Пцр количественный вич. Что такое ПЦР диагностика ВИЧ? Недавно обновлено! Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать

Для большинства женщин и мужчин это венерическое заболевание вызывает наибольшее опасение. По этой причине после случайной интимной связи без барьерной контрацепции, а также при частой смене половых партнеров и после хирургических операций, разумный человек испытывает определенную настороженность. Самый надежный способ внести ясность - это обратиться в клинику и сдать ПЦР анализ на ВИЧ.

Тест по крови можно использовать для определения следующих показателей:

• Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в латентный период (в первые недели после заражения антитела в анализах ИФА не выявляются по причине их отсутствия или слишком низкой концентрации).
• Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
• Выявление статуса у детей, которые родились от матерей-носителей (антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных женщин. Определение ДНК вируса у детей желательно проводить в возрасте до 48 часов жизни, 1-2 месяца, 3-6 месяцев).
• Ложноотрицательные, ложноположительные и сомнительные результаты ИФА тестов.
• Диагностика количества ВИЧ и контроль за изменением вирусной нагрузки в динамике (в случае уже установленного диагноза СПИД анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии).

Цена анализа ПЦР на ВИЧ

АНАЛИЗ ПЦР НА ВИЧ - КОГДА СДАЮТ, ЗАЧЕМ И В КАКИЕ СРОКИ

1. ДНК ВИЧ. Диагностика ДНК вируса иммунодефицита человека возможно использовать для раннего определения возможного инфицирования после случая повышенного риска (анализы крови сдаются в сроки, начиная через 10-й день после потенциального инфицирования). Однако для полного исключения инфекции, необходимо в последующем проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки 4 и 12 недель.
   Результаты анализа: ДНК ВИЧ (качественный анализ) - "не обнаружено" или "обнаружено". В последнем случае требуются повторные дополнительные исследования для подтверждения ВИЧ-инфекции. При отрицательном результате, но высоком риске инфицирования, требуется повторное обследование - пересдача крови методом ПЦР или ИФА спустя некоторое время.
2. РНК ВИЧ. Определение РНК ВИЧ методом ПЦР количественный (так называемая "вирусная нагрузка") - один из показателей для оценки прогноза течения ВИЧ-инфекции и самый ранний показатель эффективности противовирусной терапии. Тест показан для мониторинга течения болезни, решения вопроса о начале терапии, оценки её эффективности.
   Исследование РНК ВИЧ методом ПЦР возможно использовать у взрослых при ранней достоверной диагностики возможного инфицирования после эпизода высокого риска (примерно через 7-10 дней после вероятного инфицирования). Присутствие высокого титра РНК ВИЧ в отсутствие антител позволяет диагностировать острую ВИЧ-инфекцию. Однако для уточнения диагноза необходимо проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки через 1 и 3 месяца.
   Сдача ПЦР РНК ВИЧ у беременных с этой инфекцией за 3-4 недели до предполагаемого срока родов показана для решения вопроса о методе родоразрешения (через естественные родовые пути или путём кесарева сечения).
   Результаты анализа: РНК ВИЧ HIV 1 типа (количественный анализ) - "не обнаружено" (это в норме).
3. Резистентность ВИЧ. Анализ на определение резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы показан ВИЧ-инфицированным при неэффективности проводимой терапии, а также в период острой инфекции перед началом противовирусного лечения. Исследование позволяет определить резистентность ВИЧ к лекартсвенным препаратам. По результатам проведенного анализа инфекционист узнаёт о наличии мутаций устойчивости к ингибиторам протеазы, нуклеозидным и ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы, а также информацию по каждой аминокислотной позиции, ассоциированной с мутацией лекарственной устойчивости.
4. Мультипрайм комплексная диагностика: качественное определение РНК вируса гепатита С / ДНК вируса гепатита В / РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типа (ультрачувствительный метод). Анализ позволяет проводить диагностику ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов С и В на ранних сроках. Исследование показано для раннего выявления вирусных гепатитов В и С, ВИЧ 1/2 типа у лиц из группы риска. Выявление ДНК или РНК вирусов свидетельствует об инфицировании.

Сроки готовности данных анализов крови - от 3 до 7 календарных дней. Сдать качественный и количественный анализ ПЦР для диагностики ВИЧ инфекции в Москве можно в нашем медицинском центре. Взятие крови ежедневно, с 10-00, в том числе на

Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.

Диагностика инфекции ВИЧ

ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:

• ИФА - иммуноферментный анализ.
• Вестерн-блот.
• ПЦР - полимеразная цепная реакция.
• Экспресс-тесты.

Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.

Суть анализа

Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой - реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.

В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.

В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.

Стоимость исследования

Метод ПЦР - достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.

Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) - от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы - от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.

Цели исследования

ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:

• Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
• Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
• Для выявления количественного содержания вируса в организме.
• При положительном иммуноблотинге - они с ПЦР дополняют друг друга.
• Тестирование доноров.
• Для ранней диагностики ВИЧ.
• Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.

Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.

Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика - это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют - это может быть при низкой вирусной нагрузке.

ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.

А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.

Подготовка к анализу

Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.

Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.

Плюсы ПЦР при ВИЧ

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

• Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
• Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
• Достоверность составляет от 85 до 98%.
• Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
• Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Минусы метода

Недостатки ПЦР заключаются в следующем:

• Дороговизна анализа.
• Необходимо сложное медицинское оборудование.
• Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
• Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
• Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
• Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.

Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:

• Требуется строго следить на информацией на пробирках.
• Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
• Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
• Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
• Тест-система должна быть отличного качества.

Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.

Длительность анализа

Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Достоверность ПЦР

Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.

Когда берут кровь на анализ?

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней - 80%. Наличие при ПЦР на результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.

Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.

При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.

Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.

Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:

• Планирование беременности.
• Предстоящая операция.
• Случайная половая связь.
• Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
• Заключенные.
• Больные ТБ.
• Работники МЧС и полиции.
• Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
• Проститутки.
• Иностранные студенты.
• Наркоманы.

Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся больше 3 недель.
• Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
• Увеличение лимфоузлов.
• Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.

Расшифровка анализа - прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.

ПЦР или ИФА, что лучше?

При РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.

Задача и возможность ИФА - определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.

Качественный анализ на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.

Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.

Количественный анализ на ВИЧ

Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.

Цель такого исследования - мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.

Какие результаты могут быть выданы:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
• От 20 - до 10 в 6 степени копий/мл - диагноз достоверный.
• Более чем 10 в 6 степени копий/мл - большая ВН.

Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.

ПЦР на ВИЧ является достоверным и заслуживающим внимания диагностическим способом, с помощью которого определяется генетическая структура вирусного микроорганизма. Если показатель вирусного микроорганизма в крови минимален, то при проведении исследования наблюдается многократное количественное увеличение вируса. Это говорит о том, что достоверность ПЦР весьма высока.

Как сдают анализ крови на ВИЧ

Перед тем, как сдать анализ, больному на протяжении пары суток не рекомендуется питаться продуктами, богатых жирами. Исследование крови надо сдавать перед едой, последняя трапеза надо чтобы была не позже, чем 8 часов назад. Также на этот день и ранее исключаются алкогольные напитки и жареная пища.

Только такие условия обеспечат точный результат анализа.

Но с помощью общего исследования крови нельзя быть полностью уверенным в том, что в организме существует или отсутствует ВИЧ. Только некоторые параметры, после того, как больной сдал кровь, могут вызвать подозрения у доктора, что больной имеет ВИЧ:

• Повышена скорость оседания эритроцитов.
• Низкий гемоглобиновый показатель крови.
• В крови понижен состав эритроцитарных клеток.
• Уровень нейтрофильных лейкоцитов понижен.
• Лимфоцитные клетки в крови повышены.
• Понижены тромбоциты крови.

Что за исследование ПЦР

Как правило, делается анализ для того, чтобы определить вирус иммунодефицита в крови донора. Также производится ранняя диагностика данного вида вируса в человеческом организме до вырабатывания белковых соединений кровяной плазмы, препятствующих размножению вирусов и нейтрализующих выделяемые ими токсины (антител).

Эти специфичные белки сыворотки крови определяются стандартными исследованиями на ВИЧ (иммуноферментный анализ), но лишь через определенный период от 1 до 3 месяцев, а при редких случаях спустя год после того, как человек заразился.

Сколько дней делается анализ ПЦР РНК или ДНК на ВИЧ? Если проводить ПЦР диагностику на ВИЧ, то результат, имеющий высокую точность, будет известен спустя две недели, и он будет достоверен на 98,5-99% или спустя 5 суток. В этом случае анализ ПЦР на ВИЧ будет достоверен только на 79,5-80%. Этот анализ на ВИЧ по сравнению с иммуноферментным анализом является трудоемким исследованием, назначается не каждому человеку, а лишь тем, кому он особо показан или на платной основе.

Для чего сдается анализ

Полимеразную цепную реакцию выполняют в следующих случаях:

• Чтобы подтвердить или опровергнуть наличие вируса иммунодефицита человека во временной промежуток с момента заражения до проявления антител (продолжается от 2 недель до 3 месяцев).
• Если существуют сомнения в данных иммуноблоттинга.
• При установленной совокупности всех генов ВИЧ-1 либо другой разновидности ВИЧ-2.
• Чтобы установить и наблюдать за активностью вирусов в человеческом организме.
• Чтобы выявить реакцию на тесты к ВИЧ у родившегося ребенка, мать которого является носителем вируса иммунодефицита человека.
• Если переливают кровь.

В чем преимущество ПЦР

Этот способ диагностики хорош тем, что:

Существует способы ПЦР для диагностики на ВИЧ: качественный и количественный методы. При качественном определяют комплиментарный сегмент ДНК в совокупности наследственного материала (генома) пораженной лимфоцитной клетки. Выявляется не сам вирусный возбудитель, а только те структуры, которые встраиваются вирусом в клетку.

Клеточное ядро будет хранить ДНК вируса, из которой будет происходить его считывание и размножение.

При количественном способе определяется количественный показатель скопированных вирусных РНК. Выполняется лишь у тех, кто инфицирован вирусом иммунодефицита человека для того, чтобы контролировать лечебный результат, определять степень тяжести патологического процесса.

Насколько метод достоверен ПЦР

Увы, но данный способ не является идеальным. Связано это с тем, что данные анализа могут быть ошибочными, способны показать ложноположительный результат. К такому диагностическому способу обращаются в том случае, если надо установить диагноз или сделать скрининговые тесты на наличие ВИЧ-инфекции.

Если все выполнено верно: не были перепутаны пробирки, перед забором крови посмотрено назначение, произведена правильная маркировка пробирок медсестрой и многие другие действия, а врачом–лаборантом соблюдался лабораторный регламент (верно выполнил манипуляции с биоматериалом, исключая перекрестное загрязнение и другие нормы), использовалась отличного качества тест-система, то анализ ПЦР может давать ложный положительный результат не более, чем 2% эпизодов.

Вконтакте

Описание

ВИЧ-инфекция представляет собой заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Вирус иммунодефицита человека - РНК-содержащий вирус - относится к семейству ретровирусов (Retroviridae). Различают два типа: ВИЧ-1 является основным возбудителем ВИЧ-инфекции, причиной пандемии, развития СПИД. ВИЧ-2 – малораспространенный тип, встречается в основном в Западной Африке. Исходом ВИЧ-инфекции является СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) – это конечная стадия ВИЧ-инфекции, когда иммунная система человека поражается настолько, что становится неспособной сопротивляться любым видам инфекции. Любая инфекция, даже самая безобидная, способна привести к тяжелому заболеванию и летальному исходу. Сегодня в мире отмечается пандемия ВИЧ-инфекции, заболеваемость населения планеты неуклонно растет. Источник инфекции - человек. Вирус у человека можно выделить из семенной жидкости, секрета шейки матки, лимфоцитов, плазмы крови, спинномозговой жидкости, слез, слюны, мочи и материнского молока, но концентрация вируса в них различна. Наибольшая концентрация вируса содержится в следующих биологических средах: в сперме, крови, секрете шейки матки. Пути передачи ВИЧ: - незащищенные половые контакты - переливание крови и препаратов крови - использование нестерильных инструментов при проведении медицинских вмешательств - ранения медперсонала нестерильным инструментом - перинатальное инфицирование: передача вируса во время беременности и родов. Вирус не стабилен и способен жить только в жидкостях организма человека и только внутри клеток. В связи с этим не существует опасности заразиться при поцелуях и бытовых контактах, при пользовании общим туалетом, через укусы насекомых, через слюну, питьевую воду и пищевые продукты. В клиническом течении ВИЧ-инфекции различают 5 стадий: инкубации, первичных проявлений, латентная, стадия вторичных заболеваний и терминальная. В период 3 – 6 недель после инфицирования обычно развивается недлительный острый синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы и высокие уровни виремии в периферической крови. В большинстве случаев после этого развивается ВИЧ-специфичный иммунный ответ и снижение виремии в плазме, обычно в течение 4 – 6 недель после появления симптомов. После сероконверсии (появления специфических антител) наступает клинически стабильная бессимптомная фаза, способная длиться годами. Для бессимптомного периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии в плазме и постепенное снижение уровней CD4+ T-лимфоцитов, которое приводит впоследствии к развитию тяжелого иммунодефицита, множественным оппортунистическим инфекциям, онкогенезу и гибели. Определение РНК ВИЧ методом ПЦР возможно использовать в ранней диагностике возможного инфицирования после эпизода повышенного риска (на 7-10 дней после потенциального инфицирования). Определение вирусной нагрузки РНК ВИЧ - один из показателей для оценки прогноза течения ВИЧ-инфекции и самый ранний показатель эффективности терапии. Специфичность определения - 100%. Чувствительность определения – 80 МЕ/мл. Результат выдаётся в количестве копий в клетках.

Что являет собой ВИЧ-инфекция? Это заболевание, которое вызывается вирусом, содержащим РНК, из семейства ретровирусов. На последней стадии ВИЧ-инфекции иммунная система человека неспособна противостоять различным инфекциям. В этом случае заражение даже обычным ОРВИ может привести к летальному исходу.

Прямым источником инфекции является человек, так как вирус ВИЧ жизнеспособен лишь в клетках организма – при попадании в окружающую среду он мгновенно погибает. Именно поэтому им невозможно заразиться через бытовые контакты, продукты питания, воду, использование общего санузла.

ВИЧ-инфекция может содержаться в плазме крови, секрете шейки матки, эякуляте, спинномозговой жидкости, слюне, слезах, грудном молоке и моче, только везде ее концентрация отличается. Заразиться ВИЧ-инфекцией можно через переливание крови от инфицированного донора, незащищенные сексуальные контакты, повреждение с помощью необработанного медицинского инструмента, а также путем перинатального инфицирования – от матери к ребенку во время беременности и родов.

Показания к проведению ПЦР РНК ВИЧ

Протекание ВИЧ-инфекции в организме человека делится на 5 стадий:

• инкубационный период;
• стадия первых проявлений заболевания – она характеризуется резким появлением симптомов, похожих на начало гриппа;
• латентная фаза – она может длиться годами, для нее характерно появление антител к заболеванию в крови;
• стадия вторичных проявлений заболевания – в крови постепенно снижается уровень лимфоцитов;
• терминальная стадия.

Качественный анализ крови на РНК ВИЧ с помощью метода ПЦР давно используется при ранней диагностике возможного заражения. Обычно его сдают через 7-10 дней после потенциального инфицирования вирусом ВИЧ. Метод ПЦР определяет уровень вирусной нагрузки и является одним из наиболее точных показателей эффективности медикаментозной терапии при ВИЧ-инфекции.

Пройти обследование на вирус типа HIV1 вы можете совершенно анонимно, обратившись в наш центр.

Правила подготовки

ОБЩИЕ ПРАВИЛА ПОДГОТОВКИ К АНАЛИЗАМ КРОВИ

Для большинства исследований кровь рекомендуется сдавать утром натощак, это особенно важно, если проводится динамическое наблюдение за определенным показателем. Прием пищи может непосредственно влиять как на концентрацию исследуемых показателей, так и на физические свойства образца (повышенная мутность - липемия - после приема жирной пищи). В случае необходимости можно сдать кровь в течение дня после 2-4-часового голодания. Рекомендуется незадолго до взятия крови выпить 1-2 стакана негазированной воды, это поможет набрать необходимый для исследования объем крови, уменьшит вязкость крови и снизит вероятность образования сгустков в пробирке. Необходимо исключить физическое и эмоциональное перенапряжение, курение за 30 минут до исследования. Кровь для исследования берется из вены.

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК. ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов.

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения.

ПЦР в реальном времени

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР.

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.

Взятие материала для диагностики ВИЧ

Забор биологического материала для проведения диагностики ВИЧ с помощью ПЦР проводится согласно определенным стандартам. Манипуляция проводится в процедурном кабинете. Используются одноразовые стерильные инструменты. Вскрытие пакета с инструментами проводится непосредственно возле пациента. Собранный материал помещается в стерильные пробирки, предварительно обработанные CrO3 (хромовая смесь). В качестве биологического материала выступает венозная кровь, которая сдается в утреннее время и на голодный желудок. За несколько дней до сдачи анализа следует исключить употребление алкоголя, жирной и острой пищи, прекратить прием медикаментозных препаратов.

Если отменить лекарственные средства невозможно, об этом следует сообщить до проведения анализа.

Дополнительно может быть взят мазок из уретры и влагалища, для выявления сопутствующих заболеваний, передающихся половым путем. Исследование проводится анонимно, результаты пациент получает лично в руки. При себе рекомендуется иметь удостоверение личности.

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа?

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа.

Проведение полимеразной реакции у новорожденного

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа. При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА?

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР - не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

• Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
• Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых.
• Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови.

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул - выдается положительное диагностическое заключение. В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный - тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.