada se koristi bilo koja od shema, primatelj se obogaćuje: trivitamin ili trivit se ubrizgava intramuskularno u dozi od 15 ml 1., 10-12. i 21.-23. dana.

Životinje donori se prate na znakove estrusa i spolnog uzbuđenja i tri puta se testiraju na toplinu. Primatelj se dodjeljuje donatoru u slučaju potpunog podudaranja njihovih datuma za početak lova. Na dan embriotransfera rektalnim palpiranjem jajnika donora i primatelja uvjerava se da postoji funkcionalno aktivno žuto tijelo.

Sinkronizaciju lova ovaca i koza trenutno provodi:

• 1) korištenje gestagena u obliku potkožnih implantata ili vaginalnih ležarija (fino porozne poliuretanske spužve impregnirane progestogenom);
• 2) dvostrukom injekcijom prostaglandina skupine F2 u razmaku od 9-10 dana;
• 3) formiranjem skupina primatelja od ovaca koje su pokazale lov na isti dan kao i donori.

Sinkronizacija topline kod krmača provodi se primjenom gestagena nakon odbijanja prasadi ili davanjem gonadotropina u maternicu u laktaciji. Istovremeno se mladim krmačama ubrizgava 900-1800 mg PMSG, a nakon 2 dana 500 IU hCG; cikličnim krmačama daju se hormonski pripravci prema jednoj od sljedećih shema:

• PMSG 16. dan i hCG 19. dan ciklusa;
• metalibur 20. dan, PMSG 21. dan i HCG 23. dan;
• progestin trenbolon od 19. do 21. dana, PMSG 6 sati nakon

posljednje davanje progestagena i nakon 78 sati - hCG;

• od 14. do 20. dana oksolven, nakon 24 sata surfogon (400 IU GSFA,
• 200 IU hCG) i 70 sati nakon zadnje primjene progestagena -

Starim krmačama se ubrizgava PMSG na dan odbijanja prasadi ili nakon 1 dana i nakon 2-3 dana - hCG. Možete započeti stimulaciju i 18. dan nakon odbijanja prasadi.

Lov se kod kobila sinkronizira individualnim davanjem s hranom gestagena altrenogesta u dozi od 0,044 mg/kg f.m. unutar 15 dana ili primjena analoga prostaglandina fluprostenola (equimat) u dozi od 25 M/kg s razmakom od 14 dana. Za poticanje ovulacije kobilama se dodatno ubrizgava 2000-3000 IU hCG.

Preplantacija (transplantacija) embrija. Sve do sredine 1970-ih. prijenos embrija proveden je uglavnom kirurškom metodom, a zatim se krevet počeo prebacivati ​​na nekirurški. Svaki od njih ima pozitivne i negativne strane.

Transplantacija embrija u goveda. Kirurška metoda embriotransfera je abdominalna operacija, koju treba izvesti u operacijskoj sali opremljenoj univerzalnim fiksatorom ili operacijskim stolom. Pristup maternici ostvaruje se laparotomijom uz bijelu liniju abdomena u općoj anesteziji na životinji koja leži u dorzalnom položaju ili u području udisaja (gladna jama) u lokalnoj anesteziji. Priprema životinje za operaciju i kirurški pristup maternici isti su kao i kod pranja maternice. Transfer embrija kroz rez na trbušnoj stijenci u području desne ili lijeve gladne jame puno je jednostavniji i manje naporan.

Kao instrument za prijenos embrija može se koristiti modificirana Pasteurova pipeta s ljevkastim nastavkom na kraju kapilare i hermetičkom gumenom kapicom na suprotnom kraju. Prvo se u pipetu uvuče stupac Dulbeccove podloge (1,5-2 cm), zatim isti stupac zraka, nakon čega se usisava embrij s podlogom, te opet stupac zraka i stupac podloge. Na pipetu se stavi sterilni polietilenski poklopac ili pokrije sterilnim ubrusom i drži u kutiji u vodoravnom položaju do transplantacije.

Nakon otvaranja pristupa unutarnjim organima, rog maternice, uz jajnik s funkcionalnim žutim tijelom, povlači se do reza, stijenka se probuši krajem kapilarne cijevi (ili tupom iglom promjera 1–1,5 cm, ili mliječnim kateterom, nakon čega slijedi uvođenje pipete u kapilarni otvor) oko 5 cm od tubarnog spoja maternice i istiskuje sadržaj pipete u lumen roga maternice, na njezinu sluznicu . U ovom slučaju ne možete dirati zidove maternice; treba izbjegavati oštećenje krvnih žila i krvarenje.

Ako je potrebno, drugi embrij se također prenosi u drugi rog maternice. Nakon završetka transplantacije provjeravaju je li maternica zauzela svoj izvorni položaj i ubrizgavaju u trbušnu šupljinu 250 ml fiziološke otopine s antibioticima (do 500 tisuća jedinica penicilina i streptomicina u 50 ml otopine novokaina). Stavlja se trokatni šav i ljepljivi zavoj, primatelj se ostavlja na promatranju dva tjedna.

Nakon kirurške transplantacije, 52-90% (oko 60% u prosjeku) krava ostane steono. S obzirom na visoku učinkovitost kirurškog embriotransfera, mnogi centri u SAD-u, Kanadi i Australiji uglavnom koriste ovu metodu. Međutim, treba imati na umu da ozljede zadobivene životinji uslijed resekcije mišića, nemogućnost višekratne uporabe životinje i složenost same operacije koče široku primjenu kirurške metode.

MI. Prokofjev, V.Ja. Yarnykh (1986) predložio je metodu i uređaj za prijenos embrija kroz punkciju stijenke zdjelice u pozadini niske epiduralne anestezije. Punkcija roga i uvođenje embrija kontrolira se rukom kroz rektum.

Sugi (1965.) konstruirao je instrument kojim je moguće uvesti embrije u maternicu kroz otvor na forniksu rodnice, zaobilazeći cervikalni kanal.

Želja za pojednostavljenjem tehnike prijenosa embrija dovela je do razvoja nekirurške metode koja uključuje prijenos embrija u rog maternice kroz cervikalni kanal, tj. prema principu umjetne oplodnje. Prvi pokusi nekirurškog prijenosa embrija provedeni su ranih 1960-ih. Predloženo je nekoliko modifikacija nekirurške metode prijenosa embrija. Transplantacija embrija primateljima provodi se 7-8 dana nakon završetka lova.

Pri razvoju tehnologije za nekirurški prijenos embrija uzete su u obzir sljedeće značajke. Prvo, do trenutka transplantacije, cervikalni kanal primatelja je čvrsto zatvoren, osjetljivost receptora je povećana, u vezi s tim, kao odgovor na mehaničko otvaranje cervikalnog kanala, aktivira se kontraktilna funkcija miometrija. , što može dovesti do izbacivanja embrija. Drugo, u lutealnoj fazi spolnog ciklusa, endometrij karakterizira povećana osjetljivost na mikrobni faktor. Treće, moguće je oštećenje krvnih žila i ulazak krvi u šupljinu rogova maternice, što ima embriotoksični učinak.

Prije presađivanja embrij primatelja fiksira se u stroj, rep se bandaži i veže za vrat životinje, vulva i međica se operu toplom vodom i sapunom, dezinficiraju 2%-tnom otopinom diocida ili 70%-tnim etilnim alkoholom, u niskoj sakralnoj epiduralnoj anesteziji provodi se 2% otopina novokaina (5 ml), a visoko ekscitabilnim životinjama ubrizgava se i relaksant mišića kombelen (0,5 ml). Kako bi se blokirali receptori maternice i spriječilo odbacivanje embrija, predlaže se intramuskularna uporaba lijeka hanegif.

Instrumenti koji se trenutno koriste sastoje se uglavnom od metalnog katetera, duge kapilarne cijevi, ispred koje se nalazi nastavak za postavljanje embrija u minimalni volumen medija. Kateter se uvodi u rog maternice uz stalnu kontrolu ruke kroz rektum (kao kod cervikalne inseminacije s rektalnom fiksacijom vrata maternice) i embrij se istiskuje iz nastavka na sluznicu maternice.

Nekirurški prijenos embrija može se izvesti pomoću modificiranog metalnog Kassu katetera (Sl. 12.8), koji se sastoji od cjevčice, potiskivača i navojnog vrha. Uređaj se sterilizira kuhanjem 30 minuta, ostavi da se osuši i drži u stolnoj baktericidnoj komori s uključenom lampom do početka prijenosa embrija. Zahvaljujući određenoj fleksibilnosti, instrument omogućuje umetanje embrija u srednji dio roga maternice. Rasbeck je modificirao instrument tako da se može umetnuti u bilo koji dio roga maternice.

Riža. 12.8.

Embrij se usisava u sterilnu slamku sljedećim redoslijedom: medij, mjehurić zraka, medij s embrijem, mjehurić zraka, medij, plastični čep. Napunjena slamka se stavlja u vrh katetera, koji se privija na cijev. Uređaj spreman za uporabu prenosi se tehničaru za embriotransfer ili se na kratko vrijeme stavlja u termostat sa konstantnom temperaturom od 37°C.

Pripremljeni kateter Cass s napunjenom slamkom za prijenos embrija uvodi se u vaginu primateljice, zatim se pod kontrolom ruke u rektumu provlači kroz cervikalni kanal do sredine roga maternice na strani jajnika s žuto tijelo. Nakon što se uvjerite da je naprava pravilno postavljena, sadržaj slamke se polako potiskuje u lumen roga maternice. Nakon toga, kateter se pažljivo uklanja i prenosi na obradu.

Predloženi uređaj za nekirurški prijenos embrija, koji je razvio VIZh, razlikuje se po sljedećem značajka dizajna: kateter duljine 55 cm, promjera 3 mm prolazi kroz metalnu cijev duljine 45 cm i promjera 4,5 mm s ljevkastim nastavkom na kraju, koji je adapterom spojen na mikrošpricu. Završni dio plastičnog (uretralnog) katetera puni se embrijem u prihvaćenom nizu (FBS okolina - zrak - okolina s embrijem - zrak - FBS okolina). Neposredno prije uvođenja u genitalni trakt uređaj se zatvara sanitarnom navlakom od polietilenske folije. Sterilizirajte instrument kao u prethodnom slučaju, prekrijte silikon s pripravkom. Ako je potrebno prenijeti embrij na drugu farmu, topli (37°C) napunjeni kateter pažljivo se zamota, stavi u izolirani spremnik (ili u umjetnu vaginu napunjenu vodom) i transportira u vodoravnom položaju, izbjegavajući iznenadne udarce. i nagiba. Rezervne slamke s embrijima mogu se transportirati u istom spremniku na 37°C.

Transplantacija embrija provodi se na sljedeći način: metalna cijev se desnom rukom uvodi kroz genitalni otvor duž gornjeg forniksa rodnice do vrata maternice, uklanja se zaštitni omotač; pod kontrolom desne ruke umetnute u rektum, plastični kateter se usmjerava kroz cervikalni kanal do vrha roga, s čije strane se u jajniku nalazi žuto tijelo; blagim pritiskom klipa štrcaljke istiskuje se embrij koji se nalazi do kraja katetera zajedno s hranjivim medijem.

Isto tako, moguće je uvesti kateter u drugi rog maternice i provesti tzv. bilateralni (bilateralni) prijenos embrija, iako je njihova preživljenost u kontralateralnom rogu nešto manja. Ruku treba izvaditi iz rektuma tek nakon završetka transplantacije.

Ako se prijenos embrija provodi pomoću dvokanalnog uređaja koji je razvio VIZh, tada se nakon primjene prvog embrija iz genitalija uklanja samo plastični kateter, a metalna cijev koja ostaje u grliću maternice usmjerava se na drugu maternicu. rog. Nakon umetanja drugog napunjenog katetera u njega, on se pomakne blizu vrha roga i izvrši se još jedna aplikacija embrija. Ako se prijenos embrija provodi pomoću teleskopskog katetera francuske tvrtke IM V, tada se na njegovo metalno tijelo stavlja plastični poklopac koji se učvršćuje podloškom. Klizna metalna cijev koja se nalazi unutar katetera gurne se prema naprijed, na nju se spoji sonda (aspibrion) ispunjena medijem s zametkom i povuče unutar katetera dok se kanila ne zaustavi. Na vrh se stavlja higijenska navlaka i instrument se uvodi duž gornjeg forniksa vagine do vrata maternice. Rektalno se usmjerava na ušće cerviksa, probuši se poklopac i lagano masirajući cerviks kateter se kroz cervikalni kanal uvodi u šupljinu maternice sve dok se njegov ipsilateralni rog ne savije. Metalnom cjevčicom aspibrion se izvlači iz katetera, dovodi do točke najbliže istmusu, a embrij se pomoću metalnog klipa gura u rog maternice.

Uspjeh transplantacije embrija u velikoj je mjeri određen poštivanjem pravila asepse i antisepse, sprječavanjem traume genitalija, vještinom tehničara i zdravljem primatelja.

Životinje-primatelji nakon transplantacije embrija imaju punopravno hranjenje, svakodnevno aktivno vježbanje. Ne preporučuje se cijepljenje, regrupiranje ili izlaganje primatelja drugim stresnim utjecajima unutar 2 mjeseca nakon transplantacije.

Dijagnostika trudnoće provodi se u tri faze. U prvoj fazi provodi se refleksološka studija (sondom) 7-12 dana nakon transplantacije. Na 14-18 dan trudnoće dijagnosticira se hormonska metoda - prema razini progesterona u krvi ili mlijeku (pouzdanost - oko 85%). 2 mjeseca nakon transplantacije trudnoća se potvrđuje rektalnim pregledom. Konačno, učinkovitost transplantacije procjenjuje se stvarnim teljenjem.

Uz nekiruršku metodu transplantacije, stopa preživljavanja embrija je 40-50% ili više.

Transplantacija embrija drugih životinja. Transfer zametaka u ovaca provodi se samo kirurški u općoj ili lokalnoj anesteziji laparotomijom uz bijelu liniju trbuha. Godine 1978. dogodila se prva međunarodna razmjena zamrznutih ovčjih zametaka između Engleske i Poljske. U ljeto 1979. proveden je poljsko-bugarski pokus transplantacije zamrznutih embrija koji su oko godinu dana pohranjeni u tekućem dušiku i prevezeni zrakoplovom iz Krakowa u Sofiju. Najbolji rezultati dobiven presađivanjem embrija u fazi 8-16 blastomera.

Transplantacija embrija u svinja izvodi se kirurški, iako su C. Polju i B. Bey (1969) postigli gravidnost kod jedne od 32 krmače nakon nekirurške transplantacije. Prijenos 12-16 embrija jednom primatelju smatra se optimalnim. Stopa preživljavanja embrija do 5 dana nakon lova je 60%, kasnije se naglo smanjuje (Prokofiev M.I., 1983). Razvijena je metoda transplantacije laparoskopijom, kojom se silikonizirani kateter promjera 1,22 mm uvodi kroz jajovod u rog maternice. Budući da svinje doživljavaju unutarnju migraciju embrija, mogu se presaditi samo u jedan rog maternice. Ako se prenese manje od četiri embrija, trudnoća nije sačuvana.

U kobila se kirurški prijenos embrija provodi laparotomijom uz bijelu liniju trbuha 1-3. dana nakon ovulacije. Pomoću Pasteurove pipete embrij se uvodi u maloj količini medija u jajovod. Embriji stari 4-6 dana presađuju se u vrh roga maternice (učinkovitost 53-60%). Veličina i struktura cerviksa u kobila olakšava umetanje katetera za nekirurško vađenje i transplantaciju embrija. Prijenos embrija u kobila može se obaviti pomoću pipete od 55 cm koja se koristi za umjetno osjemenjivanje. Usađivanje embrija raste s povećanjem razdoblja od ovulacije do transplantacije. Embriji kobila ostaju sposobni za život u jajovodima kunića, uključujući i tijekom njihovog prijevoza.

Širenje metode u uzgoju konja je ograničeno zbog činjenice da je, prvo, teško izazvati superovulaciju kod kobila uz pomoć egzogenih gonadotropina, stoga se povećanje broja potomaka od vrijednih kobila može postići višekratnim ponavljanjem. dobivanje pojedinačnih embrija na nekirurški način i, drugo, Udruga za registraciju čistokrvnih konja ne priznaje potomke dobivene umjetnom oplodnjom ili embriotransferom.

Transplantacija je metoda ubrzanog razmnožavanja visokoproduktivnih životinja dobivanjem i prijenosom jednog ili više embrija s visokovrijednih životinja (donora) na manje vrijedne životinje (primatelja). Korištenje transplantacije omogućuje dobivanje desetaka puta više potomaka od jedne genetski vrijedne ženke. Najprihvatljivije za transplantaciju embrija su neplodne životinjske vrste: krave, konji, ovce. U svjetskoj stočarskoj praksi metoda transplantacije embrija se u većoj mjeri koristi u mliječnom i tovnom govedarstvu. Korištenjem primatelja za transplantaciju embrija dobivenih od jedne odabrane krave donorice moguće je desetke i stotine puta povećati broj njezinog potomstva. Teoretski, od genetski izvrsne krave donorice može se dobiti najmanje 500 teladi u cijelom njenom životu. Ogroman napredak postignut je u transplantaciji goveđih embrija, čime je ova metoda zauzela čvrsto mjesto u suvremenim uzgojnim programima. Metoda transplantacije, zajedno s umjetnim osjemenjivanjem, smatra se temeljem suvremene biotehnologije za reprodukciju visokoproduktivnih rasplodnih životinja. Tehnologija transplantacije embrija uključuje niz uzastopnih faza: odabir donatora; superovulacija u donora; izbor proizvođača i osjemenjivanje darivatelja; oporavak i procjena embrija; uzgoj ili zamrzavanje embrija; selekcija i obuka primatelja; prijenos embrija do primatelja; procjena rezultata transplantacije.

Fotografija embrija u ranoj fazi razvoja.

trikovi:

1) hormonska indukcija superovulacije;

2) osjemenjivanje darivatelja sjemenom proizvođača procijenjenim kvalitetom podmlatka;

3) vađenje i procjena kvalitete zametaka, konzerviranje i presađivanje ili krioprezervacija zametaka u tekućem dušiku, odmrzavanje i presađivanje.

Ciljevi:

1) reprodukcija genetski vrijednih jedinki;

2) dobivanje identičnih životinja odvajanjem ranih embrija.

3) očuvanje mutiranih gena, male populacije;

4) dobivanje potomaka od neplodnih, ali genetski vrijednih životinja prema genotipu;

5) otkrivanje štetnih recesivnih gena i kromosomskih abnormalnosti;

6) povećanje otpornosti životinja na bolesti;

7) aklimatizacija uvezenih životinja stranih pasmina;

8) utvrđivanje spola embrija i dobivanje životinja određenog spola;

9) interspecifične transplantacije;

10) dobivanje himernih životinja koje se razvijaju iz ranih embrija dobivenih iz blastomera različitih životinja.

Kratka povijest

Kada je ustanovljeno da je zec imun na slinavku i šap, iznesena je ideja da se metodom transplantacije poboljša potomstvo životinja zaraženih slinavkom i šapom. Genitalni trakt kunića, gdje se presađuju embriji, sposoban je uništiti virus FMD u embrijima. Transplantacija se također može koristiti za privremeno skladištenje embrija. U jajovodima kunića moguće je provesti transkontinentalni transport ovčjih zametaka. Do 1970-ih ekstrakcija embrija provodila se uglavnom kirurškim putem, kasnije je zamijenjena manje traumatičnom i dugotrajnom nekirurškom metodom koja se temelji na uvođenju posebne sonde u maternicu kroz prirodni kanal. Sonda ima tri kanala. Jedan od kanala je dizajniran za napuhavanje balona, ​​koji začepljuje rog maternice, sprječavajući izlazak tekućine. Kroz drugi kanal uvodi se fiziološka otopina temperature 25-30°C koja ispire embrije i vraća se s njima kroz treći kanal sonde u epruvetu stavljenu u vodenu kupelj temperature 35°C. Embriji se uklanjaju iz te tekućine. U prosjeku, uz superovulaciju od donora, možete dobiti od 5 do 7 embrija. Transplantacija se izvodi posebnom sondom ili pištoljem za inseminaciju. Embriji se stavljaju u rogove maternice. Trudnoća kod primateljica provjerava se razinom progesterona u krvnoj plazmi 21. dana. Podna regulacija. U praksi uzgoja životinja vrlo je važno naučiti upravljati formiranjem muških i ženskih jedinki u potomstvu. Metoda odvajanja embrija po spolu temelji se na određivanju proteina specifičnih za mužjake. Ova metoda se široko koristi u stočarskoj praksi u mnogim zemljama. Od 1975. u Kanadi se rađaju telad, odvojena po spolu u fazi embrija. U budućnosti, za ciljanu proizvodnju muških ili ženskih jedinki, može se koristiti metoda mikrokirurške zamjene X i Y kromosoma. Takve manipulacije već su provedene na biljnim stanicama i jajima vodozemaca.

Trenutačno je postupak izvantjelesne oplodnje ušao u život pacijenata s dijagnozom neplodnosti kao rutinska manipulacija, koja je dostupna gotovo svakoj ženi koja nije u mogućnosti sama začeti potomstvo. Prije nekoliko desetljeća takve metode potpomognute oplodnje bile su nedostupne gotovo svima. Ova tehnika dala je život tisućama djece koja ne bi imala priliku opstati bez korištenja najnovijih tehnologija u području reproduktivne medicine. Kako provjeriti red čekanja za eko?

Kako se žena koja je podvrgnuta embriotransferu može osjećati i može li se osjećati trudnom?

Nakon takve manipulacije, pacijent se može žaliti na:

• Crtanje, bolna bol u donjem dijelu trbuha;
• Osjećaj opće slabosti;
• Povraćanje i mučnina.

To su subjektivni osjećaji koji ne nose nikakve istinite informacije o stanju trudnoće. Ovi znakovi i tegobe mogu biti uzrokovani upotrebom lijekova koji se koriste u protokolu. Žena nema drugog izbora nego ograničiti psihoemocionalni i fizički stres i ponizno čekati.

Prvi pouzdani znakovi implantacije, koji pokazuju da je presađivanje bilo uspješno, pojavljuju se nakon dva tjedna, ali neki od njih u određenoj ili onoj mjeri mogu smetati i ranije.

Neke žene mogu doživjeti disuriju, koja se manifestira učestalim mokrenjem, zbog pritiska povećane maternice na mjehur. Nabreklost i bol u dojkama također mogu biti znak trudnoće zbog učinka visoke doze progesterona tijekom trudnoće na njih. A neke se žene žale na pojavu kapi krvi na donjem rublju već u depresivnom stanju, uvjerene da su to znakovi neuspješnog IVF-a, trče svojim liječnicima u suzama.

Ali ne uvijek pojava ovih simptoma ukazuje na negativne posljedice. Često je proces implantacije popraćen traumom malih krvnih žila endometrija, a upravo taj simptom može ukazivati ​​na uspješnu implantaciju embrija u endometrij i signalizirati početak trudnoće. Više o tome. kada nakon IVF-a kada napraviti test na trudnoću trebate provjeriti sa svojim liječnikom

Čak i takav znak kao kašnjenje menstrualnog krvarenja neće reći ništa dobro ili loše u prvim danima. To može biti i siguran znak početka trudnoće, au nedostatku može biti uzrok hormonskog neuspjeha povezanog s uzimanjem lijekova u protokolu in vitro oplodnje.

I samo krvni test za razinu hCG ili ultrazvučni pregled može dati jamstvo odgovora na pitanje je li žena zatrudnjela ili ne. Ili pozitivan test za trudnoću. Za razliku od pozitivnog, može biti negativan u prvim danima kašnjenja zbog niske razine hCG i uspješnog razvoja trudnoće maternice.

Ako tijekom laboratorijske dijagnostike liječnici dobiju pokazatelj jednak 50-100 IU / ml, tada se te vrijednosti prihvaćaju kao sumnjive, ali podrška lutealne faze pripravcima progesterona se nastavlja. Ako su rezultati iznad 200-100 Med / ml, tada možemo suditi o uspješnom tijeku trudnoće, a s pokazateljima iznad 300, možemo pretpostaviti da postoji višestruka trudnoća u maternici.

Preživljavanje embrija tijekom IVF-a ovisi o mnogim čimbenicima iu mnogim slučajevima nemoguće je točno reći što je uzrokovalo neuspješan protokol. Uključujući ispravnu podršku trudnoće s progesteronom i kontrolu simptoma nakon IVF prijenosa embrija po danu.

Ako je došlo do implantacije, vrlo je važno podržati tijelo žene u prvom razdoblju razvoja embrija propisivanjem egzogenog progesterona. Takva terapija smanjuje rizik od komplikacija kao što su opasnost od pobačaja, spontani pobačaj. Žene koje su prošle protokol vantjelesne oplodnje počinju uzimati pripravke progesterona od dana punkcije jajnika. Trajanje terapije je čisto individualno.

Međutim, stručnjaci u području reprodukcije tvrde da ne biste trebali prestati uzimati gestagene do najmanje 12 tjedana trudnoće, a ako postoje indikacije, napustite ga, prilagođavajući dozu ovisno o kliničkoj situaciji.

Da bi se podržala lutealna faza, koriste se takvi lijekovi. Kao utrozhestan - mikronizirani progesteron, duphaston, lutein.

Vrlo kontroverzno pitanje je način primjene progesterona, koji može biti oralni i vaginalni. Neki stručnjaci skloni su uvođenju kapsula u vaginu, drugi su kategorički protiv toga. Međutim, sigurno je poznato da kada se uzima oralno, učinci utrogestana su sustavni, što se ne može reći za vaginalnu primjenu. A za trudnicu je vrlo važno djelovanje progesterona na sve receptore prisutne u svim organima i tkivima.

Velike doze lijekova mogu izazvati njihovu karakteristiku nuspojave u obliku vrtoglavice, mučnine, povraćanja. Ali da bi zadržale željenu trudnoću, žene su spremne izdržati i ovo, pa i više.

Pravila ponašanja za žene nakon prijenosa embrija.

Kako bi se osiguralo da proces implantacije embrija teče što glatko i učinkovitije. Žena se mora pridržavati određenih normi s kojima ju je dužan upoznati njezin liječnik:

• U prva dva tjedna nakon prijenosa embrija, žena treba isključiti bilo kakav psihički i fizički stres, samo mir, samo pozitivne emocije;
• Pitanje seksualnog života: u prva dva tjedna to pitanje se niti ne razmatra - strogo je zabranjeno imati spolne odnose. Nadalje, liječnik, ovisno o kliničkoj situaciji, produljuje razdoblje seksualnog odmora ili ne ograničava par u tome. Svaka tjelesna aktivnost može povećati rizik od spontanog pobačaja;
• Sport također treba isključiti;
• Ograničite sjedeći položaj. Odmorite se više i steknite pozitivne emocije;
• Strogo zabranjeno pušenje, pijenje alkoholnih pića;
• Ograničiti kontakt s pacijentima sa zaraznim bolestima;
• Također su zabranjene kupke i saune.

Znakovi neuspješnog eko nakon presađivanja

Postoje slučajevi kada prijenos embrija nije dao rezultat i nije došlo do implantacije. Ovu situaciju karakterizira pojava znakova:

• Početak menstrualnog krvarenja, počevši od prvog dana nakon prijenosa embrija;
• Negativan test na trudnoću;
• Razina hCG dobivena u laboratorijskoj dijagnostici je ispod 50 IU / ml;
• Izostanak subjektivnih znakova trudnoće nije smjernica za potvrdu takve pretpostavke.

Kao rezultat toga, mora se reći da je faza prijenosa embrija u šupljinu maternice jedna od glavnih faza protokola in vitro oplodnje. Ukoliko imate dijagnozu i zaključak liječnika da Vam je zaista potreban postupak izvantjelesne oplodnje, ovaj, kao i ostatak osnovnog IVF programa, možete obaviti besplatno na teret obveznog zdravstvenog osiguranja uz dostavu aplikacija na web mjestu.

Postoji skupina žena koje nažalost ne mogu imati djecu. Ali ne brinite, postoji izlaz. NA novije vrijeme liječnici aktivno razvijaju takav smjer kao IVF, što znači. Prijenos embrija tijekom IVF-a ne traje dugo, ali žena mora znati opće preporuke.

Trening

Vrijedno je razumjeti kako se pravilno pripremiti za prijenos embrija. Ovakav način oplodnje smatra se umjetnim, a predstavlja rađanje novog života u laboratoriju. Stoga takvu oplodnju treba shvatiti što je moguće ozbiljnije, ne samo za ženu, već i za muškarca. Potrebno je pregledati nekoliko stručnjaka.

Važno! Da biste povećali šanse za trudnoću, morate se strogo pridržavati pravila. U suprotnom, ne samo da će se smanjiti mogućnost zatrudnjenja, već će se pojaviti i psiho-emocionalni poremećaj. živčani sustav, što može dovesti do niza bolesti.

1. odbiti loše navike;
2. pratiti prehranu. Isključite iz prehrane kavu, masnu i začinjenu;
3. izbjegavajte vruće kupke i tjelesna aktivnost. Trčali smo po gradu, loše, bavili se generalnim čišćenjem, loše. Ako je moguće, isključite sve tjelesne aktivnosti;
4. bez savjetovanja s liječnikom, ne biste trebali uzimati lijekove;
5. nakon IVF-a, leći 2-3 sata.

Na koji dan dolazi do oplodnje? Liječenje se planira 1-2 mjeseca prije početka ciklusa. Na koji dan će doći do oplodnje, liječnik će moći sa sigurnošću reći.

Osim toga, žena se mora što više prilagoditi na dan prijenosa embrija. Stoga se psihički pripremite, ovo je vrlo važno, jer zahvat zahtijeva maksimalno opuštanje maternice prije prijenosa embrija. Neke žene ne znaju što ponijeti sa sobom na prijenos embrija i što učiniti nakon IVF-a. Ponesite sa sobom: ručnik, vodu bez plina. Što učiniti nakon IVF-a je ostati smiren i slijediti sva gore navedena pravila.

Čovjekova priprema. Muškarci su dužni pridržavati se određenih pravila. Nemojte donirati spermu tijekom razdoblja bolesti, to će negativno utjecati na materijal. Virusne bolesti utječu na pokretljivost spermija, a to smanjuje postotak pozitivnog rezultata.

Drugi zlatno pravilo, unutar 3 dana prije doniranja sperme, suzdržite se od spolnog odnosa, ne uzimajte lijekove, riješite se loših navika i pratite prehranu. Ako oba partnera ozbiljno shvate ove preporuke, onda imaju sve šanse da postanu sretni roditelji.

Bit postupka

U 21. stoljeću IVF postaje sve popularniji postupak, što mnogim parovima omogućuje da iskoriste posljednju priliku za dobivanje djeteta.

Transfer embrija jedna je od najvažnijih faza umjetne oplodnje. Prijenos oplođenih stanica koje se pravilno razvijaju iz epruvete predviđen je nakon punkcije ženskih jajnih stanica i njihovog spajanja s muškim spermijem u epruveti. Za daljnju implantaciju odbacuju se slabi i zaostali embriji koji nisu prikladni za nošenje djeteta.

Kao što smo već shvatili, liječnici također provode sjemenu tekućinu sa živim, pokretnim spermatozoidima. Nakon toga se provodi prirodni ili kombinirani embriotransfer.

Rezultat nije uvijek radostan za djevojku koja sanja o rađanju šarmantnog djeteta. Čak i ako se dogodi u maternici, nemoguće je jamčiti početak trudnoće.

Uspjeh ovisi o sljedećim čimbenicima:

• broj dioba oplođenih zigota;
• kvaliteta dobivenih stanica;
• brzina drobljenja;
• rizik od patologija u daljnjem razvoju.

Sve gore navedene aspekte stručnjak uzima u obzir prije daljnjih aktivnosti.
Proučavajući sve o prijenosu embrija, vrijedi razumjeti specifičnosti događaja.

Nakon oplodnje, zigota in bez greške stavljaju se u epruvetu s posebnim uvjetima. Zatim iskusni stručnjaci promatraju razvoj stanica. Zametci stari dva dana prenose se u maternicu žene, au nekim slučajevima se prenose i zameci stari tri dana. Sve ovisi o hormonalnoj pozadini žene i stanju stanica. Ponekad se razdoblje produljuje na 5 dana. Ako je sve prošlo u redu, trudnoća se javlja s njegovim daljnjim prirodnim razvojem.

Mnogi pacijenti primjećuju da liječnik sve češće inzistira na prijenosu jednog embrija. Ostatak jajnih stanica zamrzava se na poseban način tako da je, ako je potrebno, moguće drugi put podvrgnuti IVF-u bez dodatnih financijskih troškova. To je zbog sljedećeg čimbenika: ako je žena nervozna ili ne slijedi preporuke stručnjaka 100%, ne dolazi do začeća. Statistika kaže: djevojke zatrudne u 35 - 50% slučajeva, a mnogo ovisi o postojećim bolestima.

Prije prijenosa 1 embrija (najčešća opcija) ili prijenosa 2 embrija u maternicu žena se podvrgava stimulaciji. Iz tog razloga parovi koji sanjaju o blizancima imaju pravo na prijenos dva embrija uz razumijevanje rizika.

Prvi, a po potrebi i drugi embriotransfer 8a i svaki sljedeći pokušaj, predviđa posebno ispitivanje kvalitete stanica. Presađivanje uključuje korištenje samo najjačih stanica. Odnedavno se implantacija maternice provodi 5. dana, budući da je in vitro razvoj jedan od najvažnijih čimbenika u umjetnoj oplodnji. Samo ako je stadij bio uspješan, još uvijek dolazi do začeća.

Postupak prijenosa

Sva pravila prijenosa embrija određuju mogućnost daljnjeg početka začeća. Lakši, a posebno složeni slučajevi zahtijevaju odgovoran pristup pacijenta za pozitivan ishod.

Liječnici inzistiraju da svaki težak prijenos embrija zahtijeva poseban stav žene da se pridržava svih preporuka. službene statistike Uspjeh IVF-a ne ovisi samo o kvalifikacijama stručnjaka, zdravstvenom stanju pacijenata, već io spremnosti da se ispravno slijede svi savjeti.

• 1 - 2 sata ženi se savjetuje leći kako bi se povećale šanse;
• preporuke na dan prijenosa embrija predviđaju isključivanje bilo kakve tjelesne aktivnosti koja može biti opasna za bebu;
• poželjno je odgoditi intimne kontakte za 2 tjedna - nekoliko mjeseci (točno razdoblje apstinencije određuje se nakon savjetovanja s liječnikom);
• tehnika prijenosa embrija predviđa obveznu usklađenost s protokolom, a bilo kakva odstupanja od uzimanja hormonskih lijekova su nepoželjna;
• buduća majka treba biti dobro raspoložena i vjerovati u sreću, redovito šetati, pravilno se hraniti, odreći se loših navika.

Kako se vrši prijenos embrija u šupljinu maternice? Postupak umjetne oplodnje provodi se na ginekološkoj stolici. U ovom trenutku liječnik, koristeći posebna zrcala, izlaže grlić maternice žene, a drugi stručnjak uzima embrije s kateterom koji nalikuje tankoj plastičnoj cijevi. Nakon završetka postupka proučava se sadržaj katetera i utvrđuje broj transplantiranih stanica u protokolu.

Kako dolazi do oplodnje in vitro:

1. prva faza je primanje jaja i sjemene tekućine;
2. nakon čega slijedi posebna obrada. Na primjer, sjemena tekućina se ispire za naknadnu upotrebu najjačih i najboljih spermatozoida;
3. in vitro oplodnja počinje 4-6 sati nakon punkcije jajašca. Pokretni spermatozoidi miješaju se s jajima u inkubatoru, u kojem su uvjeti bliski okolini jajovoda. Oplodnja traje nekoliko sati;
4. stručnjaci kontroliraju razvoj embrija;
5. nakon 2 - 5 dana dolazi do presađivanja u maternicu. Neoplođena i abnormalna jaja se ne koriste.

Kako ide s eko? Neiskorištene stanice se zamrzavaju u tekućem dušiku za kasniju upotrebu u postupcima. Znanstvena istraživanja dokazuju visoku razinu učinkovitosti umjetne oplodnje smrzavanjem. Međutim, krio tehnika ipak ima prednost: žena ne mora ponovno prolaziti hormonsku obuku.

Koliko dugo traje prijenos embrija? IVF postupak ne traje više od 15 minuta. Replantacija se izvodi pod kontrolom ultrazvuka kroz cervikalni kanal. U isto vrijeme, ženama se savjetuje da prouče značajke umjetne oplodnje, razumiju suštinu i pripreme se psihički, fiziološki za buduće začeće, rađanje djeteta.

Život embrija

Mehanizam i redoslijed prijenosa embrija malo se promijenio od svog početka. Apsolutna sterilnost svih materijala koji, na ovaj ili onaj način, dolaze u kontakt s biološkim tkivima, održavanje optimalne temperature u prostoriji za slijetanje i brze radnje liječnika neizgovorena su pravila.

Sam zahvat izvodi se na ginekološkoj stolici, bez primjene opće anestezije. Ponekad se koristi sedativ i antispazmodik - najčešće papaverin.

Prije početka, ponekad se pacijentica ispere vaginalnom fiziološkom otopinom. Zatim se otvaraju sterilni paketi s kateterima. Obično se koriste 2 - tvrdi i meki. Tvrdi se umetne u cervikalni kanal, otvarajući put do šupljine maternice, a embriji će se pomicati mekim putem. Odabir katetera ovisi i o sklonosti žene grčevima, što može dovesti do otežanih transfera.

Zatim se posebnom štrcaljkom pričvršćenom na mekani kateter uzimaju embriji stari 3 dana s malom količinom medija kulture i malim volumenom zraka. Odmah nakon toga embriolog predaje napunjeni kateter reproduktologu za ugradnju u pacijenticu. Specijalist, pritiskom na klip šprice, gura sadržaj katetera u maternicu. Nadalje, bez otpuštanja klipa, oba katetera se uklanjaju iz vagine i provodi se pregled prisutnosti preostalih embrija. To se događa rijetko, ne više od 1% slučajeva.

Cijeli postupak traje ne više od 40 minuta. Nakon nje, žena je još neko vrijeme na stolici (20-30 minuta), nakon čega u nekim klinikama pacijent ima priliku ležati oko sat vremena u odjelu na krevetu. Iako, prema brojnim novim studijama, odnos između dugog odmora nakon transfera i njegovog uspjeha nije utvrđen.

Ponašanje žene

Nakon usađivanja embrija u tijelo žene, liječnik daje upute što treba učiniti nakon embriotransfera. Neki tvrde da motoričku aktivnost treba isključiti, drugi savjetuju leći oko dva sata, a zatim lagano prošetati. U osnovi, pacijentica nastavlja svoj uobičajeni način života, ali svejedno postoje određena ograničenja.

Kako bi se povećala vjerojatnost uspješnog prijenosa, liječnik propisuje lijekove, tako da svaki dan uzima lijekove i mjeri temperaturu. Ako postoji migrena, tada liječnik propisuje pola citramona. Vrijedno je zaštititi se od fizičkog napora, ne ići u teretanu, ne pregrijavati se i ne hladiti, ne voziti, svakako hodati na svježem zraku.

Ovo razdoblje nije bolest, neki se čak boje kašljati, ali buduća majka može sjediti, možete se smijati, prehrana treba biti uravnotežena. Ako liječnik savjetuje da ga promijenite, onda to morate učiniti. Naravno, žena bi trebala slijediti preporuke nakon IVF prijenosa embrija ako je zainteresirana za trudnoću.

Je li potrebno mirovanje u krevetu nakon prijenosa embrija? Stručnjaci preporučuju da prvi dan nakon prijenosa embrija provedete u krevetu, bez tuširanja i kupanja. Nije preporučljivo imati spolne odnose. U prisutnosti zatvora, bolje je uzeti laksativ. Bez greške, potreban vam je način nakon IVF-a, trajanje sna je najmanje 8 sati.

Kontraindikacije nakon implantacije. Razdoblje nakon prijenosa embrija smatra se odgovornim, pacijent se počinje brinuti i postati nervozan, jer stvarno želite da dođe dugo očekivana trudnoća. Faza je zapravo odgovorna, tako da možete koristiti jednostavne umirujuće dekocije. Ako je maternica pacijentice slabo opskrbljena krvlju, tada joj se propisuje Viagra. Pridržavaju se nekih pravila ponašanja.

Stoga se ponašanje nakon IVF prijenosa embrija mijenja. Prije prolaska testa na hCG, par prolazi kroz ozbiljno razdoblje, pa se čini sve kako bi se povećale šanse za uspjeh postupka. Ako pažljivo slijedite sve upute stručnjaka, tada će se kao rezultat, nakon poroda, pojaviti divno malo dijete.

Higijena

Prijenos embrija obavlja se uz punu suglasnost pacijentica s liječnicima i utvrđuje se broj usađenih embrija. U tom smislu, postupak zahtijeva prisutnost dva roditelja.

Proces izvršenja traje do deset minuta. Embriji se transplantiraju u šupljinu maternice. Buduća majka mora shvatiti odgovornost za malo stvorenje koje će uskoro doći na svijet. Prije svega, trebala bi slijediti preporuke higijeničara.

Mogu li se tuširati nakon prijenosa embrija? Nakon zahvata žene se trebaju pridržavati preporučene higijene. Dakle, tuširanje nije zabranjeno, preporučljivo je da voda bude topla i da ne prelazi 37 C. Osim toga, možete bojati kosu, prati se i kupati. Sauna i Vruća kupelj nije dozvoljeno.

Kada se mogu tuširati nakon prijenosa embrija? Nakon prolaska postupka prvog dana, bolje je ne tuširati se, posebno se ne smijete prati. Nakon toga isperite toplom vodom.

Nakon uvođenja embrija posebna se pažnja posvećuje prehrani. Proteinska hrana je korisna. Za kuhanje se koriste riblji i mesni proizvodi, povrće i voće, mlijeko i mliječni proizvodi. Ako liječnik odredi posebnu dijetu, treba je se pridržavati i ograničiti na one namirnice koje se preporučuju za uzimanje.

Što ne raditi nakon prijenosa embrija? Liječnici ne savjetuju čišćenje kuće i podizanje teških stvari, jer se ne preporuča savijati, pušenje nakon prijenosa embrija je kontraindicirano. Manje biti unutra na javnim mjestima jer tamo ima puno ljudi. Kao rezultat toga, možete dobiti infekciju i razboljeti se, a to je prepuno komplikacija za oslabljeno žensko tijelo.

Mogu li raditi nakon IVF prijenosa embrija? Mnoge žene postavljaju ovo pitanje. Uglavnom, majke koje su radile nakon prijenosa embrija uvjerene su da moraju ići na posao, nema potrebe stalno ležati u krevetu.

Hrana

Mogu li jesti prije prijenosa embrija? Da. Također pijte više tekućine. Prije prijenosa embrija preporuča se jesti više sočne hrane. To uključuje svježe pripremljena jela od mesa, povrće i voće. Liječnici napominju da je vrlo korisno jesti ananas na dan prijenosa embrija.

Nekoliko sati prije zakazanog postupka preporuča se piti veliki broj voda.

Kako jesti nakon prijenosa embrija u šupljinu maternice? Poželjno je piti više tekućine, do dvije litre dnevno, nikako manje. To mogu biti kompoti, svježe stisnuti sokovi. Prednost treba dati hrani bogatoj proteinima. Prije svega, mora biti uravnotežen. Dijeta uključuje prirodne proizvode.

slatkiši;

Nakon prenesenog postupka žensko tijeločesto podložni zatvoru. Kako bi se spriječila takva situacija, u prehrani se povećava količina proizvoda koji sadrže vlakna (zobene pahuljice, kruh s mekinjama, sirovo povrće), a također se preporučuje jesti ananas nakon prijenosa embrija.

Moguće je prijeći na frakcijske obroke: često iu malim obrocima. Prehrana nakon prijenosa embrija treba biti ispravna i voditi zdrav način života što je više moguće.

Prijenos embrija tijekom IVF-a u šupljinu maternice posljednja je i najuzbudljivija faza protokola. U prosjeku zahvat završava uspješno u 35-40% slučajeva. Žena će moći saznati je li ušla u ovaj sretni postotak tek nakon 10 dana. Cijelo to vrijeme njezino će tijelo voditi "dijalog" s embrijem, zbog čega će se ili uspješno implantirati u endometrij maternice ili će biti prisiljeno izaći s krvlju tijekom sljedeće menstruacije.

Čak i uz prirodno začeće, odbacivanje oplođenih jajašaca događa se mnogo češće nego što žena može posumnjati. Značajan dio embrija koje je začeo apsolutno zdrav mladi par genetski je defektan - maternica im neće dati priliku za život i odbacit će ih. U prirodnim uvjetima samo 30% začeća završava trudnoćom, a s tog stajališta učinkovitost IVF-a više se ne čini tako niskom.

Ako žena ne može sama zatrudnjeti, jajna će stanica biti uklonjena iz njezinih jajnika i spojena sa spermom njezina supruga u laboratoriju. Ovo je in vitro oplodnja. Ali također se događa da genetski materijal oba supružnika nije prikladan za začeće. U ovom slučaju, liječnici predlažu radikalno rješavanje problema i korištenje embrija donatora za IVF, dobivenog kao rezultat fuzije tuđeg jajašca s tuđim spermom. Zatim se na isti način prenosi u maternicu.

Postupak IVF prijenosa embrija je brz i bezbolan. Da bi se oplođeno jajašce prenijelo tamo gdje bi trebalo biti, koristi se kateter koji se pomoću tanke plastične vodilice uvlači u maternicu. Liječnik kontrolira sve svoje radnje na monitoru ultrazvučnog aparata. Kada kateter dosegne cilj, iz njega će se ispustiti kapljica hranjivog medija u kojem se nalazi embrij. Manipulacije traju nekoliko minuta, a sat vremena nakon njih preporučuje se da žena bude u bolnici.

Glavna stvar u ovom pitanju je odabrati pravo vrijeme za presađivanje. Riječ je o tzv. implantacijskom prozoru, a uspjeh zahvata uvelike ovisi o tome je li on ispravno određen. Činjenica je da se do trenutka presađivanja, kako u tijelu majke tako iu embriju, moraju dogoditi složeni biokemijski procesi koji će omogućiti njihovo povezivanje.

Za to, stanice trofoblasta - vanjske ljuske embrija - sintetiziraju posebne enzime, s kojima se "lijepe" na endometrij. Isto se događa i u stanicama sluznice maternice, one također izlučuju posebne tvari - citokine i kemokine, koje pomažu embriju da se implantira. Odnosno, između ženskog tijela i fetusa odvija se složena interakcija na čiji ishod je teško utjecati izvana.

Spremnost endometrija da prihvati jajašce naziva se receptivnost. To jest, implantacijski prozor je kratko vremensko razdoblje kada je maternica receptivna. Ovo razdoblje nastupa negdje 6-8 dana nakon prirodne ovulacije ili umjetnog vađenja jajašca.

U kojoj fazi razvoja embrija je najvjerojatnije da će se ukorijeniti?

U prirodi je sve promišljeno do najsitnijih detalja. Kod prirodnog začeća, implantacijski prozor se otvara upravo kada je jajašce najsposobnije za život - ti su procesi regulirani hormonska pozadinažene. Kod IVF-a liječnici mogu namjerno stimulirati endometrij propisivanjem lijekova koji sadrže progesteron. Oni ne samo da povećavaju receptivnost sluznice, već i opuštaju maternicu, što je vrlo važno za uspješnu implantaciju.

Unatoč činjenici da postupak in vitro oplodnje uvijek ima standardne korake, neke tehnologije mogu se razlikovati u različitim klinikama. Prije svega, to se odnosi na dan implantacije embrija tijekom IVF-a. U osvit reproduktivne tehnologije jajna stanica se prenosila u maternicu drugi ili treći dan nakon umjetne oplodnje. U nekim slučajevima to čine i sada, jer je majčina utroba najbolje okruženje za razvoj embrija. No, s druge strane, nemoguće je predvidjeti njegovu održivost u tako ranom razdoblju. Ako nastavite promatrati jajašca u laboratoriju, ispada da će se petog dana života neki od punopravnih zdravih embrija iznenada prestati razvijati, dok će drugi, naprotiv, početi rasti brže i bolje od prije. Stoga je teško nedvosmisleno odgovoriti na pitanje koji dan je prijenos zametaka tijekom IVF-a najpovoljniji.

Izbor vremena slijetanja

Daje sljedeće podatke:

• kod implantacije jednodnevnih embrija trudnoća se dogodila u 17-18% slučajeva;
• trodnevni - u 38-41%;
• petodnevni - u 43-48%.

Čini se da je zaključak očit: preporučljivo je odgoditi prijenos embrija do petog dana, ali nije sve tako jednostavno. Ako se jajašca ostave u laboratoriju dulje od 3 dana, mogu se zaustaviti u razvoju. Odnosno, postoji realan rizik da se neće imati što prenijeti. A ako se transplantacija ipak dogodi treći dan, šanse za trudnoću bile bi velike - do 41%.

Situacija je dvojaka. Stoga liječnici često postupaju drugačije, uzimajući u obzir okolnosti svakog pojedinog slučaja. Opće prihvaćena pravila za presađivanje tijekom IVF-a su sljedeća:

• ako je dobiveno manje od 5 embrija, tada ih treba prenijeti u maternicu treći dan;
• ako je tri dana nakon umjetne oplodnje više od 5 embrija još uvijek održivo, tada se prijenos može odgoditi do 5. dana, kada će njihove šanse za dobivanje uporišta u maternici biti veće.

Postoji i alternativna opcija - dvostruka presađivanje. Dio jajašaca prenese se treći dan, a ostatak peti. Dakle, moguće je ubiti dvije muhe jednim udarcem - osigurati embrijima najpovoljnije uvjete za razvoj, a zatim igrati na sigurno i posaditi ih još nekoliko u slučaju da prvi nisu bili održivi.

Ali ova opcija ima i lošu stranu - rizik od višestruke trudnoće i, kao rezultat toga, neplodnosti je previsok. U tom slučaju može biti potrebno smanjiti već uspostavljene embrije (uklanjanje dodatnih), što također nije sigurno. Čak i ako ostavimo po strani moralni i etički aspekt problema, ostaje visok rizik od pobačaja. Dakle, pokušavajući povećati šanse za trudnoću, može se ugroziti cijeli IVF postupak.

Postoji samo jedan zaključak: najprikladnije vrijeme za prijenos embrija je individualno u svakom slučaju. Takvu odluku može donijeti samo liječnik na temelju količine i kvalitete genetskog materijala, kao i fiziološkog stanja žene.

U kojim slučajevima se presađivanje embrija otkazuje tijekom IVF-a?

Da bi implantacija bila uspješna, važna je prisutnost dvije komponente:

1. kvalitetno jaje;
2. receptivni endometrij, spreman da ga primi.

Ako barem jedan od ovih uvjeta nije ispunjen ili se ne poštuje u dovoljnoj mjeri, prijenos nema smisla. U slučaju da postoje problemi s endometrijom, ali već postoji visokokvalitetni genetski materijal, može se zamrznuti. Odnosno podložno proceduri. Prijenos će biti odgođen dok maternica ne bude spremna i otvori se prozor za implantaciju.

Među naj uobičajeni uzroci za koje je datum presađivanja embrija otkazan ili odgođen:

1. , što dokazuje sposobnost skupljanja 20 ili više jajašca u jednoj punkciji. Osim toga, prati ga i pogoršanje dobrobiti žene - pojavljuje se nedostatak zraka, oticanje udova, a veličina trbuha značajno se povećava.
2. Hiperplazija endometrija, odnosno njegovo povećanje. Normalno, debljina receptivnog endometrija može varirati od 9 do 12 mm. Ako ultrazvuk pokaže da se sluznica maternice povećala u volumenu do 14 mm ili više, tada je besmisleno provoditi presađivanje - oplođeno jaje u takvom endometriju neće moći dobiti uporište. Problem se može riješiti terapeutskom ili kirurškom metodom, a embriji se mogu zamrznuti do boljih vremena.
3. Visoka razina progesterona u krvi žene. Po količini ovog hormona može se procijeniti stanje implantacijskog prozora. Ako analiza pokazuje vrijednosti iznad 10-20 nmol / l, to znači da je prozor bio otvoren dulje vrijeme i embriji možda neće imati vremena da se smire. S ove točke gledišta, niska razina progesterona je poželjnija - propisivanjem hormonalne stimulacije izvana, liječnik može sam otvoriti prozor kada je to potrebno.
4. Popratne bolesti - SARS, gripa, ozljede.

Ali ne treba misliti da odgađanjem prijenosa embrija iz ovog ili onog razloga liječnik smanjuje ženine šanse za trudnoću. Ispostavilo se da stvari stoje upravo suprotno. Nedavno su talijanski znanstvenici zaključili da je postotak trudnoća u kojima se koriste zamrznute oplođene jajne stanice veći nego u svježim protokolima. A postotak pobačaja, naprotiv, manji je. Ova činjenica nam omogućuje da izvučemo sljedeći zaključak: umjesto pokušaja umjetnog stvaranja uvjeta za implantaciju i pokušaja otvaranja prozora hormonski lijekovi, bolje je pričekati povoljne uvjete u prirodnom ciklusu.

Zašto se embrij ne implantira tijekom IVF-a?

Čak i ako reproduktolozi rade s kvalitetnim genetskim materijalom i uspiju dobiti dovoljan broj održivih embrija, a zatim zakažu transfer u razdoblju otvorenog implantacijskog prozora, još je prerano govoriti o početku trudnoće.

Od velike važnosti je faktor prirodne prirodne selekcije. Sluznica maternice sposobna je prepoznati genetske pogreške koje liječnici ne mogu vidjeti. Ako nesavršeni embrij uđe u maternicu i uspije se implantirati, endometrij će prije ili kasnije uočiti patologiju i prestati hraniti takav embrij hranjivim tvarima. Dakle, priroda štiti ženu od razočaranja i trudnoća se prekida čim počne.

Naravno, u ovom pitanju ne ovisi sve samo o kvaliteti embrija. Postoje i druge okolnosti koje ometaju implantaciju. Među njima:

• hiperplazija (zadebljanje endometrija);
• stanjeni endometrij (manje od 7 mm debljine);
• polipi;
• nasljedna ili stečena trombofilija;
• pretilost;
• dob;
• imunološki poremećaji.

Donedavno se vjerovalo da je uzrok neplodnosti nakon 45 godina u lošoj kvaliteti reproduktivnog materijala. No, praktično je dokazano da nisu važne samo jajne stanice, već i unutarnja sluznica maternice - s godinama se njezine receptivne sposobnosti znatno smanjuju.

Kako stimulacija ovulacije utječe na implantaciju?

Reproduktolozi sumnjaju da bi odgovor na pitanje zašto se embrij ne pričvrsti tijekom IVF-a mogao biti u umjetnoj stimulaciji ovulacije dan prije. Kako to mijenja strukturu endometrija još uvijek nije pouzdano poznato. Nemoguće je uzeti stanice za histologiju i ispitati ih prije prijenosa embrija - kršeći cjelovitost sluznice, lako je poništiti sve napore.

Situacija je sljedeća: sumnja se na mogući problem s endometrijom, ali ne mogu dobiti materijal kako bi to potvrdili ili opovrgli. Zato utjecaj COS-a (kontrolirane stimulacije jajnika) još nije dokazan. Ono što se pouzdano zna je mogućnost prijevremenog oslobađanja progesterona, koji može pomaknuti implantacijski prozor.

Kako povećati šanse za trudnoću IVF-om: 5 glavnih pravila

1. Produžiti uzgoj oplođenih stanica u laboratoriju do 5 dana i provesti njihovu predimplantacijsku dijagnostiku, što će omogućiti provjeru kvalitete embrija i procjenu numeričkog skupa kromosoma.
2. Odaberite najbolji pojedinačni embrij za prijenos kako biste smanjili rizik od višestruke trudnoće.
3. Za prijenos embrija u maternicu koristite samo meke, netoksične katetere koji ne mogu oštetiti genetski materijal.
4. Pažljivo pratite razinu progesterona u krvi žene kako ne biste propustili otvaranje implantacijskog prozora.
5. Kako bi se spriječilo stvaranje tromboze, pomoću oblika heparina niske molekularne težine. Isti lijek poboljšava cirkulaciju krvi u mikroposudama koje obavijaju i hrane embrij. Terapija heparinom posebno je važna za bolesnice sa simptomima hiperstimulacije jajnika i s pojačanim zgrušavanjem krvi.

Neke klinike koriste još jedan način pomoći embriju - izlijeganje. Ova tehnika uključuje rezanje vanjske membrane koja štiti oplođeno jajašce. Indikacije za izleganje, osim prisutnosti očitih anomalija vanjske ljuske, su sljedeće okolnosti:

• starost žene preko 35 godina;
• iskustvo nekoliko;
• prijenos embrija koji su prošli krioprezervaciju;
• povišene razine u krvi.

Sama pacijentica može pomoći embriju da se implantira ako pažljivo slijedi upute liječnika. Prvih 10 dana nakon prijenosa jajašca je najkritičnije. U ovom trenutku, žena ne bi trebala dizati utege, uzeti topla kupka, baviti se vaginalnim seksom, hipotermijom i preopterećenjem. Ima smisla ograničiti aktivne društvene kontakte i tjelesnu aktivnost, ali naravno, ne biste trebali ići u krajnost i ležati na kauču 10 dana.

Nedavna istraživanja španjolskih reproduktologa dokazala su da šanse za implantaciju možete povećati svakodnevnim polaganim hodanjem, pri čemu maternica zauzima najpovoljniji položaj. Osim toga, lagani pokreti poboljšavaju cirkulaciju krvi i pomažu u ublažavanju emocionalnog stresa.

Da su napori bili okrunjeni uspjehom i da je embrij čvrsto uspostavljen u maternici, moguće je razumjeti posrednim znakovima:

• blaga jutarnja mučnina;
• pojava metalnog okusa u ustima;
• povećanje subfebrilne temperature;
• lagani vučni bolovi u donjem dijelu trbuha, ponekad popraćeni blagim smeđim iscjetkom;
• povećana osjetljivost mliječnih žlijezda.

Svi ovi znakovi mogu biti prisutni zajedno ili se uopće ne moraju pojaviti. Jedini način da saznate da se u maternici nalazi embrij je da napravite test razine hCG. Zaključci na temelju rezultata analiza mogu se donijeti već 12. dan nakon presađivanja.